Сенджера

Относительная легкость очистки образцов тРНК и мРНК, наряду с доступностью эндонуклеаз для РНК, обладающих различной специфичностью к основаниям, позволили впервые определить последовательности оснований в таких молекулах в 1965 г. Ранние методы Холли [28] и Захау [29] были вскоре вытеснены методами, разработанными Сенджером для определения последовательности 55 РНК. [c.193]

Взаимодействие пептида с 2,4-динитрофторбензолом ДИФ-метод, Сенджер, 1945 г.). Последующий гидролиз и идентификаш1Я Н-(2,4-динитрофенил) производного а-аминокислоты хроматографическими методами позволяет определить Ы-коицевую а-аминокислоту. [c.652]

Рис. 33.1. Схема фракционирования эфирорастворимых ДНФ-аминокислот по Портеру и Сенджеру [6].

Кислоторастворимые ДНФ-аминокислоты можно фракционировать на обработанном буферными растворами силикагеле, используя 0,2 М однозамещенный фосфат натрия и системы растворителей, предложенные Сенджером. [c.364]

В изучении строения и свойств белков выдающаяся роль принадлежит нашим соотечественникам — А. Я. Данилевскому, Н. Д. Зелинскому, В. С. Садикову, Д. Л. Талмуду и др., а также зарубежным ученым — Гофмейстеру, Фишеру, Шорму, Фромажо, Сенджеру и др. [c.383]

Первый белок, строение которого было полностью расшифровано, — гормон инсулин (работы Фромажо, Сенджера и др.). Его молекула оказалась состоящей из двух полипептидных цепей А и В (связанных двумя дисульфидными мостиками), которые удалось разделить. Полипептид А оказался состоящим из 21 аминокислотного остатка, полипептид В — из 30 остатков. В 1963—1964 гг, обе полипептидные цепи были синтезированы. [c.270]

Последние годы ознаменовались блестяшими успехами в изучении строения и функций важнейших биологически активных полимеров. Благодаря развитию новых методов разделения и очистки веществ (различные методы хроматографии, электрофореза, фракционирования с использованием молекулярных сит) и дальнейшему развитию методов рентгеноструктурного анализа и других физико-химических методов исследования органических соединений стало возможным определение строения сложнейших природных высокомолекулярных соединений. Изучено строение некоторых белков (работы Фишера, Сенджера, Стейна и Мура). Установлен принцип построения нуклеиновых кислот (работы Левина, Тодда, Чаргаффа, Дотти, Уотсона, Крика, Белозерского) и экспериментально доказана их определяющая роль в синтезе белка и передаче наследственных признаков организма. Широкое развитие получили работы по изучению строения смешанных биополимеров, содержащих одновременно полисахаридную и белковую части и выполняющих очень ответственные функции в организме. [c.58]

В настоящее время определение первичной структуры белка является в биохимических лабораториях обычной работой, но для того чтобы это стало обыденностью, потребовалось десять лет напряженной работы Ф. Сейджера, который разработал как общую стратегию метода, так и больщинство необходимых методик. Целью Сенджера, которой он достиг в 1955 г., было выяснение аминокислотной последовательности инсулина за исключительный вклад в химию белков в 1958 г. он получил Нобелевскую премию. [c.372]

Обсудим последовательные стадии определения первичной структуры небольшого пептида для белка эта процедура аналогична, но более громоздка. Сначала необходимо выяснить, какие аминокислоты находятся на концах цепи. Обратите внимание, что на рис. 40.1 одна концевая аминокислота содержит свободную а-аминогруппу, а другая концевая аминокислота — свободную а-карбоксильную группу. Эти аминокислотные остатки называют соответственно М-концевым и С-концевым. В соответствии с методикой, разработанной Сенджером в его работе с инсулином, сначала используется 1-фтор-2,4-динитробензол, который образует стабильное динитрофенильное производное с Ы-концевым остатком. После кислотного гидролиза модифицированная аминокислота отделяется и идентифицируется. Определение С-концевого остатка можно провести с помощью осторожной обработки ферментом карбоксипептидазой, которая специфически катализирует гидролиз С-концевой пептидной связи, отщепляя от полипептидной цепи единственную аминокислоту. Существуют также и другие методы определения Н- и С-конце-вых аминокислотных остатков, но два описанных являются наиболее распространенными. [c.374]

Браунли и Сенджер [109] анализировали меченые олигонуклеотиды, в молекулярные цепи которых входит до 50 остатков, методом одномерного электрофореза на ацетилированной целлюлозе, после чего переносили полосы на адсорбционный слой и проводили разделение методом ТСХ на слоях со смешанной DEAE-целлюлозой. [c.137]

У истоков ЭТОГО направления лежат работы Сенджера, которому удалось рас цифровать строение инсулина. Оказалось, что этот гормон состоит из двух полипептидных цепей (с 21 и 30 остатками аминокислот), соединенных друг с другом двумя дисульфид-н лми мостиками (см. выше). [c.590]

Первый белок, строение которого было полностью расшифровано,— гормон инсулин (работы Фромажко, Сенджера и др.). Задача расшифровки была несколько облегчена его сравнительно небольшой молекулярной массой (около 6000), а также тем, что его молекула оказалась состоящей из двух полипептидных цепей А и В (связанных двумя дисульфидными мостиками), которые удалось разделить. Полипептид А оказался состоящим из 21 аминокислотного остатка, полипептид В — из 30 остатков. В 1963— 1964 гг. обе полипептидные цепи были синтезированы по-видимому, в самое ближайшее время полный синтк инсулина будет завершен. Схема строения инсулина приведена на стр. 309. [c.308]

Первым белком, строение которого было полностью расшифровано, был гормон инсулин (работы Фромажо, Сенджера и др.). Задача расшифровки была несколько облегчена его сравнительно небольшим молекулярным весом (около 6000), а также тем, что его молекула оказалась состоящей из двух полипептидных цепей А и В (связанных двумя дисульфидными мостиками), которые удалось разделить. Полипептид А оказался состоящим из 21 аминокислотного остатка, полипептид В — из 30 остатков. Схема строения инсулина приведена на стр. 340 [c.339]

В настоящее время успехи молекулярной биологии достигли такого уровня, что становится возможным определять последовательности оснований для целых генов и для целых организмов. Первым организмом, полный генетический код которого удалось расшифровать, был один из вирусов — фаг фХ174. У этого фага всего 10 генов, а его полный генетический код состоит из 5386 оснований. Последовательность этих оснований установил Фред Сенджер — исследователь, впервые открывший последовательность аминокислот в одном из белков. За каждое из этих фундаментальных открытий он получил по Нобелевской премии. Теперь стало возможным синтезировать целые гены, что находит применение в генной инженерии. Следует ожидать, что в самом начале XXI в. станет возможным в [c.170]

В 50-е годы раскрыт один из наиболее сложных процессов — синтез холестерина, который является не только компонентом клеточных мембран и липоидов плазмы крови, но и предшественником в синтезе биологически активных стероидов, в том числе гормонов-анаболиков. За это открытие американский ученый К. Блок, немецкий ученый Ф. Линнен и английский ученый Дж. Корнфорд в 1961 г. были удостоены Нобелевской премии. В 1953 г. Дж. Уотсоном и Ф. Криком была определена структура нуклеиновых кислот, что положило начало расшифровке генетического кода. Эти авторы также были удостоены Нобелевской премии, ф. Сенджером расшифрована первичная структура гормона инсулина, что дало возможность синтезировать его и использовать в медицинской практике. В 1957 г. американский ученый Е.В. Сазерленд открыл универсальный передатчик действия гормонов и медиаторов на внутриклеточные процессы — [c.13]

Определение N-кoнцeвыx аминокислотных остатков. Метод ди-нитрофенилирования (ДНФ-метод). Метод был предложен еще в 1945 г. Сенджером . Он заключается в обработке пептида или белка динитрофторбензолом без нагревания в присутствии щелочи. При этом происходит арилирование а-аминогруппы N-кoнцeвoй аминокислоты и образуется динитрофенильное производное (I), подвергаемое далее кислотному гидролизу. Разрушение пептидных связей приводит к ДНФ-производному К-концевой аминокислоты (II) [c.72]

Однако наибольший интерес для исследователя представляют не олигопептиды, а высшие пептиды. Установлением их аминокислотного строения занимаются многие лаборатории мира. Высшими пептидами являются прежде всего пептидные гормоны. Классическим примером служит инсулин, строение которого установлено благодаря работам Сенджера. Пептидные гормоны выделяют из поджелудочной железы, гипофиза, щитовидной железы и из крови Не все из них получены в чистом виде, поэтому говорить об их строении еще рано. Но ряд соединений хорошо изучен и даже получен синтетически (табл. 7). [c.161]

Структура инсулина была установлена Сенджером Это циклический гетеродетный пептид, состоящий из двух цепей, соединенных двумя дисульфидными мостиками. В одной из цепей, кроме того, имеется внутренний дисульфидный мостик. Схематически молекула инсулина может быть изображена следующим образом [c.162]

Формула, предложенная Сенджером, в основном подтверждена работами Грассмана При изучении строения инсулина все его дисульфидные связи предварительно разрушались путем обработки надмуравьиной кислотой. Так как инсулин не содержит метионина и триптофана, которые при этом могли бы разрушаться, то оказалось возможным выделить в чистом виде полипептиды, соответствующие цепям А и В. Впоследствии для расщепления дисульфидных связей инсулина были применены восстановление с последующим аминоэтилированием и обработка сульфитом Препараты цепей А и В были выделены с помощью противоточного распределения или ионообменной хроматографии [c.163]

Затем каждый из полученных полипептидов подвергался частичному гидролизу с целью установления последовательности аминокислот. При этой работе, представление о размерах и трудоемкости которой можно составить из приводимой ниже схемы установления последовательности аминокислот в цепи В инсулина (схема 1), наиболее широко применялся реактив Сенджера — динитрофторбензол. ДНФ-Производные пептидов и аминокислот разделялись с помощью бумажной хроматографии и идентифицировались. [c.163]

Если структура инсулина правильно отражается формулой, предложенной Сенджером, то синтетически полученные цепи А и В инсулина должны при рекомбинации между собой и с цепями А и В, выделенными из природного белка, вести себя аналогичным образом. [c.167]

Таким образом впервые удалось осуществить химический синтез белка природного строения. Тем самым структура инсулина, предложенная Сенджером, получила полное и окончательное подтверждение. [c.169]

В методе, предложенном примерно в то же время Сенджером и соавторами, использован другой (ферментативный) подход к решению задачи секвенирования-ДНК (Запдег е1 а1., 1977]. Однонитевая ДНК здесь выступает в качестве матрицы для синтеза с помощью ДНК-полимеразы I радиоактивно меченной комплементарной нити ДНК. Этот синтез обрывается из-за присутствия в обычной смеси дезоксирибонуклеозидтрифосфатов еще и некоторого количества одного из дидезоксирибонуклеозидтри-фосфатов. Включение в синтезируемую нить ДНК такого дефектного нуклеотида делает невозможным ее дальнейшее удлинение. В результате этого синтез обрывается, причем на вполне определенном нуклеотиде, дефектный аналог которого введен в данную реакционную смесь. И опять для множества нитей матричной ДНК получается совокупность всех возможных фрагментов различной длины, радиоактивно меченных и оканчивающихся на одном и том же заранее известном нуклеотиде. [c.133]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология