Культура суспензионная

Существует также суспензионная культура клеток, которую выращивают в жидкой питательной среде, так называемое глубинное культивирование. Клеточные суспензии образуются как из каллусных тканей, так и непосредственно из экспланта. Для получения суспензионных культур предпочтительнее брать каллусы рыхлого типа. Если для этой цели необходимо использовать плотный каллус, то его можно разрыхлить, исключив из питательной среды соли Са " . С этой же целью можно культивировать ткань на среде, содержащей ауксин 2,4-В или ферменты — пектиназу (0,2 мг/л) и [c.166]

Первый этап исключают в случае использования клеток крови, лимфы, опухолей и некоторых других трансформированных клеток, поскольку они растут в виде суспензионных культур Все другие животные клетки прикрепляются к какой-то поверхности Поэтому ткани, из которых получают такие клетки, дезинтегрируют в тканевых гомогенизаторах и обрабатывают протеазой, центрифугируют при небольших скоростях ротора во избежание травмирования клеток [c.344]

Рис. 3.3. Использование в качестве няньки культуры суспензионных клеток при выращивании изолированных протопластов и одиночных клеток

Аэрация. Для выращивания суспензионных культур большое значение имеет аэрация. Особенно важно снабжение воздухом культивируемых клеток в больших объемах ферментеров. [c.164]

При сравнении разных типов ферментеров было показано, что синтез вторичных метаболитов в суспензионной культуре был наибольшим при подаче воздуха снизу. При выращивании клеток в малых объемах (в колбах) нормальная аэрация достигается при постоянном перемешивании суспензии. [c.164]

Состав флавоноидов, в том числе и множества их гликозид-ных производных, служит и будет продолжать служить полезным признаком для выявления таксономических корреляций. В систематических исследованиях, вероятно, будут обнаружены все новые типы флавоноидов, структуру которых предстоит расшифровать химикам-органикам. Многое еще предстоит сделать и для выяснения биосинтеза флавоноидов. Прямые доказательства предложенных ферментативных взаимопревращений различных классов флавоноидов во многих случаях все еще отсутствуют, механизмы многих реакций до конца не выяснены, а подробных исследований, посвященных катализирующим их ферментам, почти нет. В последнем случае исключение составляют работы с суспензионными культурами клеток некоторых растений (в частности, петрушки). Хотя физиологические факторы и факторы окружающей среды (например, свет), которые регулируют биосинтез флавоноидов, в целом выявлены, механизмы, регулирующие состав флавоноидов и их раздельный биосинтез, особенно антоцианов, в различным образом окрашенных участках цветков и других растительных тканей, почти Неизвестны. Их выяснение имеет особый интерес для садово- [c.153]

Помимо стационарного способа культивирования с регулярными пассажами, описанного выше для первичных культур, для большинства перевиваемых клеточных культур возможно применение метода суспензионных культур, при котором клетки находятся в жидкой среде во взвешенном состоянии. Модификацией данного метода является проточное культивирование, при котором в специальный аппарат (ферментер или роллерный культиватор) непрерывно добавляют свежую питательную среду и удаляют отработанную. Подобный метод позволяет в любой момент получить значительные количества клеточной массы для культивирования вирусов он применяется, как правило, в крупных лабораториях или при промышленном производстве вакцин. [c.261]

Метод кормящего слоя — кондиционирующий фактор выделяют активно делящиеся клетки суспензионной культуры того же вида растений, что и одиночная клетка (рис. 6.2). [c.168]

Очень большое влияние на рост суспензионной среды оказывает ее непрерывное перемешивание, которое обеспечивает хорошую аэрацию и предотвращает осаждение клеток. В лабораторных условиях перемешивание достигается благодаря использованию качалок или роллерных установок. При промышленном выращивании суспензионных культур применяют специальные системы, в которых идут увеличение биомассы и синтез вторичных соединений, — биореакторы. Эти системы обладают важными преимуществами возможностью управлять процессом культивирования на основе показаний датчиков кроме того, большой объем культивируемого материала позволяет забирать значительные пробы, при этом стрессовые реакции у культуры клеток не возникают. В зависимости от способа перемешивания культуральной жидкости биореакторы делят на две группы. [c.182]

Первая группа включает биореакторы, в которых суспензионная культура перемешивается только за счет подачи воздуха во второй группе биореакторов культура перемешивается механическим способом (рис. 6.6). [c.182]

Инокулюм (трансплант) — часть суспензионной или каллусной культуры, переносимой в свежую питательную среду. [c.494]

Кроме выращивания каллусов удается культивировать клетки некоторых растений в суспензионных культурах [c.38]

В условиях, ограничивающих рост нормальных клеток, трансформированные клетки как менее требовательные к факторам роста, пролиферируют до более высокой плотности и они становятся способными культивироваться в глубинных условиях (суспензионные культуры) при изменении своей формы до сферической Следовательно, и у грибных, и у животных, а также у ряда растительных клеток их морфологическое сходство (сферичность, округлость) в глубинных условиях выращивания находится под контролем генотипа и сопровождается изменением преимущественно клеточной мембраны [c.154]

В зависимости от способа, условий культивирования и происхождения можно выделить несколько типов культур клеток и тканей. Если культивирование происходит поверхностно на агаризо-ванной питательной среде, то образуется каллусная ткань. Она не имеет четко выраженной структуры, но может различаться по плотности. Происхождение и условия выращивания определят, будет ли каллусная ткань рыхлой, средней плотности или плотной. Рыхлая каллусная ткань имеет сильно оводненные клетки, легко распадается на небольшие группы клеток и кластеры и поэтому может быть использобана для получения суспензионной культуры. Ткань средней плотности характеризуется хорошо выраженными меристематическрши очагами. В ней легко инициируются процессы органогенеза. Наконец, у плотных каллусных тканей различают зоны редуцированного камбия и трахеидоподобных элементов [c.166]

Культуры клеток животных и человека, не имеющие клеточных стенок, являются более ранимыми и требовательными к условиям своего существования, чем клетки других эукариот и прокариот Поэтому оборудование для них можно отнести к разряду "тихоходного", обеспечивающего нежное обращение с биообъектами Несомненно, в отдельных случаях допустимы исключения, например, когда возможно культивирование в глубинных условиях некоторых растительных клеток (суспензионная культура женьшеня), используя ферментационное оборудование, рассчитанное на выращивание, например, бактерий или грибов [c.296]

Рис. 6.2. Использование культуры суспензионных клеток в качестве кормящего слоя для выращивания изолированных протопластов и одиночных клеток кукурузы (Ву Дык Куанг, З.Б.Шамина, 1985)

Рис. 143. Использование тка-ни-"няньки" (суспензионная культура) при выращивании колоний из одиночных клеток кукурузы или протопластов (схема) 1 — качалоч-ная колба, 2 — колония, возникшая из отдельной клетки, 3 — фильтровальная бумага, 4 —металлическая сетка, 5 — суспензия клеток "кормящего слоя", 6 — подложка (пенополиуретан), 7 — питательная среда.

Плотность насыщения — максимальное число клеток в культуральном сосуде при специальных условиях выращивания. Плотность насыщения выражается числом клеток на 1 см в монослой-ной культуре или числом клеток на 1 см в суспензионной культуре. [c.497]

Суспензионная культура — тип культуры, в которой клетки или их агрегаты размножаются, будучи суспендированными в жидкой питательной среде. [c.499]

В жизнеспособности выделенных протопластов большую роль играет физиологическая полноценность исходного растительного материала. Суспензионные культуры наиболее приемлемы для этих целей, будучи в конце логарифмической фазы роста (размножения). [c.516]

Таким образом, использование суспензионных культур для синтеза вторичных метаболитов в промышленных масштабах имеет большие перспективы, и не только с точки зрения экономической выгоды получения более дешевой продукции в запланированных количествах. Важно, что использование культуры клеток спасет от уничтожения тысячи дикорастуших растений, ставших уже редкими, которые синтезируют необходимые человеку вещества. Увеличение выхода продукта может бьггь достигнуто благодаря дальнейшей исследовательской работе по селекции специализированных популяций клеток и оптимизации условий культивирования. Большой интерес представляет также дальнейшее развитие методов биотрансформации метаболитов и иммобилизации культивируемых клеток. [c.184]

В то же время ингибирующее действие гидропероксида трет-Ьутшг. и m/iew-бутилпербензоата на рост каллусной и суспензионной культур клеток табака наблюдалось не только при концентрациях 10 М, но и при неожиданно низких значениях 10 -10 М [118]. [c.37]

Метод биологической баллистики. Это один из самых эффективных методов трансформации однодольных растений. Исходный материал для трансформации — суспензионная культура, каллусная ткань или 4—5-дневные культивируемые незрелые зародьшш однодольных. [c.149]

В последние годы достигнуты большие успехи, связанные с генетической трансформацией клеток, в том числе и растительного происхождения. Схема трансформации включает в себя получение протопласта, введение в него необходимой генетической информации, формирование полноценной растительной клетки, клонирование и регенерацию. (Подробно техника генно-и1гженерных экспериментов будет описана в следующем разделе.) В данной схеме трансформированный протопласт — суспензионная культура — каллусная культура — целое растение (рис. 31.4) — наиболее тех- [c.498]

Клеточные суспензии играют значительную роль в биотехнологии. Они могут бьггь использованы для получения изолированных протопластов, которые применяют для клеточной селекции, при введении чужеродных ДНК и других процессах. Клеточные суспензии культивируют в больших количествах для получения вторичных метаболитов, выявления новых веществ, для выращивания клеточной биомассы. Однако увеличение клеточной биомассы в результате деления клеток и синтез вторичных метаболитов разобщены во времени. Поэтому необходимо хорошо знать физиологию, свойства клеток в суспензионных культурах, чтобы получить максимальный выход продукта. Состояние клеточных суспензий характеризуется плотностью клеточной популяции. За 14—16 дней (средняя длительность пассажа) плотность обычно повышается от 5- Ю до 5-10 кл/мл. Качество суспензии определяется степенью агреги-рованности. Агрегаты должны содержать не более 10 — 12 клеток. [c.167]

После получения различных сомаклональных вариаций от исходного растения наступает следующий этап — отбор необходимых сочетаний признаков. Данный вопрос решается с помощью клеточной селекции, которую проводят практически на любом объекте, введенном в культуру in vitro. Однако удобнее использовать суспензионную культуру или изолированные протопласты. Преимущество этих объектов состоит в быстром росте культуры и равномерном действии селективного фактора на все клетки. Для отбора сомаклональных вариаций соответствующие селективные факторы (соли в высоких концентрациях, гербициды и др.) добавляют в питательную среду для выращивания культуры клеток либо растущие культуры помещают в селективные условия (низкая или высокая температура, освещенность и т.д.). Существует несколько методов клеточной селекции [c.187]

Таким образом, криосохранение достаточно надежно обеспечивает сохранение генофонда. Перспективность этого метода подтверждается возобновлением после хранения в жидком азоте суспензионных культур моркови, явора, кукурузы, риса, сахарного тростника каллусных — тополя, маршанции, сахарного тростника андрогенных эмбриоидов — беладонны, табака и др. Из восстановленных после замораживания культур моркови и табака удалось регенерировать целые растения. После быстрого замораживания сохранили жизнеспособность меристемы земляники, малины, гвоздики, томатов, картофеля и ряда других растений. Однако для криосохранения требуется сложная работа по подбору условий, обеспечиваюш их выживание клеток и, следовательно, возможность последующей регенерации из них целых растений. Необходимо учитывать генетические и морфофизиологические особенности клеток, способность к закаливанию, уровень проницаемости клеточных мембран, подбор криопротекторов, скорость снижения температуры при замораживании, условия оттаивания. [c.202]

Флаваноны. В растворах происходит спонтанная изомеризация халконов в соответствующие флаваноны. Вместе с тем в природе эта реакция катализируется халкон-изомеразой, и ее продуктом является (2S)-флаванон (4.7). In vivo процесс легко обратим, и поэтому очень трудно определить, халкон ли или соответствующий флаванон служит непосредственным предшественником флавоноидов других классов. Доступные в настоящее время доказательства, полученные главным образом в работах с суспензионными культурами клеток петрушки и других видов растений, свидетельствуют в пользу того, что прямыми предшественниками являются флаваноны. Этот вопрос может быть разрешен однозначно лишь при исследовании ферментативных систем, в которых не функционирует халкон-флаванон-изомера за. [c.145]

Антоцианидины. Превращение флаванонолов в антоцианидины было показано у нескольких видов растений и подтверждено в экспериментах с суспензионными культурами клеток Однака механизм этого превращения неизвестен. Степень окисления этих соединений формально одна и та же, и поэтому был предложен гипотетический путь, не включающий реакций окисления и восстановления (рис. 4.13). Биосинтез того небольшого числа 3-дезоксиантоцианидинов, которые встречаются в природе остается пока загадкой. [c.145]

По нашим данным [6,15] одним из основных компонентов биомассы культуры клеток родиолы розовой (особенно суспензионной культуры), обладающей стимулирующими и [c.151]

Стенки клеток суспензионной культуры пихты Дугласа, по данным работы [214], содержат пектиновых веществ — 15%, ксилоглюкана — 10%, ксилана — 1%, целлюлозы —23%. Авторы [214] отмечают, что первичные клеточные стенки этой пихты содержат такие же типы полисахаридов, как и клеточные стенки ранее выращенной культуры сикомора. [c.88]

Плотные отходыв биотехнологических производствах представляют собой микробную массу, отделяемую от культзфаль-ного фильтрата, поступающего на последующие стадии выделения целевого продукта шламы (от нем. S hlamm — грязь) растительную биомассу после экстракции из нее действующих веществ (а в случае суспензионной культуры, продуцирующей метаболит в [c.353]

Микроразмножение in vitro можно рсуществ. ять из существующих в растении тканей меристемного типа (зародыш, верхушка основного побега) или позже образующиеся пазушные побеги, равно как и из дополнительных меристематических тканей (точки роста, эмбриоиды) изолированных органов растений, где они формируются непосредственно в родительской ткани из промежуточного каллуса или клеток суспензионных культур (см. рис. 140). [c.503]

Исходные клеточные суспензии обычно получают из рыхлых, оводненных каллусных тканей (2—3 г на 60—100 мл питательной среды), подвергнутых обработке пектиназой и полигалактурона-зой, и помещаемых в жидкую питательную среду, лишенную ионов кальция, но содержащую ауксин — 2,4-дихлорфеноксиуксусную кислоту. Условия выращивания поддерживают либо в периодическом, либо в непрерывном режиме, специально подобранном для конкретного биообъекта. В других случаях источниками суспензионных культур могут быть протопласты с реконструированными клеточными стенками. Стимулировать деления отдельных клеток изолированных протопластов можно с помощью обогащенных [c.508]

Важно также сохранить присущие клеткам метаболические пути при их выращивании в суспензионных культурах. Более того, регулируя обмен, можно добиваться заметного повышения выхода целевых продуктов. При этом всегда необходимо учитывать тип дифференцировки, или состояния специализации исходных клеток, так как от него зависит видоспецифичность первичного и вторичного метаболизма. [c.509]

Суспензионные культуры обычно выращивают в подходящих емкостях роллерного типа после фильтрации первичной суспензии через стерильные металлические, нейлоновые илитяарлевые сита для освобождения от крупных аггломератов клеток. [c.509]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология