Гидродинамическая хроматография величина

Основной вывод, который следует из всех перечисленных в этом разделе работ, состоит в том, что согласно теории при эксклюзионной хроматографии Ка является функцией только отношения геометрических размеров макромолекул и пор сорбента, т. е. величины, пропорциональной [т] ] М или гидродинамическому объему макромолекулы. [c.81]

Из обсуждения в разд. 1.3.2 и 1.4.2 следует, что в препаративной хроматографии используют два типа эффективности собственную эффективность колонки, которая определяется динамическими и гидродинамическими свойствами упакованного слоя, конструкцией аппаратуры, свойствами материала насадки и т. д., разделительную эффективность, которая существенно зависит от природы и количества образца и физико-химических характеристик разделительной системы. Число тарелок N используется как мера любого типа эффективности, но первая эффективность обычно определяется при идеальных, а последняя — при реальных условиях. Как отмечено выше, собственная эффективность колонки измеряется при малых нагрузках в условиях, когда изотерма адсорбции или распределения линейна (ср. разд. 1.4.4). Каждая колонка, используемая в препаративной хроматографии, должна иметь собственную эффективность, измеренную в аналитических условиях (малые нагрузки), как можно большую для данной комбинации конструкции колонки и материала насадки. Эмпирически установлено, что длина, или высота, тарелки к в эффективной колонке приблизительно равна удвоенному диаметру частиц ((/р), которыми упакована колонка. Таким образом, колонка длиной 30 см, заполненная насадкой с размером частиц 10 мкм, должна содержать примерно 15 тысяч тарелок в идеальных условиях (/1 2 р = 2-10мкм = = 20 мкм или 0,002 см 30 см//г= 15000). Частицы размером 100 мкм в той же самой колонке должны давать 1500 тарелок (30 см/(2-0,01) = 1500). Многочисленные факторы, приводящие к уменьшению этой величины для идеальной колонки, показанные на рис. 1.6, рассматриваются в работах [39—47, 50—59] и не будут здесь анализироваться подробно. [c.36]

Нетрудно заключить, что возрастание Оу, а следовательно, и д может быть достигнуто увеличением 8, Кй, 8, 8" ш. Ь при сохранении отношения й Ь, т. е. одновременно с соответствующим увеличением р. Гидродинамическое сопротивление колонки при этом не изменяется, однако расход сорбента и растворителя увеличивается. К этим же результатам приводит увеличение 5, а увеличение Кй, 8 ш 8 " повышает расход только элюента. Рост величины снижает селективность колонки. Поэтому оптимизация препаративной хроматографии должна проводиться о учетом относительной ценности сорбента, растворителя и времени эксперимента. Перегрузка колонки при препаративной хролгатографии может быть получена не только при введении избыточной массы вещества, но и при большом объеме пробы. [c.158]

С повышением темпердтуры падает вязкость подвижной фазы, а следовательно, и гидродинамическое сопротивление столбика сорбента соответственно сокращается время достижения равновесия. Теоретически верхним пределом температуры в колонке служит та величина, при которой наступает тепловая денатурация белков. На практике приходится работать при более низкой температуре, в особенности при наличии в исследуемой смеси протеаз и других гидролаз. В ряде случаев, в частности при обработке тканевых экстрактов, рекомендуется работать при температуре близкой или ниже О °С и в буфере, содержащем несколько процентов изопропанола. В этом нет необходимости, если рн среды не совпадает с оптимальной областью действия гидролаз, или в среде присутствуют ингибиторы протеаз, или выделение ведут в присутствие денатурирующих агентов, таких, как солянокислый гуанидин или мочевина, наконец, когда исследуемый белок отделяют с помощью специфического сорбента (например, при аффинной хроматографии) [1]. [c.422]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология