Разрушение клеток пресс

Клетки продавливают через маленькое отверстие под очень большим давлением они разрушаются под действием силы сдвига Ультразвуковые волны создают высокий локальный градиент давления в результате клетки разрушаются под действием напряжения сдвига и кавитации Разрушение клеточной стенки происходит под действием быстрой вибрации стеклянных шариков Действует так же, как и пресс Френча, но позволяет обрабатывать большие количества материала [c.40]

В общем наиболее распространенные физические методы разрушения клеток можно классифицировать следующим образом в порядке уменьшения их дезинтегрирующего действия пресс Хьюза > вибрационные мельницы>пресс Френча>ультразвук>растирание с окисью алюминия. По устойчивости к разрушению клетки различных микроорганизмов можно расположить в последовательности (в порядке уменьшения) дрожжи> >мицелий грибов>грамположительные кокки>грамположительные палочки>грамотрицательные палочки >галобактерии>-микоплазмы. [c.385]

Для выделения нуклеиновых кислот из клеток обычно применяют мягкие методы их разрушения, включающие использование детергентов и лизоцима, хотя для разрушения некоторых микроорганизмов с прочными клеточными стенками может понадобиться пресс, стеклянные бусы или растирание клеток с абразивами (см. раздел 8.1.2). В некоторых случаях для ослабления клеточных стенок в растущие культуры (например, грамположительных бактерий) добавляют глицин, лизин или треонин. Иногда для тех же целей клетки грамположительных бактерий в растущих культурах обрабатывают антибиотиками, такими как пенициллин С или ме-тициллин, которые подавляют биосинтез пептидогликана клеточной стенки. Чувствительность к лизоциму микобактерий, содержащих высокий процент липидов и полисахаридов в клеточной стенке, может быть усилена их обработкой изопропанолом. При лизисе микроорганизмов, имеющих особенно прочные клеточные стенки, применяют поли(этиленгликоль) с последующим удалением из лизата, так как его присутствие мешает проведению дальнейшей очистки ДНК- [c.143]

Клетки разрушают с помощью ультразвукового дезинтегратора, механической мельницы или пресса Френча (разд. 5.1). Сразу же после разрушения суспензию [c.329]

Разрушение клеток и экстракция. Растительные клетки разрушаются труднее, чем клетки животных, из-за наличия у них целлюлозной оболочки. При их разрушении применяют следуюш ие методы механическое разрушение крупных клеток и отделение друг от друга мелких с помош ью лопастного гомогенизатора растирание в ступке с абразивом (происходит разрушение клеточных стенок за счет шероховатостей на ступке и пестике) использование пресса Френча (клетки продавливаются через маленькие отверстия под давлением). [c.50]

Соответствует ли метод разрушения клеток типу исследуемого организма Единой методики, которая давала бы хорошие результаты для всех типов бактерий, не существует. Например, один из возможных методов разрушения большинства грамотрицательных бактерий— продавливание клеток в прессе Френча — не очень эффективен по отношению к грамположительным коккам. Во встряхивающем гомогенизаторе Брауна полностью разрушаются клетки грамположительных кокков (Braun MSK shaker) и значительно повреждаются клетки грамотрицательных бактерий. [c.138]

Ячейка Френч-пресса (Френч-пресс) предназначена для разрушения микроорганизмов, основанного на перепаде давления в пробе от высокого (550—1400 атм) к атмосферному. Быстрое изменение давления взрывает клетки изнутри и таким образом разрушает их. Метод наиболее применим к суспензиям объемами от 10 до 30 мл разрушение меньших объемов сложно технически, а больших—-занимает много времени. Время, требуемое для разру-шенця одной порции клеток небольшого объема, обычно не превышает 10—15 мин. В перерывах необходимо тщательно промывать ячейку от предыдущей пробы и постоянно контролировать состояние полиэтиленового шарика, регулирующего на ячейке степень перепада давления. [c.136]

Продавливание с помощью пресса представляет собой, вероятно, самый распространенный и самый полезный метод разрушения клеток. Некоторое количество бактериальной суспензии (объемом 5—40 мл с содержанием клеток до 30 об. %) помещают в стальной цилиндр с плотно пригнанным поршнем, имеющим маленький выпускной клапан с узким отверстием с клапаном соединена выводящая трубка. Цилиндр с поршнем ставят под 10-тонный гидравлический пресс. По мере того как поршень опускается, клетки разрушаются большими гидродинамическими силами, возникающими при прохождении клеточной суспензии через отверстие выпускного клапана. У этого метода есть ряд преимуществ. Во-первых, нет проблемы с охлаждением, так как цилиндр и поршень пресса охлаждают заранее, а нагрев происходит только при прохождении клеток через отверстие клапана. Температура вытекающей жидкости повышается на 5—10 °С, но эту жидкость можно быстро охлаждать, если собирать в металлическую пробирку или стакан, помещенные в ледяную баню. Во-вторых, разрушение происходит практически мгновенно, и суспензия разрушенных клеток не подвергается дополнительным гидродинамическим воздействиям, которые могли бы повредить субклеточные частицы. В-третьих, при использовании гидравлического пресса удовлетворительного качества можно проводить эксперименты в хорошо вос- [c.140]

Разрушение клеток в замороженном виде с помощью пресса Хьюза — один из наиболее эффективных способов разрушения клеточного материала разного происхождения ог бактериофагов до животных тканей. С его помощью можно разрушать клетки бактерий, обычно трудно поддающиеся разрушению (например, грамположительных кокков). [c.385]

Хорошие результаты дает продавливание клеток, смешанных с абразивными частицами, через пресс Хьюза. Влажные клетки с абразивными частицами помещают в трубку при температуре около —5°С, а затем однократным ударом по поршню, создающим скачкообразное изменение давления, проталкивают клеточную массу через узкое отверстие диаметром около 0,25 мм. Модификацией этого метода является продавливание клеток при температуре —25°С роль абразивных частиц выполняют в этом случае кристаллы льда. Чтобы добиться максимального разрушения бактериальных клеток, приходится иногда повышать давление до [c.38]

Разрушить клетки микроорганизмов довольно трудно. Обычно дрожжи могут быть плазмолизованы при помощи толуола или этилацетата. Перед экстрагированием дрожжи часто подвергают медленному высушиванию, во время которого происходит значительный автолиз [36]. Первоначально для выделения зимаз из дрожжей последние растирали с инфузорной землей, а затем отжимали при помощи гидравлического пресса [37]. В опытах с бактериями применялись различные методы. Описано несколько мельниц для разрушения клеток [38, 39]. Наиболее удачным оказалось применение в этих мельницах мелких стеклянных шари- [c.12]

Клетки Е. oli могут быть лизированы ферментами, такими, как лизоцим, в сочетании с детергентами [12]. Можно использовать также и методы механического разрушения клеток (гидродинамические), например, с помощью Френч-пресса или гомогенизатора Мэнтон-Голина. Третья возможность — разрушение ультразвуком, но этот метод применяют только в случае небольших объемов растворов. [c.99]

В подавляющем большинстве случаев в опытах по выделению рестриктаз для разрушения клеток используется ультра-ввук [31, 100, 106, 126, 152, 186, 218, 219, 249, 288]. Иногда клетки перед этим обрабатывают лизоцимом [20, 28, 31, 123, 126, 146, 152] или лизостафином [264, 265]. Реже поставленная цель достигается при помощи Френч пресса [89, 169, 235, 289]. Имеются указания на использование в единичных случаях растирания клеток со смесью алюминия [113] и разрушение при помощи стеклянных шариков [88, 180]. [c.144]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология