Растворимость белков

Высаливание белков концентрированными растворами солей является одним из основных методов фракционирования белковых смесей на альбумины и глобулины. Понижения растворимости белков можно достичь также добавлением спирта и действием низкой температуры. На сочетании действия спирта, солей и охлаждения основаны способы детального фракционирования белковых смесей по Кону например, из сыворотки крови этим путем выделено свыше 12 белков. [c.369]

J2. Как обычно меняется растворимость белков с изменением pH Почему [c.192]

Работа 8. Разделение растворимых белков саркоплазмы методом электрофореза на бумаге [114] [c.127]

Некоторые фибриллярные белки практически нерастворимы в воде, так что все остальные компоненты препарата можно удалить растворением. Растворимые белки чаще всего осаждают из водных растворов путем высаливания, которое сводится к добавлению большого количества соли, например сульфата аммония. Разные белки осаждаются прн разных концентрациях соли, поэтому можно отделить фракцию белков, осаждающихся в заданном интервале концентраций, а затем очищать эту фракцию дальше. Методы, основанные на таком поэтапном осаждении, широко используются как первый шаг очистки, поскольку они позволяют получать сразу большие количества материала. [c.159]

При содержании в воде электролитов (солей, кислот, оснований) ее растворяющая способность по отношению к неэлектролитам изменяется иногда она увеличивается, но в большинстве случаев становится меньше. Например, при добавлении к прозрачному раствору желатины обычной поваренной соли происходит помутнение раствора за счет уменьшения растворимости белка. Это явление называют высаливанием, а противоположное ему по эффекту — всаливание м. [c.218]

Кислотные и основные группы белка концентрируются на внешней стороне белка. Они являются гидрофильными группами в отличие от гидрофобных групп, например алифатических цепей, и склонны увеличивать растворимость белка. [c.603]

Все компоненты плазмы крови человека (рис. 20.1) можно разделить на основании разной растворимости белков в растворах этилового спирта с различными значениями pH, содержащих небольшие концентрации солей при низких температурах. Альбумин, который составляет около 60 вес. % белков плазмы крови, в значительной степени обуслов- [c.603]

Растворы ВМС, образующиеся с понижением свободной энергии и находящиеся в равновесном состоянии, агрегативно устойчивы, как и истинные растворы. Их устойчивость главным образом определяется растворимостью данного ВМС в растворителе, а другие факторы, которые играют основную роль в устойчивости лиофобных коллоидов, например заряд частицы и сольватирующая способность, практически не влияют на устойчивость. Так, известно, что белки устойчивы в изоэлектрической точке, где дзета-потенциал равен нулю. Поэтому теории, которые объясняют агрегативную устойчивость растворов ВМС действием электрического заряда либо сольватацией, в настоящее время надо признать устаревшими. Заряд и сольватация, конечно, играют роль, но только в той степени, в которой они влияют на растворимость ВМС. Так, растворимость белков зависит от pH она минимальна в изоэлектрической точке. При смещении от изоэлектрической точки увеличение заряда и гидратация молекул белка повышают растворимость его в воде, и поэтому увеличивается устойчивость раствора ВМС. [c.368]

При электродиализе растворов белков их pH приближается к изоэлектрической точке. Как будет показано ниже, в изоэлектрической точке растворимость белков минимальна, что может быть использовано для их осаждения из растворов. [c.27]

Высаливание из водных растворов можно проводить не только электролитами, но и органическими веществами (этанолом, ацетоном), способными взаимодействовать с водой (гидратироваться) и понижать растворимость высокомолекулярного вещества. Например, для фракционирования белков, т. е. разделения их на фракции с относительно одинаковой молекулярной массой, в исследуемый водный раствор добавляют спирт для уменьшения растворимости белков. Растворимость белков, как и других полимеров, зависит от молекулярной массы чем она больше, тем растворимость хуже. Поэтому при введении в водный раствор белка небольшого количества спирта из раствора выделяется фракция с наибольшей молекулярной массой. Последовательно добавляя к раствору белка все новые порции спирта, можно разделить белок па любое число фракций. Каждая последующая фракция белка будет иметь меньшую среднюю молекулярную массу. [c.259]

Выделение и очистка. — Выделение гомогенных белков в нативном состоянии — весьма трудная задача, так как большинство белков весьма чувствительно к действию различных агентов и находится в виде смеси близких по свойствам веществ. Растворимость белка минимальна в изоэлектрической точке, а так как изоэлектрические точки разных белков лежат в разных интервалах pH, то создание определенного значения pH ведет к отделению одного компонента смеси от других, особенно при добавлении определенного количества соли или смешивающегося с водой органического растворителя — этилового спирта или ацетона. [c.689]

Для определения содержания иммобилизованного белка можно в принципе использовать все известные методы, применяющиеся при работе с растворимыми белками. Однако из-за светорассеяния, характерного для гелей агарозы, быстрого оседания их частиц, а также адсорбции красителей на гелях в определение содержания белка внесены отдельные модификации. Могут быть рекомендованы спектрофотометрический и колориметрический методы. [c.84]

Действие солен на раствор белка заключается в первую очередь не только в его коагуляции (объединении мелких частиц в более крупные), сколько в пониженной растворимости белков в растворах солей, где основная масса воды связана гидрофильными ионами. [c.211]

Структурообразующие белки тела человека называют фибриллярными белками (или волокнистыми, они имеют вытянутую, нитеобразную форму). Важнейшие фибриллярные белки животных — это кератин и коллаген белок кератин входит в состав волос, ногтей, мышц, рогов, игл и перьев коллаген — структурный компонент сухожилий, кожи, костей, соединительной ткани. При кипячении коллаген гидролизуется и образует растворимый в воде белок, называемый желатиной. В теле человека имеются растворимые белки, именуемые глобулярными белками. Альбумины, такие, как сывороточный альбумин, получаемый из крови животных, овальбумин яичного белка, лактальбумин молока, растворяются в холодной воде и слабом растворе соли. Глобулины, например глобулины плазмы крови, фибриноген, глобулин яичного белка, глобулин молока, растворяются в разбавленных растворах солей, но не в холодной воде. [c.384]

С растворимыми белками ситуация более сложна, но и в этом случае цепь может складываться по-разно му здесь также происходит соответствующая перестройка системы водородных связей и гидрофобных взаимодействий между боковыми группами. Одни конформации, в принципе возможные для глобулярного белка, более устойчивы, чем другие, и обычно белок принимает одну из энергетически наиболее выгодных конформаций. Не исключено, одпако, и наличие других конформаций с почти той же энергией. Отсюда следует, что многие белки могут почти беспрепятственно переходить из одной конформации в другую — этот факт имеет очень большое биологическое значение. [c.105]

Синтетическое волокно. Полиамидные смолы. Волокнистые материалы животного происхождения (шелк, шерсть и др.) являются белковыми веществами. Их молекулы построены из длинных цепей аминокислот, связанных между собой по типу амидов. Из растворимых белков можно приготовить искусственные волокна, пропуская под давлением растворы белков (например, казеин) через фильеры. Получаемые нити последующей обработкой формальдегидом переводят в нерастворимое в воде состояние. [c.397]

Общий белок в тканях определяют по азоту после их минерализации. Растворимые белки экстрагируют из тканей, осаждают и после растворения осадка в щелочи определяют различными методами. [c.80]

Г. обнаружены во всех организмах, за исключением дрожжей. У млекопитающих этих ферментов больше всего в печени (3-10% от растворимых белков) они содержатся также в почках и слизистой оболочке тощей кишки. Г. участвуют в детоксикации разл. в-в (гл. обр. метаболитов) в результате превращений продукта взанмод. глутатиона [c.589]

Все белки денатурируются под действием кислот или при нагревании, что проявляется в коагуляции и уменьЩенин растворимости, а также в потере специфических биологических свойств. Определение молекулярного веса белков является трудной задачей. Исходя из содержания железа в гемоглобине крупного рогатого скота, было найдено, что молекулярный вес этого белка лежит в пределах 16 000— 17 000. Молекулярный вес казеина, определенный по содержанию легко отщепляющейся серы, равен 16 000 и т. д. Подобные выводы, однако, справедливы лншь прн том условии, что данный белок однороден и содержит в своей молекуле только один атом того элемента, который используется для расчета молекулярного веса. Криоскопическое определение молекулярного веса затрудняется тем, что даже растворимые белки образуют коллоидные растворы наблюдаемое малое понижение точки плавления соответствует большому весу мицеллы. Более подходящими являются методы, основанные на определении скорости диффузии и вязкости. Помимо них практическое значение приобрел предложенный Сведбергом способ определения велич1п-1ы частиц по скорости седиментации в ультрацентрифуге. [c.396]

Рисунок в дополнении 2-В иллюстрирует высокоэффективное разделение растворимых белков Е. соИ. В белки были включены С-аминокислоты. [c.194]

Разделение белковой смесн возможно прн добавлении смешивающихся с водой органических растворителей, таких, как этанол нлн ацетон фракционирование растворителем), что ведет к снижению диэлектрической проницаемости системы. В результате снижаются гидратация и растворимость белка и прн достаточно высокой [c.346]

Многие реагенты способны вызывать осаждение или коагуляцию коллоидно-растворимых белков. Осаждение может быть обратимым и необратимым иными словами, выпавшее в осадок вещество может снова растворяться или же становится нерастворимым. Кипячение растворов белков, особенно при добавлении уксусной кислоты и хлористого натрия или других электролитов, приводит к необратимой коагуляции белка. Эта реакция является одной из наиболее часто применяемых для обнаружения растворенных белковых веществ (например, для открытия белка в моче). Необратимое осаждение вызывают также минеральные кислоты (азотная, платимохлористоводородная, фосфорновольфрамовая, фосфорномолибдеповая, метафосфорная, железосннеродистая), пикриновая кислота, таннин и соли тяжелых металлов. Белки сохраняют растворимость, если их осаждать из водных растворов спиртом и ацетоном кроме того, обратимое осаждение может быть вызвано различными нейтральными солями, например сульфатами аммония, натрия и магния. Для этого необходимы определенные концентрации солей, минимальная величина которых зависит от вида белка (ср. альбумины и глобулины). [c.397]

Важнейшей областью применения электрофореза является анализ биоколлоидов, например анализ смесей белков в клиническом анализе. Белки, как амфотерные полиэлектролиты, обладают собственными зарядами, зависящим от pH среды. Регулируя значение pH, можно в широких пределах менять их подвижность и даже изменить направление движения в процессе электрофореза. Для каждого белка при определенном значении pH общее число положительных зарядов равно общему числу отрицательных зарядов. Эта иэоэлектрическая точка, при которой отсутствует движение частиц, является характерной величиной для определенного белка. Растворимость белка в этой точке минимальна. Подбирая соответствующие буферные растворы для установления определенной скорости движения и растворимости веществ, можно приспособить процессы электрофореза для решения разных проблем разделения веществ. Таким образом, электрофорез превосходит метод бумажной хроматографии. Кроме того, при помощи электрофореза, особенно при высоком напряжении, можно проводить разделение неионогенных веществ (например, сахар в виде боратного комплекса) [791. Методом электрофореза можно также определять изоэлектрические точки амфотерных веществ или заряды коллоидных частиц (по направлению движения). [c.387]

При денатурации нарушаются форма и размеры молекул изменяется удельная оптическая активность белков увеличивается в>гЗкость растворов, так как глобулярная форма белков раскручивается с образованием ыитепидных молекул уменьшается растворимость белков и степень набухания происходит снятие с коллоидных частиц электрического заряда и др. [c.209]

В настоящее время наиболее совершенными считаются иммунологические методы исследования плазменных или сывороточных белков. Эти методы обладают высокой специфичностью и основаны нз иммунопреципитационных реакциях. Последние представ-ляют собой реакции между растворимыми белками —антигенами и растворимыми белками — антителами в результате их взаимо- [c.240]

Высокую активность ззз гистоауторадиографически установили р1гке1 и соавт. (1963) в ЖКТ, легких, надпочечниках и коже крыс в период от 5 до 30 мин после внутрибрюшинного введения меченого цистамина в дозе 100 мг/кг. Моп(1оу1 и соавт. (1962) определяли 8-цистамин в растворимых белках и субклеточных структурах большинства органов крыс после внутривенного введения протектора. Высказано предположение, что степень защиты отдельных тканей связана с концентрацией цистамина в их субклеточных структурах. Уже через 5 мин после внутривенного введения цистамина и АЭТ Владимиров (1967) обнаруживал их присутствие в митохондриях клеток селезенки и печени мышей. Тотальное гамма-облучение мышей (6 Гр) не влияло на распределение цистамина в субклеточных структурах. Через 30 мин после внутрибрюшинного введения цистамина мышам и крысам его внутриклеточное распределение у этих видов животных существенно не отличалось. Увеличение дозы цистамина у мышей приводит к повышению его содержания во всех субклеточных фракциях селезенки и печени, особенно в ядрах клеток [Владимиров, 1968]. Довольно быстро, в течение 5 мин, [c.45]

Рассмотрению возможностей обратнофазовой гидрофобной хроматографии белков в основном посвящен сравнительно недавно опубликованный обзор [Rubinstein, 1979]. Основные его выводы совпадают с тем, что было сказано выше при рассмотрении обратнофазовой гидрофобной хроматографии пептидов. Для белков с молекулярной массой в интервале 12—30 тыс. Дальтон автор отдает предпочтение силикагелям, модифицированным октилсиланом (Са). В качестве органического компонента элюента, по его мнению, следует предпочесть градиент концентрации пропанола, вплоть до 40%-ной концентрации, если позволяет растворимость белка. Для получения узких пиков рекомендуется в качестве водного компонента использовать буфер высокой (примерно 1 М) концентрации, подавляющий ионное взаимодействие белка с силанольными группами матрицы. При pH 5—6 разрешение получается обычно хуже, чем при pH 4 (формиатно-пиридиновый буфер) или 7,5 (Na-ацетатный буфер). Существенно указание на то, что скорость элюции следует снизить до 60—90 мл/см Ч. Продолжительность фракционирования белков при этом остается относительно небольшой — 1—3 ч. Белки целесообразно разделить предварительно на группы [c.210]

Для очистки мембранной D-лактатдегидрогеназы Е. соИ хроматографией на оксиапатите [Pratt et al., 1979] был использован пологий линейный градиент концентрации (0—0,2 М) К-фосфатного буфера, pH 7,2 (500 мл для колонки размером 2,6 X 20 см). Растворимость белка обеспечивали включением в состав буфера детергентов (1% Тритона Х-100 и 0,1% ДДС-Na). Очистке на оксиапатите предшествовали освобождение фермента из ме.мбрин с помощью дезоксихолата натрия, хроматография на DE-52 и гель-фильтрация на сефадексе G-200. На всех хроматографических этапах очистки в составе элюентов тоже присутствовали детергенты. [c.234]

Этот выбор диктуется в основном стремлением сохранить нативность очищаемого белка и максимально уменьшить неспецифическую сорбцию других компонентов исходной смеси. Само аффинное связывание вещества с лигандом, как правило, от состава буфера я ид-кой фазы зависит мало. Интересами сохранения нативности и растворимости белка диктуются выбор pH, наличие соли, а иногда (например, для белков мебран) введение в буфер добавок органических растворителей или детергентов. Все это определяется известными свойствами данного белка. Неспецифическая сорбция примесей, в частности балластных белков, на матрице и спейсерах происходит за счет тех же самых сил (притяжения разноименно заряженных групп, водородных связей и гидрофобных взаимодействий), которые обусловливают и биоспецифическое снизывание вещества с лигандом. Избирательность и прочность аффинной связи обусловлены кооперативным действием различных сил в области связывания, где они дополняют друг друга. Благодаря такой кооперации имеется возможность ввести в буфер факторы, ослабляющие действие сил какого-либо типа или даже всех их одновременно, но в такой степени, что биоспецифическое аффинное взаимодействие будет ослаблено лишь частично, в то время как неспецифическую сорбцию удастся подавить практически полностью. [c.404]

Для фракционирования белковых смесей, находящихся в растворе, широкое применение получили методы дробного осаждения, основанные на изменении растворимости белков в присутствии растворов солей и органических растворителей. При фракционировании солями чаще всего используют сернокислый аммоний, позволяющий создавать высокую ионную силу раствора при низкой температуре, а из органических растворителей — этиловый спирт и ацетон. На различиях в растворимости белков основано и изоэлектрическое осаждение, достигаемое за счет минимальной растворимости глобулярных белков в изоэлектричес-кой точке. В последние годы для фракционирования белков все чаще находят применение центрифугирование, избирательная адсорбция, различные виды хроматографии и электрофореза. [c.88]

Многие растворимые белки, ферменты в том числе, выделенные из различных тканей животных, обладают антигенными свойствами, т. е. при введении в организм вызывают в нем образование антител. Однако их антигенные свойства (иммуногенность) различаются, что проявляется в разной способности стимулировать продукцию антител. В известных пределах иммуногенность коррелирует с молекулярной массой антигена. Иммунохимически чистые антигены применяются обычно в виде 0,01 — 1,0%-ных растворов, тогда как неочищенные антигены и смеси антигенов приходится вводить в большей концентрации. Слабоиммуногенные антигены необходимо вводить со стимуляторами иммуногенеза, из которых наиболее часто используют адъювант Фрейнда. Антисыворотки против растворимых нативных белков можно получить повторными инъекциями (внутримышечно, подкожно, внут-рикожно) эмульсии раствора белка с адъювантом или внутривенными инъекциями раствора белка без адъюванта. [c.307]

Методическую основу работы составляет получение иммобилизованного препарата альдолазы, на котором адсорбируется добавленный извне растворимый белок. После удаления несвязанного белка при промывании увеличение концентрации белка в суспензии иммобилизованной альдолазы, а также появление в ней активности ГАФД позволяют сделать заключение о взаимодействии растворимого белка с иммобилизованным (т. е. об образовании комплекса альдолаза—ГАФД). [c.389]

Вторая группа коллоидных систем, отличавшаяся высокой устойчивостью к действию электролитов и сравнительно хорошей растворимостью (белки, агар, желатина, крахмал и др.), называемых поэтому гидрофильными коллоидами, изучалась по аналогии с гидрофобными золями. Предполагалось, что частицы гидрофильных коллоидов также состоят из нерастворимого ядра, на поверхности которого, однако, адсорбированы не ионы, а электроней-тральные молекулы неэлектролитов (молекулярный стабилизатор), чем обусловлена их сравнительно малая чувствительность к электролитам. Различия в свойствах гидрофильных и гидрофобных коллоидов (или, с включением систем с органическими растворителями — лиофильных и лиофоб-ных коллоидов) объяснялись различием в интенсивности взаимодействия частиц этих коллоидов с растворителем, сильным связыванием растворителя (сольватацией) в лиофильных коллоидах. [c.11]

Процессы застудневания и возникновения тиксотропии в растворах полимеров по существу аналогичны соответствующим процессам при коагуляционном структурооб-разовании в лиофобных золях, хотя в растворах полимеров они являются результатом понижения растворимости. Сульфаты, понижающие растворимость белков и способствую- [c.209]

Растворимость белка, помимо pH раствора, природы растворителя (диэлектрическая проницаемость), концентрации электролита (ионная сила) и вида противонона, несомненно зависит от структурных особенностей моле- [c.357]

Большое значение для растворимости белка имеет концентрация электролита. Белки с ярко выраженным асимметрическим распределением заряда, как, например, сывороточные глобулины, требуют для растворения или стабилизации раствора определенной концентрации соли. Этот солевой эффект основан на снижении ассоциации или агрегапии белковых молекул, вызванном присоединением низко молекулярных противоионов. Результатом являются повышенная гидратация и улучшение растворимости белка, его реассоциация при этом затруднена. Высаливание, ведущее к осаждению белка, основано на понижении гидратации белка за счет гидратации ионами электролита. Так как для различных белков необходима различная высаживающая концентрация электролита, высаливание относится к важным и удобным методам грубого фракционирования белков. [c.358]

Поскольку термические воздействия в процессе измельчения семян, очевидно, сильно влияют на растворимость белков подсолнечного шрота. Научно-исследовательский технический институт жировых веществ занимался изучением этих параметров. Многообещающим оказалось производство концентратов фирма Гранд минотри а фев де Франс сделала особый упор на выработку концентратов из конских бобов посредством турбосепарации впоследствии проводилось текстурирование этих продуктов путем термоэкструзии. Между прочим, в таких совместных мероприятиях объединились исследования, которые уже выполнялись в частном секторе (фирма Франс Люцерн ) по промышленному использованию белков листьев, возможностям их непосредственного применения в кормлении животных и перспективам их продовольственного использования. [c.11]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология