Вирус обработка ферментами

Эксперименты, проведенные над отдельными компонентами ВТМ — белком и РНК, — показали следующее, В отсутствие РНК белок ВТМ не обладает инфекционной способностью. У изолированной РНК инфекционная способность понижена, но латентный период сокращается по сравнению с вирусом на одну треть. Пониженную инфекционную способность свободной РНК связывают с ее неустойчивостью. Поскольку инфекционная способность не изменяется при обработке ДНК-азой или протеолитическими ферментами, но исчезает при обработке РНК-азой, ясно, что она не обусловлена примесью ДНК или белков. (Свободная вирусная РНК разлагается под действием РНК-азы, но в самой вирусной частице белковая оболочка предохраняет РНК от действия этого фермента.) Инфекционностью обладают только высокомолекулярные фрагменты РНК особенно активна целая молекула РНК, молекулярный вес которой составляет 2 10 . Было показано, что инфекционность вирусных нуклеиновых кислот и отсутствие ее у вирусного белка — весьма общее явление, характерное как для РНК-, так и для ДНК-содержа-щнх вирусов. [c.363]

До сих пор попытки идентифицировать рецептор и объяснить природу фермента, разрушающего рецептор, у вируса гриппа С ве увенчались успехом. Было получено доказательство того, что рецептор на куриных эритроцитах для вируса гриппа С инактивируется обработкой формалином, но не окислением перйодатом [71]. Авторы наблюдали также, что вирус гриппа С способен агглютинировать эритроциты типа В большинства людей, но не эритроциты типа А. Природа вирусного рецептора и активности фермента, разрушающего рецептор, у вирионов гриппа С представляет собой наиболее нерешенные проблемы в понимании молекулярной биологии данного вируса. [c.290]

При выделении вирусов из таких тканевых экстрактов наилучшие результаты дают следующие методы а) дифференциальное центрифугирование б) осаждение сульфатом аммония в) центрифугирование в градиенте концентрации сахарозы г) центрифугирование в градиенте плотности СвС д) экстракция растворителями и нротиво-точное распределение между частицами растворенного полимера и е) обработка ферментами [469, 470]. [c.35]

Цптолизис. Для освобождения вируса, ассоциированного с клеткой, иногда применяют химическую обработку Чтобы разрушить зараженные клетки и клеточные обломки, используют ферменты (трипсин, гиалуронидаза и ре-цепторразрушающий энзим) и некоторые химические вещества (мочевина, дезоксихолат натрия). Обработка ферментами часто сочетается с обработкой дезоксихолатом натрия. Эти методы приемлемы в том случае, если данный вирус не инактивируется нри подобной процедуре. [c.38]

Обработка ферментами. Большинство вирусов, несмотря на их нукдеояротеидную природу, устойчиво к действию нротеолитических ферментов и нуклеаз, в то время как клеточные нуклеопротеиды и другие примеси значи тельно легче разрушаются этими ферментами 1115, 116, 117, 142, 379, 540, 715], Используя различную чувствительность вируса и клеточных высокомолекулярных нрнмесей к ферментам, можно произвести их частичную очистку Обработка ферментами позволяет гидролитически разрушать и переводить во фракцию низкомолекулярных соединений часть балластных белков и нуклеиновых кислот. Обработка нуклеазами особенно важна при исследовании свойств нуклеиновых кислот вирусов [48]. Обработка проте-азами необходима при изучении свойств белковых субъединиц вируса. [c.53]

Для получения силохромов с порами больших размеров (больше 60 нм) применяют гидротермальную обработку, позволяюш(ую одновременно устранять геометрическую неоднородность исходных аэросилогелей. Повышая давление пара воды в автоклаве до 15— 30 МПа, можно увеличить размер пор (1 до 500—2000 нм, и, соответственно, уменьшить 5 до 10 м /г. Объе пор и при этом не изменяется и, в зависимости от пористости исходного образца, составляет 1,2—1,7 см /г. Такие макропористые кремнеземы применяются для ситовой хроматографии полимеров, разделения вирусов и ихммобилизации ферментов. [c.50]

Домены эукариотической хромосомы отличаются от прокариотических доменов. Представление о доменах прокариотической хромосомы сформулировано на основании опытов по релаксации ДНК. Представление об эукариотических доменах опирается на опыты по электронной микроскопии митотических хромосом, с которых удалены гистоны. ДНК эукариот, точнее нуклеосомная фибрилла, находится в релаксированном состоянии. Обработка релаксирующим ферментом не изменяет ее конформации. Следует учитывать, что ДНК навивается на нуклеосомы спиралью. Если те.м или иным способом удалить гистоны с ДНК, то в ней возникают супервитки. Особенно нагляден этот эффект при использовании в качестве модели хроматина кольцевой мини-хромосомы вируса ОВ-40 длиной около 5 т. п. о. Как видно из рис. 127, мини-хромосома на электронных микрофотографиях представляет собой релаксированную структуру. После удаления гистонов ее ДНК суперспирализована. Существует предположение, что тран-скрипционно активные петли эукариотической хромосомы все-таки находятся в торзионно-напряженном состоянии и релакси-руют под действием топоизомераз. [c.246]

Плотность супервитков (степень суперспиральности) молекулы ДНК обычно выражают величиной а, равной числу супервитков на 10 пар оснований [80, 82]. Для встречающихся в природе кольцевых молекул ДНК а чаще всего отрицательна наиболее типичное ее значение —0,05 ( 5 супервитков на 1000 пар оснований). Присутствие супервитков в кольцевых молекулах ДНК можно легко установить, поскольку при этом меняется константа седиментации ДНК [81]. Так, суперспираль-ная природная ДНК вируса полиомы седиментирует довольно быстро. После внесения разрыва в одну из цепей двойной спирали посредством кратковременной обработки ее ферментом образуется релаксирован- [c.139]

Фермент альдолаза (мол. вес. 150 000) прн обработке К сло-той (pH 2,9 или ниже) диссоциирует на три цепи с молекулярным весом 50 000 каждая, имеющих идентичную иерЕичи то структуру. При возвращении pH раствора к нейтральным значениям три полипептидные цепи ассоциируют, образуя натшзную четвертичную структуру. Известно много другпх примеров ассоциации одинаковых полипептидных цепей. Крайним случаем такого рода является белок вируса табачной мозаики, образующийся при ассоциации 2000 идентичных единиц, причем л олеку-лярный вес агрегата достигается 3-10 . Некоторые белкп состоят из цепей нескольких типов. Например, гемоглобин, белок крови, переносящий кислород, состоит из четырех цепей, по две каждого вида. [c.382]

Сохранение биологической специфичности в химически измененных ферментах и вирусах имеет такое же важное значение, как и ее потеря. Возможность получения исключительно кислых или основных белков с неизмененной физиологической активностью имеет, разумеется, как теоретический, так и практический интерес, особенно, в случае инсулина. Заслуживает внимания тот факт, что некоторые ацилированные производные вируса табачной мозаики сохраняют свою вирулентность, и ясно, что способность к химической модификации не является свойством, передающимся по наследству. Однако тот факт, что эти производные вызывают неодинаковую реакцию у двух хозяев, представляет собой замечательное явление и заслуживает дальнейшего исследования. Кроме того, следует сравнить влияние химического замещения в случае родственных разновидностей вирусов или сходных ферментов, а также в случае гормонов, полученных из различных биологических видов. Несмотря на то, что динитрофенилпроизводные трех разновидностей вируса табачной мозаики провоцировали такую же относительную реакцию у двух различных хозяев, какую вызывал и нормальный вирус, их чувствительность по отношению к обработке ДНФБ была различной. [c.353]

Единственным убедительным тестом, неопровержимо доказывающим, что инфекционный агент но своей природе представляет собой нуклеиновую кислоту, служит его чувствительность к нуклеазам или фосфодиэстеразам. Находясь внутри вириона, нуклеиновые кислоты более или менее полностью защищены от нуклеаз во внешней среде. Допустим, что при обработке каким-то определенным ферментом инфекционность данного вируса не снижается. Если при такой же обработке препарата нуклеиновой кислоты, полученного из этого же вируса, инфекционность будет утрачена, то можно считать доказанным, что инфекционность не связана с загрязнением препарата остаточиБши" интактными вирусными частицами [144, 1621. [c.177]

Некоторые ферменты находят применение в медицине как лекарственные препараты. Например, при желудочных заболеваниях, сопровождающихся снижением содержания пепсина в желудочном соке, для улучшения пищеварения назначают препараты пепсина (заместительная терапия). Разные протеолитические ферменты применяются для обработки ран гидролизуя белки разрушенных ьлеток, ферменты способствуют очищению раны и уменьшению воспалительных явлений. Для лечения вирусного конъюнктивита успешно применяют глазные капли, содержащие фермент ДНКазу, он разрушает ДНК вируса и тем самым излечивает болезнь. Аспарагиназу применяют для лечения некоторых форм лейкозов (рак белой крови). Лечение основано на том, что аспарагин (аминокислота, необходимая для синтеза белков) в лейкозных клетках не синтезируется и клетки получают его из плазмы крови. Если ввести в кровь боль- [c.123]

Были обнаружены ферменты, специфически расщепляющие 0-гликозид-ные связи, соединяющие N-ацетилгексозамин с серином и треонином, и N-гликозидную связь между N-ацетилглюкозамином и амидной группой аспарагина (том 1, гл. 10). Для изучения строения и конфигурации углевод-пептидной связи было бы удобно использовать гликозидазы, действующие только на определенный тип связи. Если бы были найдены гликозидазы, действующие на нативный гликопротеин, можно было бы получить нерас-щепленный апопротеин. Пока еще такой возможности нет. Даже при очень мягкой щелочной обработке, при которой происходит расщепление 0-глико-зидных связей, соединяющих углеводный и сериновые или треониновые остатки, происходит расщепление некоторых пептидных связей. Ферментативное отщепление гетеросахаридов может помочь оценить роль углеводного участка молекулы в биологической активности определенных гликопротеинов. Данные, полученные при обработке нейраминидазой клеточных рецепторов вируса гриппа и некоторых гормонов, убедительно показали важную роль нейраминовой кислоты в биологической активности этих белков. [c.295]

Неопровержимым доказательством того, что носителем наследственных свойств вирусов служат именно нуклеиновые кислоты, можно считать демонстрацию инфекционных свойств очищенной нуклеиновой кислоты. Как уже указывалось, очищенная РНК ВТМ обладает слабой инфекционностью. Этот факт сначала объясняли тем, что в составе очищенного препарата РНК могло сохраниться некоторое количество ин-тактных вирусов. Однако дальнейшие исследования показали, что ин-фекционность препаратов РНК ВТМ разрушается в результате обработки очищенным ферментом поджелудочной железы млекопитающих, называемым рибонуклеазой. Этот фермент гидролизует незащищенную РНК, но не влияет на инфекционность интактных частиц ВТМ. Пониженная способность к инфекции препаратов РНК ВТМ по сравнению с интактными вирусами объясняется отсутствием белковой оболочки, защищающей РНК от гидролиза. Рибонуклеазы растения разрушают большую часть РНК до того, как они проникают в клетку. Однако тщательные исследования показали, что одна-единственная молекула РНК интактного вируса способна заразить растительную клетку и привести к образованию полноценных частиц ВТМ. [c.100]

Вопрос о возможной реакционной связи пероксидазы с белками имеет принципиальное значение для понимания роли этого фермента в зараженном организме как животных, так и растений. Антивирусное действие системы пероксидаза хрена—йодид калия—перекись водорода было испытано для вируса мозаики южных бобов, который быстро инактивировался при соответствующей обработке [Urs, Hill, 1978]. Так как основными субстратами фермента пероксидазы являются фенольные соединения, то система пероксидаза—йодид калия—перекись водорода и фенолы могут составлять часть общего защитного механизма растений. Поэтому в настоящее время необходимы поиск и разработка тестов оценки функциональной активности иммунных реакций растительных организмов, в которых задействована и пероксидаза. [c.31]

Эндоцитозные вакуоли у простейших можно назвать прели-зосомами, поскольку они содержат некоторые лпзосомные ферменты и имеют низкое значение pH. Эндосомы и вакуоли клеток животных (например, фибробласты), как правило, также имеют рНб в матриксе везикул. Обработка клеток ЫН4С1 блокирует указанные стадии пиноцитоза, в том числе пиноцитоз некоторых вирусов. Однако если клетки обрабатывать ЫН4С1, то спустя 3—4 мин после начала пиноцитоза вирусная инфекция не тормозится, поскольку после слияния эндосом и вакуолей с лизосомами происходит секреция нуклеокапсид в цитоплазму клеток. [c.19]

Высокая селективность действия иммуносенсоров достигается за счет специфичности взаимодействий типа антиген — антитело, фермент — субстрат и др. В многочисленных работах на эту тему описана иммобилизация различных белковых антител [154, 164-168] и применение данных сенсоров для определения пестицидов, вирусов, бактерий и др. Наиболее распространенная схема иммобилизации антител включает последовательную обработку поверхности ПКМ 7-аминопропилтризтоксисиланом, глутаровым альдегидом, а затем иммобилизуемым соединением. Для ПКМ с золотыми электродами широко используются самособирающиеся монослои тиолов и других сераорганических соединений [169, 170[. Описано применение ПКМ для исследования связывания ДНК [171[ и РНК [172] с поверхностью и их определения в растворе [173]. [c.325]

Открытие системы 2,5-oligo (А) вызвало большой интерес действительно, обработка интерфероном индуцирует образование фермента, синтезирующего активатор латентной нуклеазы которая может в свою очередь расщеплять вирусные мРНК и таким образом подавлять синтез вирусных белков [33, 143]. Однако пока лишь строят догадки относительно значения этого механизма для подавления размножения вирусов. Во-первых, неясно, как обеспечивается специфичность и избирательность. Нет убедительных доказательств того, что РНКаза L разрушает вирусные мРНК быстрее, чем клеточные [167, 189]. Во-вторых, [c.60]

Смотреть страницы где упоминается термин Вирус обработка ферментами: [c.43] [c.284] [c.174] [c.263] [c.81] [c.80] [c.280] [c.22] [c.163] [c.195] [c.246] [c.288] [c.123] [c.14] [c.288] [c.92] [c.72] [c.396] [c.57] [c.26] [c.81] [c.100]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология