Равновесие мономер—димер при седиментации

Недавно Смит и Браун [1536] исследовали седиментацию трех приготовленных Янсеном и сотрудниками [8, 26, 141] кристаллических производных а-химотрипсина, а именно 1) фермента, ингибированного при помощи ДФФ, 2) активного окисленного фермента и 3) окисленного фермента, ингибированного обработкой ДФФ. Ранее проведенные седиментационные исследования показали, что а-химотрипсин в отличие от зимогена ведет себя как смесь мономера и димера. Исследование указанных производных было предпринято с целью определить природу детерминирующих групп. Для ДФФ-производного а-химотрипсина и активного окисленного фермента при ультрацентрифугировании были получены диаграммы, характерные для равновесия мономер — димер в необработанном ферменте. Однако после повторной обработки с помощью ДФФ и окисления получается производное, которое осаждается при рН 4,0 как мономер. Отсюда был сделан вывод, согласно которому в димеризации а-химотрипсина принимают участие несколько групп, одна из которых должна иметь ионный характер, так как указанное явление зависит от величины рН. Седиментация аналогичных производных трипсина имеет совершенно иной характер [153 в]. При ограниченной концентрации активного трипсина последний ведет себя во время седиментации подобно активному химотрипсину и ДФФ-производному а-химотрипсина, т. е. обнаруживает характерную обратимую агрегацию, зависящую от концентрации и от величины рН. Однако ДФФ-производное трипсина, так же как и трипсиноген [153г], осаждается в подобных условиях в виде мономерных частиц. [c.344]

Если скорости взаимных превращений достаточно велики для того, чтобы успевало установиться равновесие мономер—димер, то обе границы сливаются в одну асимметричную границу. Даже если пренебречь влиянием концентрации на характеристические скорости седиментации, такая граница имеет сложную форму, которую можно проанализировать с помощью теории, разработанной Гилбертом (см. Сапп, 1970 Van Holde, 1975). Общая концентрация растворенного вещества близка к нулю в хвостовой части границы, и равновесие сдвинуто в сторону образования мономера. В головной части границы, если концентрация там достаточно велика, происходит преимущественное образование димера. В результате образуется асимметричная граница, а положение в ячейке максимального значения дс/дх зависит от того, насколько равновесие сдвинуто в сторону образования мономера или димера. [c.245]

По ранним представлениям, в случаях, когда равновесие устанавливается быстрее, чем общая длительность ультрацентрифугирования, такая система, как пА должна давать один пик со свойствами, промежуточными между свойствами мономера и полимера. Система А В - -С должна давать два шлирен-пика, поскольку, если считать, что скорость седиментации этих компонентов падает в последовательности А, В, С, медленный пик будет соответствовать легкой молекуле С, в то время как вторая (быстрая) граница благодаря присутствию В будет отвечать также движению некоторого количества образующегося тяжелого компонента А. На деле, однако, все обстоит значительно сложнее. При седиментационном исследовании а-химотрипсина при визкой ионной силе и pH 7,9 Мэсси, Харрингтон и Хартли [11] получили странные результаты, не укладывающиеся в описанную выше простую схему. Теоретическое объяснение этих результатов было предложено Джил-бертом [12], впоследствии более подробно разработавшим свой подход к решению трудной задачи об обратимых системах, из которых центробежное поле постоянно забирает тяжелые компоненты [13, 14]. Джилберту удалось объяснить результаты Мэсси и сотрудников, исходя из системы с одним пиком для димеров и из системы с двумя пиками для гексамеров. Он вычислил долю гексамеров, совпадающую с экспериментальными данными, и точно предсказал значение 5 как функцию концентраций обоих компонентов. В своих рассуждениях [c.157]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология