Фракционирование олигонуклеотидов

Эффективным является метод фракционирования олигонуклеотидов с помощью различных методов хроматографии. [c.407]

О том, сколь существенны мол<ет быть вмешательство неионных взаимодействий, говорит, иапример, тот факт, что успешное фракционирование олигонуклеотидов гидролизата РНК на колонках DEAE-целлюлозы стало возможным только после того, как в элюент стали вводить 7 М мочевину [Tomlinson, Тенег, 1963]. [c.267]

Двумерное фракционирование олигонуклеотидов в первом направлении — электрофорезом в кислом пиридин-ацетатиом буфере на полоске ацетилцеллюлозы, во втором — гомохроматографией или элюцией солевым градиентом на пластинке ДЭАЭ-целлюлозы. [c.460]

Фракционирование олигонуклеотидов в тонком слое играет центральную роль в некоторых методах секвенирования нуклепновых кислот, особенно тРНК, где из-за высокого уровня содержания модифицированных нуклеотидов методы секвенирования с использованием электрофореза в ПААГ наталкиваются на серьезные трудности. [c.496]

С тех пор метод эволюционировал особенно плодотворным оказалось введение теми же авторами для разделения во втором направлении хроматографии на пластинках ДЭАЭ-целлюлозы с элюцией так называемой гомосмесью ( гомохроматография ). Такой вариант двумерного фракционирования олигонуклеотидов подробно описан в статье Баррелла, основные положения которой (для сопоставления с последующими модификациями) пмеет смысл теперь рассмотреть [Barrell, 1971]. [c.496]

К описанным модификациям метода двумерного фракционирования олигонуклеотидов, ведущего свое происхождение от метода Сэнджера, мы снова вернемся в конце раздела при сопоставлении методов секвенирования тРНК, а сейчас остановимся на совершенно другом варианте двумерного фракционпрования олигонуклеотидов — с помощью ТСХ в обоих направлениях, т. е. без использования электрофореза. [c.500]

Олигонуклеотиды с молекулярным весом менее 10 ООО фракционируют электрофорезом в 15%—ном полиакриламидном геле Gould et al., 1969), где олигонуклеотиды делятся главным образом в соответствии с размерами молекул чем меньше молекула, тем быстрее она движется через гель. Таким образом, этот метод подобен хроматографическому разделению по длине цепи, однако для длинноцепочечньк олигомеров электрофорез в геле позволяет получить лучшее разрешение, чем хроматография. Это показано на рис. 11.7, где сравниваются положения олигонуклеотидов из Т -РНК-азного гидрохшзата РНК TMV при электрофорезе и колоночной хроматографии. Из рисунка следует, что в геле олигонуклеотиды с длиной цепи более 8 звеньев разрешаются, хотя и не так хорошо, как олигонуклеотиды с меньшей длиной цепи, тогда как на колонке плохо делятся олигонуклеотиды уже с длиной цепи более 6. Поэтому гель-электрофо-рез может быть эффективным методом фракционирования олигонуклеотидов с длиной цепи больше 8. [c.289]

В книге собраны лучшие из современных методов выделения и анализа важнейшего класса биохимических соединений — нуклеиновых кислот. Ее составители выбрали и систематизировали наиболее надежные и апробированные методы из множества разработанных за последние годы прин циниально новых методов выделения и фракционирования олигонуклеотидов, ДНК и различных форм РНК, методов физико-химического анализа нуклеиновых кислот, изучения их биосинтеза и биологических функций. [c.4]

Предложенный Эганом и Кельмерсом [41] метод ВЭЖХ на сорбенте КРС5 был успешно использован для фракционирования олигонуклеотидов [41—43]. Этот сорбент состоит из мельчайших сферических гранул полихлортрифторэтилена, покрытых пленкой галогенидов четвертичных аммониевых оснований, в состав которых входят три длинных алкильных остатка (Се—С12). [c.169]

Достижения в области изучения первичной структуры нуклеиновых кислот непосредственно связаны с развитием методов фракционирования олигонуклеотидов. Ускорению этих исследований способствовало наличие очищенных препаратов РНК и рибонуклеаз, специфически расщепляющих одноцепочечную молекулу РНК. К настоящему времени установлена полная нуклеотидная последовательность многих РНК, в том числе многочисленных тРНК, 5S- и 5,8S-PHK, информационных и рибосомальных РНК. Работы по определению первичной структуры ДНК начались несколько позднее, однако благодаря использованию электрофоретических методов, позволяющих быстро анализировать смеси, они вскоре достигли того же уровня, что и исследования РНК. Стратегия установления первичной структуры нуклеиновых кислот описана во многих превосходных обзорах [5, 121—123]. В настоящем разделе особое внимание уделено методам электрофореза на бумаге и в геле, используемым для разделения рибонуклеотидов и дезоксирибонуклеотидов. [c.188]

К электрофорезу в геле эти методы, разумеется, прямого отношения не имеют, так как являются примерами электрофореза в свободной жидкости. Именно с этого начиналось применение электрофореза для фракционирования биополимеров. Однако за последнее десятилетие, во всяком случае для аналитических целей, электрофорез в свободной жидкости был полностью вытеснен электрофорезом в гелях или на твердых носителях (бумаге, различных производных целлюлозы, полиамидных пленках и т. д.), который широко применялся при фракционировании пептидов, аминокислот и других сравнительно низкомолекулярных биологически важных молекул, в том числе и в высоковольтных вариантах. В свое время, например, очень важную роль сыграл метод фракционирования олигонуклеотидов гидролизата РНК двумерным электрофорезом. В первом направлении разделение вели на полосках ацетатцеллюлозы в пиридин-ацетатном буфере (pH 3,5) с добавлением 7 М мочевины, во втором — на ДЭАЭ-бумаге в 7%-ной НСООН [Brownlee, 1972]. Ввиду малой емкости ацетатцеллюлозы общая загрузка не превышала 0,1 мг гидролизата РНК, поэтому использовали препараты, меченные радиоактивным фосфором. [c.119]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология