ДЭАЭ-целлюлоза

Разделение белков сыворотки крови на ДЭАЭ-целлюлозе [c.111]

Подготовка сорбента. Около 10 г ДЭАЭ-целлюлозы обрабатывают и переводят в ОН--форму (с. 109). [c.111]

Для очистки больших количеств моноклональных антител из асцитных жидкостей применяют хроматографию на ДЭАЭ-целлюлозе. [c.316]

Хроматографирование на ДЭАЭ-целлюлозе. Часть центрифугата предыдущей стадии (400—500 мг белка) наносят на колонку ДЭАЭ-целлюлозы (3,0X5,5 см), уравновешенную 5 мМ калий-фосфатным буфером, pH 7,7. Такой же буфер используют и для элюции, собирая фракции по 5 мл со скоростью 1 мл/мин. Определяют в них белок и транскетолазную активность. Фракции с высокой удельной активностью объединяют, остальные отбрасывают. [c.284]

Очистка на ДЭАЭ-целлюлозе [c.316]

Для разделения двух изозимов следует провести дополнительное фракционирование белка с использованием хроматографии на КМ-целлюлозе и повторно — на ДЭАЭ-целлюлозе. [c.218]

Одновременное разделение большого количества (50—60) олигонуклеотидов, в то время как на ДЭАЭ-целлюлозе обычно удается разделить не более 15 олигонуклеотидов. [c.175]

Хроматография на ДЭАЭ-целлюлозе. Прозрачный раствор белка [c.230]

Если ДЭАЭ-целлюлозу используют не сразу, ее заливают водой и хранят при 4 С с добавлением следовых количеств толуола. [c.111]

ДЭАЭ-целлюлоза, уравновешенная 5 мМ калий-фосфатным буфером, pH 7,7 (с. 109). [c.283]

ДЭАЭ-целлюлоза, уравновешенная 2 мМ калий-фосфатным буфером, pH 7,6 (с. 109). [c.285]

Берут ДЭАЭ-целлюлозу из расчета 1 г сухого сорбента на каждые [c.308]

ДЭАЭ-целлюлоза (ДЭ-52), уравновешенная буфером А. [c.330]

Суспензия ДЭАЭ-целлюлозы, уравновешенная 10 мМ К-фосфатным буфером, pH 7,0. [c.374]

ДЭАЭ-целлюлоза (ДЭАЭ-52, ватман). [c.394]

После завершения реакции защитные группы можно удалить в мягких условиях, не затрагивающих фосфодиэфирной связи. На этом основан фосфодиэфирный метод синтеза полинуклеотидов. Продукт реакции — фосфодиэфир со свободной, потенциально уязвимой для воздействия, отрицательно заряженной группой. Далее, с увеличением длины полинуклеотидной цепи число отрицательных зарядов в соединении также будет увеличиваться. Поэтому в зависимости от условий реакции эти потенциально нуклеофильные центры могут участвовать в нежелательных побочных реакциях. Кроме того, такое многозарядное соединение слищком полярно, чтобы можно было проводить его очистку обычными методами органической химии, например с помощью хроматографии на силикагеле. Вместо этого необходимо использовать хроматографию на ионообменных носителях, обладающих меньшей емкостью (например, на ДЭАЭ-целлюлозе). Фосфодиэфирный метод пригоден для получения веществ лишь в небольших количествах. Однако нейтрализация зарядов путем этерифи-кации подходящими защитными группами перед фосфорилирова-нием нуклеозидов устраняет проблемы, упомянутые выше. В этом случае продуктом реакции конденсации является фосфотриэфир. Фосфотриэфирный метод позволяет работать с большими количествами веществ. Ниже описаны некоторые защитные группы, используемые для блокирования фосфата. [c.167]

Так, при очистке так называемого маннитол-специфичного фермента II Е. oli (входящего в состав системы фосфорилирования сахаров, переносимых через мембрану) для извлечения фермента из мембраны использовали 0,5%-ный раствор ДОХ. В его присутствии фермент сажали на колонку гексилагарозы. При элюции в раствор ДОХ добавляли еще и Луброл РХ до 0,5%. Этот детергент не только способствует элюции, но и необходим для проявления активности фермента, поэтому дальнейшую очистку — путем ионообменной хроматографии на ДЭАЭ-целлюлозе — вели тоже в присутствии [c.185]

Двумерная и одномерная ионообменная ТСХ на иластинках импрегнированной полиэтиленимином целлюлозы ( РЕ1-се11и1озе ) и ДЭАЭ-целлюлозы нуклеозидов или нуклеотидов для определения нуклеотидного состава нуклеиновых кислот, включая идентификацию минорных нуклеозидов элюцию ведут, как правило, солями лития или аммония, используя также вариации pH соответствующ,их буферов. [c.460]

Двумерное фракционирование олигонуклеотидов в первом направлении — электрофорезом в кислом пиридин-ацетатиом буфере на полоске ацетилцеллюлозы, во втором — гомохроматографией или элюцией солевым градиентом на пластинке ДЭАЭ-целлюлозы. [c.460]

С тех пор метод эволюционировал особенно плодотворным оказалось введение теми же авторами для разделения во втором направлении хроматографии на пластинках ДЭАЭ-целлюлозы с элюцией так называемой гомосмесью ( гомохроматография ). Такой вариант двумерного фракционирования олигонуклеотидов подробно описан в статье Баррелла, основные положения которой (для сопоставления с последующими модификациями) пмеет смысл теперь рассмотреть [Barrell, 1971]. [c.496]

Пластинку ДЭАЭ-целлюлозы готовпли сами, смешивая ионообменную целлюлозу MN 300 DEAE с обычной волокнистой целлюлозой типа MN 300 в пропорции 1 7,5 (а для крупных олиго-нук-леотпдов — 1 10). Без такого разбавления элюция олигонуклеотидов с иластинки продажной ДЭАЭ-целлюлозы была бы затруднительной. [c.497]

Хроматография на ДЭАЭ-целлюлозе. ДЭАЭ-целлюлозу подготавливают в соответствии с инструкцией (с. 109), заполняют колонку (3x25 см) и уравновешивают буфером (реактив № 2). Наносят раствор белка и проводят элюцию в линейном градиенте того же буфера, содержащего О—0,3 М КС1. Скорость элюции — 90 мл/ч. Собирают фракции по 9 мл, определяют в них содержание белка и ферментативную активность. Фракции, в которых обнаружена активность гексокиназы, объединяют и проводят повторную хроматографию на ДЭАЭ-целлюлозе. Для этого подготавливают колонку размером 1,4X15 см. Белок элюируют буфером (реактив 2) (около 200 мл), содержащим О—0,3 М КС1. Скорость элюции — 35 мл/ч. Собирают фракции по [c.218]

Такую смесь меченых фрагментов олигонуклеотида снова подвергают двумерному фракционированию электрофорезом на ацетилцеллюлозе и гомохроматографией на ДЭАЭ-целлюлозе, как описано выше, а затем проводят авторадиографию. Однако теперь вместо разбросанных по всей иластпнке иятен фингерприита получается зигзагообразная цепочка следующих друг за другом пятен (рис. 173), анализ расположения которых дает информацию о последовательности нуклеотпдов в олигонуклеотиде. [c.504]

Навеску порошка сорбента суспендируют в 50-кратном и более объеме дистиллированной воды, перемешивают и оставляют набухать на ночь. Слой жидкости над ионообменником декантируют, снова заливают дистиллированной водой, перемешивают и через 2—2,5 ч верхний слой жидкости декантируют вместе с неосевшими мелкими частицами. К оставшемуся осадку приливают 50-кратный объем 0,5 н. NaOH, тщательно перемешивают и через час ионит фильтруют через воронку Бухнера Осадок на воронке промывают водой до pH 7,0. Затем ионит перемешивают в 50-кратном объеме 0,5 н. НС1 и через 30—60 мин (время обработки ионита кислотой не должно быть большим) отмывают дистиллированной водой примерно до pH 5,0. На следующем этапе в случае анионитов, например ДЭАЭ-целлюлозы, сорбент повторной обработкой щелочью переводят в ОН -форму. Для этого его суспендируют в 50-кратном объеме 0,5 н. NaOH, перемешивают и через час отмывают дистиллированной водой до pH воды. В случае катионитов, например КМ-целлюлозы, сорбент повторной обработкой кислотой переводят в Н+-форму. Для этого его суспендируют в 50-кратном избытке [c.109]

Олигонуклеотиды несут большой отрицательный заряд, поэтому они с успехом могут быть разделены на слабых крупнопористых анио-нообменниках. Для этой цели используют колонки, заполненные ДЭАЭ-сефадексом, ДЭАЭ-целлюлозой, Эктеола-целлюлозой и др. Нуклеотиды элюируются с колонки в градиенте концентрации Na l в порядке увеличения их молекулярной массы. Для подавления неспецифической сорбции нуклеотидов на полисахаридных матрицах хроматографию проводят в присутствии 7 М мочевины. [c.177]

Колонку размером 1x20 см наполняют ДЭАЭ-целлюлозой. Подготовку ионообменника и заполнение колонки см. на с. 109. Сорбент промывают 2 М Na l до тех пор, пока поглощение элюата при 260 нм не станет менее 0,02. Затем колонку промывают 5—10 объемами 0,005 М трис-буфера, pH 7,8. [c.177]

Очистка препарата тяжелого меромиозина с помощью ионообменной хроматографии. Для очистки фермента можно также воспользоваться методом колоночной хроматографии. Для этого супернатант после осаждения миозина и легкого меромиозина (15—30 мл) наносят на колонку (2x11 см) с ДЭАЭ-целлюлозой (ДЭАЭ-52, ватман), уравновешенную 50 мМ трис-НС1 буфером pH 7,9. После нанесения белка колонку промывают двумя объемами того же буфера. Белок элюируют линейным градиентом КС1 от О до 0,5 М (2x250 мл). [c.395]

Хроматография на ДЭАЭ-целлюлозе рН-градиентная элюция. На колонку размером 1,2X27 см, заполненную ДЭАЭ-целлюлозой, уравновешенную фосфатным буфером (реактив Л Ь 2), наносят раствор белка. Элюцию проводят в градиенте pH, используя 150 мл буфера (реактив № 2) в смешивающем сосуде, и 150 мл буфера (реактив № 4) во втором сосуде. На колонку можно нанести примерно 10 мг белка. Скорость элюции — 20 мл/ч. Собирают фракции по 4 мл. В процессе хроматографии pH изменяется от 7,0 до 5,0. Первым (после выхода из колонки примерно 100 мл раствора) выходит изозим I и вслед за ним — белок, соответствующий изозиму П. [c.219]

Обработка ДЭАЭ-це люлозой. ДЭАЭ-целлюлозу предварительно уравновешивают 2 мМ калий-фосфатным буфером (pH 7,6) и отжимают на бухнеровской воронке. Порцию отжатого осадка добавляют к центрифугату, полученному на предыдущей стадии (в соотношении приблизительно 1 5), и перевешивают 10—15 мин. Центрифугируют [c.285]

К насыщенному раствору (NH4)2S04 добавляют 2 н. NaOH и доводят pH до 7,8. При постоянном перемешивании медленно, по каплям к 50 мл сыворотки кролика добавляют 80 мл насыщенного раствора сульфата аммония (pH 7,8) и перемешивают в течение 2—3 ч. Центрифугируют суспензию при комнатной температуре 30 мин при 1500 g. Первый осадок содержит все -у-глобулины, другие глобулины и следы альбумина. Растворяют осадок в дистиллированной воде до начального объема сыворотки (50 мл). Очищают фракцию у-глобули-нов вторым и третьим осаждениями. После третьего осаждения растворяют осадок в боратном буфере (pH 8,45) до конечного объема 20— 25 мл. Удаляют сульфат аммония диализом при 4°С против боратного буфера в течение 2—3 дней со сменой буфера утром и вечером. Полученный после диализа препарат иммуноглобулинов обычно содержит небольшой осадок денатурированного белка и слегка опалесцирует. Центрифугируют при 4° С в течение 30 мин при 1400 s. В полученном препарате проверяют содержание белка и титров антител. Определяют белковый состав методом электрофореза в полиакриламидном геле в присутствии ДСН (с. 119). Если полученный препарат у-глобулинов не отвечает требованиям эксперимента по стоте, проводят дальнейшую очистку с применением ионообменной хроматографии на ДЭАЭ-целлюлозе. [c.308]

Получение препарата II изозима гексокиназы. К растворимой клеточной фракции добавляют при помешивании суспензию ДЭАЭ-целлюлозы из расчета 1 мл фракции — 5—10 мг сухой ДЭАЭ-целлюлозы. После 10-минутной инкубации суспензию фильтруют с помощью водоструйного насоса на воронке Бюхнера. Осадок ДЭАЭ-целлюлозы с адсорбированной гексокиназой промывают К-фосфатным буфером, содержащим 40 мМ K I (объем равен половине исходного объема растворимой клеточной фракции). Затем гексокиназу элюируют 200 мМ КС1, приготовленным на К-фосфатном буфере. В целях концентрирования препарата гексокиназы объем элюирующего раствора уменьшен в 3 ра за по отношению к исходному объему растворимой клеточной фракции После 10-минутной инкубации элюат отделяют на воронке Бюхнера [c.375]

Биохимия Том 3 (1980) -- [ c.171 ]

Справочник биохимии (1991) -- [ c.434 ]

Химия углеводов (1967) -- [ c.486 ]

Жидкостная колоночная хроматография том 3 (1978) -- [ c.0 ]

Аффинная хроматография (1980) -- [ c.154 ]

Молекулярная биология клетки Том5 (1987) -- [ c.194 ]

Биохимия нуклеиновых кислот (1968) -- [ c.34 ]

Методы исследований в иммунологии (1981) -- [ c.59 , c.61 , c.166 , c.170 ]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология