Разрушение клеток выбор метода

Созревание аденовирусов происходит в ядрах зараженных клеток. Вирусы этой группы выходят в цитоплазму и культуральную среду, разрушая клетки. Таким образом, как правило, большая часть вируса (до 90%) ассоциирована с клеткой, и эффективность высвобождения вируса из ядерного и клеточного материала зависит от степени разрушения ядерных мембран. В клетках, зараженных вирусом, ядерные мембраны довольно хрупкие, поэтому на поздних стадиях инфекции вирус легко переходит в цитоплазму. Существует множество методов разрушения клеток. Выбор того или иного метода для каждого конкретного случая зависит от количества и природы клеток, подлежащих экстракции. Предлагаемый нами метод удобен для очистки аденовируса 5 типа [11]. [c.263]

Мы пришли к выводу, что для самых разнообразных иммунологических исследований необходимо получать максимально возможное количество нативного белка. Это легче всего достигается с помощью классических хроматографических методов, детально описанных в разд. 5.3.3.3, которые наиболее успешно работают при использовании экспрессирующих систем на основе плазмид pUR. Другие методы применяют, когда возникают сложности с выходом, растворимостью или стабильностью гибридного белка. Например, к выделению гибридных белков методом ДСН-электрофореза в ПААГ следует прибегать в последнюю очередь, а не использовать его сразу из-за его простоты, поскольку денатурированные ДСН белки меняют свои иммуно-генные свойства и с их помощью не всегда удается получить антисыворотку к нативному белку. Если антисыворотка в основном будет использоваться в вестерн-блот-анализе, то в этом случае денатурированные под действием ДСН иммуногены могут оказаться пригодными. Иммуноаффинные методы очистки можно эффективно использовать в ограниченном масштабе, поскольку, к сожалению, элюируемые белки, как правило, необратимо денатурированы реагентами, используемыми для разрушения комплексов антиген—антитело. С помощью хроматографии на АФТГ-агарозе можно получить чистый растворимый белок, но метод не очень эффективен и дает очень низкий выход белков, содержащихся в клетке в небольшом количестве или обладающих низкой стабильностью. Выбор того или иного метода поможет сделать анализ результатов прикидочного выделения и очистки. [c.155]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология