Химотрипсин длина пептидной цепи

Для определения аминокислотной последовательности в длинных поли-пептидных цепях требуется специфически расщепить полипептид, т. е. расщепить его в немногих определенных точках и получить фрагменты, содержащие по нескольку аминокислот. Очень важно, чтобы расщепление было строго специфичным, так как необходимо быть уверенным в том, что число образующихся индивидуальных пептидов невелико, а их количества достаточны для дальнейшего исследования. Специфичность расщепления обеспечивает также и воспроизводимость результатов. Для специфического расщепления пептидных цепей часто применяют протеолитические ферменты — трипсин, химотрипсин и пепсин. [c.90]

Заключение. Действие химотрипсина по отношению к субстратам с длинной пептидной цепью достаточно специфично, что позволяет использовать его для селективного расщепления белков. Если пролильный остаток расположен за аминокислотой с ароматической боковой цепью, то пептидная связь устойчива к гидролизу. [c.206]

До сих пор ничего не говорилось о специфичности ферментов. Если трипсин, химотрипсин и эластаза обладают идентичным каталитическим механизмом, то чем они отличаются друг от друга Ответ заключается в том, что они селективны к характеру боковой цепи, следующей за той, в которой они разрывают пептидную связь. В уравнениях (21-1)-(21-3) соответствующие радикалы обозначены К и находятся непосредственно перед карбонильной группой связи, подлежащей разрыву. Каждый из трех рассматриваемых ферментов имеет на своей поверхности карман специфичности , в который входит указанный радикал при связывании субстрата. Этот карман специфичности в трипсине длинный и глубокий, с отрицательным зарядом на дне от ионизованной аспарагиновой кислоты (рис. 21-19, а). Благодаря этому трипсин благоприятствует разрыву белковой пептидной цепи по связи, следующей за положительно заряженными радикалами лизина или аргинина. В химотри тсине карман специфичности шире (рис. 21-19, б) и образован исключительно гидрофобными радикалами, поэтому химотрипсин благоприятствует разрыву пептидной связи, следующей за объемистым ароматическим радикалом, как, например, [c.322]

Химотрипсин преимущественно расщепляет те пептидные связи, карбоксильная функция которых относится к ароматическим аминокислотам. В длинных полипептидных цепях гидролизуются также связи, образованные лейцииом, валином, аспарагином и метионином. Пепсин обладает слабо выраженной специфичностью. Расщепляются связи, образованные триптофаном, фенилаланином, тирозином, метионином и лейцином. [c.365]

После разъединения полипептидных цепей белка удается выделить отдельные цепи в чистом виде, что сложнее сделать в случае длинных полипептидных цепей [306], чем коротких цепей, для выделения которых в чистом виде можно применять различные методы, например хроматографию на бумаге [320] и на колонке [219, 277], противоточное распределение [331] и ионофорез [10, 266]. В окисленном инсулине, в котором обе цепи сильно различаются по кислотности из-за неодинакового аминокислотного состава, разделение цепей удается осуществить фракционированием солей [263], ионофо-эезом [143, 263], распределительным хроматографированием 6] или противоточным распределением [190, 240]. Окисленный химотрипсин, содержащий три пептидные цепи, дает три фракции с характерными свойствами, позволяющими разделять их. комбинацией метода осаждения при pH 6 и ионообменного хроматографирования створимого вещества. [c.177]

На большом числе примеров показано, что скорость отщепления концевого п-нитранилидного остатка химотрипсином зависит от наличия соседнего остатка фенилаланина, т. е. от свойств вставки как субстрата соответствующего фермента. Аналогичные наблюдения сделаны для производных других полимеров [45]. Известно, что разные гидролитические ферменты, расщепляющие пептидную связь, требуют разных аминокислотных остатков, связанных с гидролизуемой связью и ближайшим ее окружением (еще 2—4 остатка). Поэтому, меняя состав и длину пептидной последовательности во вставке , можно добиться, чтобы гидролиз протекал с большой скоростью под действием одних протеолитических ферментов и был бы медленным под действием других ферментов этого же класса. Так, в случае трипсина и химотрипсина с максимальной скоростью расщепляются разные пептиды, связанные с полимером. Если для упомянутых выше модельных ферментов необходимые пептидные последовательности ясны, то для индивидуальных лизосомальных протеаз они пока неизвестны. При изучении гидролиза различных олигопептидных цепей, связанных с гидроксипропилметакрил амидным сополимером, смесью лизосомальных ферментов было найдено, что наиболее важную роль играют тиольные протеазы катепсины В, Н и L [46], причем для большинства субстратов определяющим ферментом является катепсин В. Изменяя структуру пептидной последовательности во вставке , можно в широких пределах варьировать скорость отщепления -нитроанилидного остатка катепсином В или смесью лизосомальных ферментов. Так, максимальная скорость наблюдается для последовательностей [c.60]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология