Деления клеток в суспензионной культуре

Деление суспензионных клеток поддерживается при наличии ауксинов и цитокининов, т. е. т ех гормонов, которые необходимы для индукции и роста каллусных клеток. Таким образом, суспензионные культуры представлены типичными каллусными клетками, обладающими всеми свойствами, характерными для клеток такого рода. [c.93]

Время удвоения в бессывороточной среде может изменяться, но соответствующие эффекты не всегда предсказуемы. Большинство клеточных линий замедляет темп делений, но в ряде случаев наблюдается ускорение деления клеток. Эти изменения не являются пагубными, так как все исследованные линии продолжали секретировать большие количества МА (по меньшей мере 5—50 мкг/мл) или интерлейкина. Отмечена также еще одна особенность в характере роста в бессывороточной среде, заключающаяся в том, что клетки перестают прикрепляться к пластмассовой поверхности. В бессывороточной среде клетки большинства линий растут в суспензионной культуре, в то время как добавление сыворотки приводит к образованию клеточных монослоев. [c.190]

В процессе образования корончатого галла агробактерии способны трансформировать клетки, прилежащие к поврежденной ткани, которые претерпевают клеточные деления в ответ на поранение. Клетки интактного растения, как правило, проявляют максимальный онкогенный ответ на инфекцию А. tumefa iens между 1,5 и 3 днями после поранения. У различных видов эта компетентная фаза совпадает с первыми клеточными делениями в ответ на поранение. Как было показано [50], раневой ответ можно имитировать в культуре тканей, если превратить покоящиеся мезофильные клетки листа или активно делящиеся клетки суспензионной культуры в протопласты и индуцировать регенерацию клеточной стенки и клеточное деление в соответствующей среде. В определенной фазе становления культуры протопластов клетки компетентны для трансформации Л. tumefa iens. Технология совместного культивирования предусматривает инкубацию протопластов в присутствии агробактерий в соответствующей жидкой питательной среде и позволяет получать большое число трансформантов в контролируемых условиях, Варьируя условия культивирования, плотность высева и изменяя процедуру селекции, можно получить трансформированные колонии клонального происхождения. Важно иметь в виду, что корончатые галлы — это смесь нетрансформированных и различных типов независимо трансформированных клеток и, следовательно, фенотип галла представляет собой сумму фенотипов всех клеток, обнаруживаемых в опухоли. Однако клеточная популяция трансформантов, полученных с помощью сов- [c.151]

Анализируют рост высеянных клеток и определяют время вступления клеток в митоз, чтобы добавить агробактерии именно в тот момент, когда растительные клетки компетентны для трансформации. Это особенно важно для протопластов, которым может потребоваться около недели или более для дедифференциации, восстановления клеточной стенки, начала репликации генома и инициации клеточного деления. Высев на чашку суспензионной культуры с низкой плотностью клеток, как правило, тормозит деление до тех пор, пока клетки не кондиционируют среду, что может занять несколько дней. В большинстве случаев можно использовать фидерный слой, чтобы облегчить рост протопластов или суспензионной культуры с низкой плотностью кле- ок. Важно детально знать характеристики системы культивирования. Кроме того, система должна быть воспроизводимой, чтобы время, в течение которого живые агробактерии культивируются с растительными клетками, сократить до минимума иначе бактерии заполняют культуральную среду и вызывают гибель растительных клеток. [c.142]

Для получения липоплексов катионные липиды и ДНК смешивают в бессывороточной питательной среде, поскольку сыворотка препятствует их объединению, и культивируемые клетки кратковременно инкубируют в их присутствии. Метод позволяет осуществлять как временную, так и постоянную трансфекцию с образованием стабильных клеточных линий. По сравнению с ДЭАЭ-декстраном эффективность этих методов, по крайней мере, в 5-100 раз выше при получении временной трансфекции и в 3-20 раз при создании стабильных трансфектантов. При этом с помощью липосом удается осуществлять трансфекцию в сложных случаях тех клеточных линий, которые не поддаются введению рекомбинантных ДНК другими способами. Более того, данная группа методов допускает проведение трансфекции в суспензионных культурах, не требует митотического деления клеток в омент проведения эксперимента и, как правило, высоковоспроизводима. [c.153]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология