Сшивание субъединиц

Сшивание субъединиц бифункциональными реагентами [c.52]

На молекулярную массу конечного продукта существенное влияние оказывают только межмолекулярные связи, что легко обнаружить в денатурирующих условиях. Поперечные связи в пределах субъединиц (аналогично дисульфидным связям) удерживают полипептидную цепь в свернутом состоянии, уменьшая тем самым гидродинамический объем и кажущуюся молекулярную массу. Некоторые из продуктов, полученных при сшивании тетрамеров типа 4 и а2 2, представлены на рис. 1.6. Распределение полимеров по молекулярным массам определяется числом и положением поперечных связей. [c.53]

РИС. 2.47. Некоторые возможные способы расположения субъединиц в гемоглобине, совместимые с осью симметрии (направление оси указано стрелкой или цветным кружком). Другие расположения можно получить, меняя местами а и /3-субъединицы. Справа от каждой структуры представлены типы возможных димеров, которых можно ожидать при сшивании гемоглобина короткими реагентами. [c.133]

Не вызывает сомнения, что регуляция активности фермента тесно связана с пространственной организацией молекулы белка. В связи с этим безусловный интерес представляют результаты, полученные методом поперечной сшивки с помощью диметилсубе-римидата [122, 123] и электронномикроскопические исследования [124]. Сшивающий агент может взаимодействовать с компонентами комплекса, расположенными на достаточно близком расстоянии друг от друга. Так, например, полученный после сшивки полипептид с м. в. 60 000 [122] был расшифрован как комплекс, состоящий из двух субъединиц — у6. Исследуя субъединичную структуру сшитых комплексов на основе их чувствительности к действию определенных протеиназ, можно было предположить, что полученные сочетания субъединиц — у8. Руг, аР, аа — обусловлены более тесным контактом их в пространственной организации молекулы. Исследование КФ методом электронной микроскопии показало, что молекула имеет форму буквы Н она представляет собой структуру, состоящую из двух больших доменов, соединенных уз- ким мостиком. Каждый домен разделен на две половины, и мостик находится около участка их соединения. Размеры больших частей позволяют предположить наличие 2а- и 2р-субъединиц в каждой части. Мостик, соединяющий эти части, может включать в себя у-субъединицы. На основе данных электронной микроскопии и результатов, полученных при сшивании субъединиц, была предложена гипотетическая схема строения КФ, согласно которой 2а- и 2р-субъединицы находятся в множественных контактах, а мостик, состоящий из 4 у-субъединиц, расположен таким образом, что р-субъединица одновременно может контактировать с 2у-субъеди-ницами [123, 124]. [c.64]

Для исследования расположения белков в мембранах, а также расположения олигомеров в ферментах, состоящих из многих субъединиц, был разработан ряд методов мечения [24,30] и сшивки [31—34]. Так, для сшивания молекул белков в мембране эритроцитов использовали окисление их внутренних меркапто-групп [30] после выделения комплекса образовавшиеся связи могут быть разрушены восстановительным расщеплением, что позволяло идентифицировать составляющие белки. Альтернативный подход [32,33] заключался в биосинтетическом введении в биологические мембраны жирных кислот, несущих светочувствительную группу сшивка производного жирной кислоты и смежного белка индуцировалась фотолизом. Сходные методы применяли для сшнвки белков [34] в мембранах эритроцитов. [c.124]

О факте сшивания отдельных субъединиц свидетельствуют данные анализа N-копцевых аминокислотных остатков. Например, выход N-концевой аминокислоты в количестве >1 моль/ /моль белка может служить доказательством присутствия в олигомере двух идентичных полипептидных цепей. Аналогичным образом выход N-концевых аминокислот (исключая серии) на уровне 50% может служить признаком того, что N-концеваи аминокислота одной из двух цепей блокирована. Поскольку выход N-концевой аминокислоты зависит от многих факторов, в истолковании полученных результатов следует избегать поспешных выводов. [c.63]

Сохранение биологрпеской активности при сшивании двух определенных субъединиц указывает на то, что они либо соприкасаются друг с другом, либо удалены друг от друга не более чем на длину сшивающего агента. Особенно надежный контроль — вьшеление спеш1фически сшитой пары субъединиц и последующая сборка ее с немодифицированны-ми субъединицами в четвертичную структуру, в которой все молекулы содержат одну и ту же поперечную связь. Если получившиеся молекулы сохраняют биологическую активность, значит, сшивка вряд ли вызывает какие-либо серьезные искажения структуры. [c.133]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология