Рибонуклеаза и инфекционность РНК ВТМ

В этом же году А. Гирер и Шрамм независимо пришли к такому же заключению и убедительно показали, что именно РНК является инфекционным компонентом частиц ВТМ. Они установили, что при центрифугировании раствора молекул РНК, выделенных иэ частиц ВТМ, седиментация инфекционного начала происходит со скоростью, характерной для молекул РНК, и примерно в десять раз медленнее, чем это характерно для интактных частиц ВТМ. Более того, инфекционность раствора немедленно исчезает при добавлении следовых количеств фермента рибонуклеазы вместе с тем такое воздействие не влияет на инфекционность интактных вирусных частиц. [c.465]

Неопровержимым доказательством того, что носителем наследственных свойств вирусов служат именно нуклеиновые кислоты, можно считать демонстрацию инфекционных свойств очищенной нуклеиновой кислоты. Как уже указывалось, очищенная РНК ВТМ обладает слабой инфекционностью. Этот факт сначала объясняли тем, что в составе очищенного препарата РНК могло сохраниться некоторое количество ин-тактных вирусов. Однако дальнейшие исследования показали, что ин-фекционность препаратов РНК ВТМ разрушается в результате обработки очищенным ферментом поджелудочной железы млекопитающих, называемым рибонуклеазой. Этот фермент гидролизует незащищенную РНК, но не влияет на инфекционность интактных частиц ВТМ. Пониженная способность к инфекции препаратов РНК ВТМ по сравнению с интактными вирусами объясняется отсутствием белковой оболочки, защищающей РНК от гидролиза. Рибонуклеазы растения разрушают большую часть РНК до того, как они проникают в клетку. Однако тщательные исследования показали, что одна-единственная молекула РНК интактного вируса способна заразить растительную клетку и привести к образованию полноценных частиц ВТМ. [c.100]

Геном пикорнавирусов представлен одноцепочечной РНК, выполняющей функцию мРНК. Удельная инфекционность изолированной РНК составляет примерно одну миллионную часть от инфекционности вириона. О том, что эта инфекционность действительно связана со свободной РНК, а не со следовыми количествами интактных вирионов, свидетельствует ее чрезвычайно высокая чувствительность к рибонуклеазе (<0,01 мкг/мл). В связи с этим при выделении инфекционной РНК работают Б хирургических перчатках, чтобы предотвратить загрязнение препарата микроскопическими частичками, содержащими нук-леазы, которые могут попасть с кожи. Напротив, инфекционность интактных вирионов, где РНК защищена белковой оболочкой, совершенно не изменяется при воздействии рибонуклеа-зой, даже когда ее концентрация в миллион раз превышает упомянутую выше величину. Для утраты инфекционности достаточно, чтобы в РНК был внесен одиночный разрыв, незави симо от того, изолирована ли РНК или находится в составе вирусной частицы. [c.194]

В 1959 г. Браунхилл с сотр. [237] показал, что активность рибонуклеазы можно блокировать адсорбцией фермента на бентоните и тем самым исключить ее из обрабатываемого материала. Эти свойства бентонита были использованы для получения более активных РНК из вируса пятнистости бобов, ящура [791], японского энцефалита 595]. Инфекционность препаратов РНК, выделенных в [c.164]

Некоторые исследователи сообщают о потере инфек-ционности РНК при центрифугировании в сахарозном градиенте при нейтральном pH [280, 622]. В подобных случаях удобнее пользоваться градиентом плотности глицерина (10 30%). Понс [662] предположил, что сахароза содер жит следы рибонуклеазы, Френкель-Конрат и Сингер [330 действительно и ока за л и, что причиной потери инфекционности РНК вируса табачной мозаики при очистке в сахарозном градиенте является присутствие рибонуклеазы. Ддя подавления активности рибонуклеазы можно применять додецилсульфат натрия в концентрации 0,5% при [c.178]

II. Действие ферментов. Одноцепочечная вирусная РНК Крайне чувствительна к действию рибонуклеаз. Поскольку достаточно только одного разрыва в молекуле РНК, чтобы она потеряла инфекционность, крайне важно избежать действия фермента в процессе выделения РНК. В очищенных вирусных препаратах часто присутствуют следы рибонуклеаз из листьев. Они должны быть удалены либо из интактного вирусного препарата, либо во время выделения РНК, либо, наконец, в ходе этого процесса следует использовать ингибиторы рибонуклеаз. Деградация под действием нуклеаз может быть также сведена к минимуму, если использовать условия, при которых аетивность фермента минимальна — низкая температура (0—4 °С), соответствующие значения pH и ионной силы. [c.54]

Экстракты из листьев, полутенгше на 2-ж или 3-й день после заражения, обнаруживали значительную инфекциоииость в зоне градиента, соответствующей иуклеиновой кислоте если же экстракты получали через 3 педели после заражения, то инфекционность в этой зоне оказывалась очень низкой. На основании ряда контрольных опытов было сделано заключение, что инфекционность в зоне, соответствующей нуклеиновой кислоте, следует приписать либо РНК, которая имелась в листе в свободном виде, либо некой лабильной форме ВТМ, которую можно обнаружить лишь на очень ранней стадии инфекции. Эти результаты были затем подтверждены с применением несколько иного метода экстракции. При этом исследовалось так ке влияние времени, прошедшего после заражения, на содержание материала, чувствительного к рибонуклеазе (фиг. 27) [1475]. [c.160]

Количество такого материала быстро увеличивалось между 12 и 36 ч (считая с момента заран ения), а затем быстро падало, начиная с 48 ч, т. е. в то время, когда скорость синтеза вируса заметно снижалась. Примерио такой и должна быть картина, если материал, чувствительный к рибонуклеазе, является предшественником вируса. Небольшое количество свободной РНК вируса было обнаружено с помощью электрофореза в сырых экстрактах из листьев табака, зараженных Х-вирусом картофеля [1204]. Однако инфекционный материал в этих опытах имел разную электрофоретическую подвижность и ие был достаточно хорошо охарактеризован. [c.160]

При смешивании интактного ВТМ с панкреатической рибонуклеазой происходит стабилизация ВТМ к щелочной деградации (pH ri 10), onj)o-вояодающаяся, одиако, потерей инфекционности (см. стр. 334). [c.352]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология