Примеры применения электрофореза

ПРИМЕРЫ ПРИМЕНЕНИЯ ЭЛЕКТРОФОРЕЗА. [c.301]

ПРИМЕРЫ ПРИМЕНЕНИЯ ЭЛЕКТРОФОРЕЗА [c.328]

Однако прежде остановимся вкратце на некоторых примерах применения электрофореза и электроосмоса в технике и производстве. [c.117]

Область применения. Имеется много примеров применения колонок для препаративного разделения и очистки смесей белков, пептидов, аминокислот и т. д. Библиографию по крахмальным колонкам можно найти в обзоре [30]. Крахмал особенно пригоден для электрофореза сывороточных белков, которые на нем практически не адсорбируются. Но успешно исследовались и другие объекты в диапазоне pH от 2 до И. [c.90]

Примеры технического применения электрофореза [c.117]

Пуассоновское распределение часто встречается в генетике. В гл. 20 мы рассмотрели примеры использования распределения Пуассона при определении частоты мутаций и числа генов. Другим примером применения пуассоновского распределения к задачам генетики может служить формула для определения генетического расстояния по данным электрофореза (дополнение 26.1). Ясно, что белки с различными электрофоретическими свойствами различны, но заранее неизвестно, состоят ли эти различия в одной или нескольких аминокислотах. Если величина различий между белками, кодируемыми одним локусом, подчиняется распределению Пуассона (а это предположение представляется вполне разумным, поскольку в каждом белке много аминокислот, а среднее число аминокислотных различий между близкородственными видами невелико), то частота идентичных белков, между которыми какие бы то ни было аминокислотные различия отсутствуют, задает значение нулевого члена пуассоновского распределения. Таким образом, если частота тождественных белков равна I, а средняя частота различий-/), то / = = е . Логарифмируя, получаем 1п/= — ) или = — 1п/, т.е. формулу для генетического расстояния, приведенную в дополнении 26.1. [c.270]

До настоящего времени гель-фильтрация в тонком слое находила применение главным образом при разделении белков. Разработаны модификации метода, сочетающие гель-фильтрацию с электрофорезом и иммунной преципитацией. Настоящая глава посвящена методическим аспектам тонкослойной гель-фильтрации, некоторым приложениям метода, а также указанным модификациям. Большое внимание, уделяемое разделению белков, отражается и в подборе конкретных примеров. Однако это не означает, что область применения метода ограничивается этой группой веществ. [c.256]

Пример 11-3. Измерение изменений величины мутантного фермента. Многие методы, применяемые для определения молекулярных масс ферментов, требуют образцов с высокой степенью очистки (например, метод седиментационного равновесия, который будет описан позже) или при использовании не очень чистых образцов дают массы субъединиц (например, ДСН-гель-электрофорез, гл. 9). Использование зональной седиментации позволяет определить молекулярную массу активного фермента непосредственно в неочищенном лизате при применении в качестве метода контроля анализа ферментативной активности. Например, ДНК-полимераза I Е. oli седиментирует при 5 = 5,4. Зоны полимери-зующей и 5 —З -экзонуклеазной активности, связанные с этим белком, седиментируют вместе, поэтому для локализации фермента в градиенте сахарозы можно использовать любую из них. Мутантная форма фермента не обладает полимеразной активностью, однако сохраняет 5 —З -экзонуклеазную. Как следует из рис. 11-26, мутантный фермент обладает значением s = 2,8. Поскольку данная мутация является терминирующей цепь белка, пониженное значение 5 указывает на то, что данный фермент является лишь небольшим фрагментом белка дикого типа и имеет только 0,4% активности. [c.314]

Иммунодиффузию можно сочетать с электрофорезом не только на бумаге, но и на ацетат-целлюлозных мембранах, в крахмальном геле и т. д. Этот метод нашел широкое применение при исследовании белков благодаря высокой специфичности реакции преципитации и очень хорошей разрешаюш,ей способности. Пример разделения приведен на рис. 18. Подробно иммуноэлектрофорез описан в обзорах [33, 52]. [c.100]

Белки после электрофореза чаще всего выявляют, окрашивая электрофореграммы теми или иными красителями. Общие принципы методов окрашивания приведены в разд. 1.15.2, а здесь будут рассмотрены лишь некоторые белковые красители и отдельные примеры их применения. [c.266]

В литературе по биохимии есть примеры применения электрофореза на бумаге для разделения смесей аминокислот и пептидов [4, 6, 7] и олигонуклеотидов [8—10]. В качестве метода регистрации радиоактивности чаще всего, особенно для двумерных электрофоре-тограмм, используют авторадиографию, хотя некоторые исследователи предпочитают радиосканирование. [c.135]

Рассмотренный только что для обычной сефарозы, этот вариант элюции, естественно, находит применение и при использовании гидрофобизированной агарозы. В качестве примера процитируем недавно опубликованную работу по мягкой очистке HMG-белка из ядер печени на колонке со-аминобутилагарозы. Этот белок растворим в растворе сульфата аммония вплоть до концентрации, достигающей 70% от насыщения. Сначала такой концентрацией СА в нейтральном 0,01 М трис-буфере высаливали из экстракта ядер большое количество балластного белка. Затем надосадочную жидкость, содержащую около 40 мг белка, вносили на колонку размером 2 X X 30 см, уравновешенную тем же раствором СА. Элюцию вели снижающимся линейным градиентом концентрации СА в том же буфере (500 мл) со скоростью 20 мл/ч, т. е. примерно 7 мл/см -ч. Низкая скорость элюции характерна для всех опытов такого рода ввиду повышенной вязкости концентрированных солевых растворов и соответствующего снижения скорости диффузии макромолекул. Около 30% белка не садилось на колонку и удалялось при первоначальной промывке. В ходе элюции выходило четыре пика, в первом из которых методом электрофореза идентифицировали HMG-белок [ onner. omings, 1981]. [c.181]

В литературе имеются многочисленные примеры разделения витаминов, поли- и моносахаридов (в виде комплексов с боратом), органических кислот, аминов, красителей, ионов металлов и т. п. Здесь нет возможности даже кратко рассмотреть все возможные применения электрофореза. Много сведений можно найти в книге Рибейро с сотрудниками [20], а также в работах [36, 37]. Электрофорез сыворотки крови подробно описан Г. В. Троицким [6]. [c.106]

Конъюгированные белки. Здесь следовало бы сказать о всевозможных простетических группах, которые соединяются с белками, образуя белковые конъюгаты. Полипептиды, с которыми соединены простетические группы, называются апопротеи-нами, а если такой комплекс обладает каталитической активностью, его называют голоэнзимом. В качестве примера можно указать на гемопротеины (цитохромы, пероксидазы, каталазы) и порфиропротеины (флавопротеины и металлопротеины). В этом случае, как показали последние исследования, применение различных детергентов приводит к образованию разных комплексов хлорофилла, имеющих неодинаковую подвижность при электрофорезе [97]. [c.44]

Двумерные разделения в настоящее время выполняются почти исключительно на бумаге, хотя известны подобные разделения на геле и комбинированные — на бумаге и геле. Ниже мы кратко опишем процедуру двумерного разделения на бумаге, не касаясь принципов методов хроматографии и электрофореза (см. соответствующие статьи настоящего сборника, а также работы [1, 2]), а затем приведем примеры применения двумерных методов разделения на бумаге. При разделении пептидов обычно используется Whatman 3 ММ или хроматографическая бумага с номи- [c.234]

Для большинства методов этой группы характерно отсутствие четкой границы в приложении к разделению гомогенных и гетерогенных смесей веществ. Например, электрофорез возник и до сих пор иногда рассматривается только как метод разделения коллоидных частмп. Более того, по сути своей — это метод разделения заряженных частиц за счет их различных подвижностей в электрическом поле. В общем случае размеры частиц не оговариваются, и область применения метода охватывает и простые ионы, и макроионы аминокислот, и заряженные частицы коллоидов и взвесей. Аналогично обстоит дело с ультра-центрифугированием и ППФ-методами. Даже в тех случаях, когда метод имеет достаточно четкие границы применимости по размерам или массам разделяемых частиц, их положение на условной щкале дисперсности частиц различной природы не пршязано к принятой границе гомогенности, Существование верхней границы чаще всего определяется принципом целесообразности если задача легко рещается более простым методом, нет необходимости использовать более сложный. Наличие нижней границы может быть связано как с объективными факторами, определяемыми природой явления, используемого для разделения, так и с техническими возможностями практической реализации условий, необходимых для осуществления процесса разделения. Наиболее наглядный пример — ультрацентрифугирование. Очевидно, что с помошью ультрацентрифуги можно выделить взвешенные частицы из раствора, но в этом нет необходимости. А при переходе к разделению частиц на молекулярном уровне в случае жидких фаз возможности метода ограничены фракционированием макромолекул. Добиться, фракционирования простых молекул удается только в газовой фазе, но при ус ювии ра зряжения и чрезвычайно высоких скоростей вращения, реализуемых только при магнитной подвеске ротора центрифуги. [c.242]

Примеры применения ТСЭ встречаются в литературе довольно редко, однако этим методом разделяли меченые аминокислоты, пептиды и нуклеотиды. В лаборатории автора методу ТСЭ отдают предпочтение перед методом электрофореза на бумаге из-за быстроты разделения и простоты проведения анализа и используют при обнаружении соединений с кислым и основным характером в смесях метаболитов пестицидов. Можно указать случай, когда без применения ТСЭ лабильную малонил-грунну в менаболитах растений обнаружить невозможно [20]. [c.138]

К электрофорезу в геле эти методы, разумеется, прямого отношения не имеют, так как являются примерами электрофореза в свободной жидкости. Именно с этого начиналось применение электрофореза для фракционирования биополимеров. Однако за последнее десятилетие, во всяком случае для аналитических целей, электрофорез в свободной жидкости был полностью вытеснен электрофорезом в гелях или на твердых носителях (бумаге, различных производных целлюлозы, полиамидных пленках и т. д.), который широко применялся при фракционировании пептидов, аминокислот и других сравнительно низкомолекулярных биологически важных молекул, в том числе и в высоковольтных вариантах. В свое время, например, очень важную роль сыграл метод фракционирования олигонуклеотидов гидролизата РНК двумерным электрофорезом. В первом направлении разделение вели на полосках ацетатцеллюлозы в пиридин-ацетатном буфере (pH 3,5) с добавлением 7 М мочевины, во втором — на ДЭАЭ-бумаге в 7%-ной НСООН [Brownlee, 1972]. Ввиду малой емкости ацетатцеллюлозы общая загрузка не превышала 0,1 мг гидролизата РНК, поэтому использовали препараты, меченные радиоактивным фосфором. [c.119]

Применение радиоактивных изотопов значительно повышает чувствительность аналитических методов и позволяет проводить такие исследования, которые иначе было бы невозможно выполнить. Поэтому было приложено немало усилий, чтобы разработать методы выявления радиоактивных веществ после электрофореза в различных поддерживаюии1Х средах. Чувствительность определения радиоактивности зависит преимущественно от следующих факторов во-первых, от энергии и природы излучения и, во-вторых, от свойств поддерживающей среды. Па-пример, у-лучи легко обнаружить в любой электрофоретической среде, тогда как для обнаружения р-излучателей, особенно Н, и 5, требуется либо тщательная подготовка опыта, если они определяются с помощью жидкостного сцинтилляционного счетчика, либо высокая концентрация этих изотопов или длительное время экспозиции, если применяется радиоавтография. [c.204]

Следует привести еще несколько примеров успешного применения гель-фильтрации в тонком слое. Линк [36] показал, что фракционирование в тонком слое можно проводить в присутствии 8М мочевины или 6,5 М хлоргидрата гуанидина. В этих условиях он сопоставил скорости миграции нативного и модифицированного (восстановленного и алкилированного) р-белка из спинномозговой жидкости. Совпадение скорост-ей миграции обоих образцов указывало на отсутствие в белке субъединиц с различным молекулярным весом. В сочетании с электрофорезом тонкослойную гель-фильтрацию применяли как удоб1у>1й метод контроля при выделении аминоацил-т-РНК-синтетаз [37]. При сопоставлении результатов анализа путем тонкослойной гель-фильтрации на G-200 двух фракций с валил-т-РНК-синтетазной активностью, но несколько различавшихся в функциональном отношении, оказалось, что обе фракции довольно близки по размерам молекул [38]. Радола [67] использовал тонкослойную гель-фильтрацию для решения ряда задач к ним относится анализ сывороточных белков животных и человека, растворимых белков культуры клеток млекопитающих in vitro, растворимых белков из листьев шпината. [c.266]

В предыдущем разделе мы рассматривали ситуацию, когда все генотипы имеют различное фенотипическое проявление. Это позволяет непосредственно оценить частоты всех возможных генотипических классов. Это возможно, например, при исследованиях полиморфизма белков методом электрофореза. Однако во многих важных случаях невозможно отличить гетсрозиготы от гомозигот из-за доминирования одних аллельных генов над другими. В результате частоты генов нельзя оценить непосредственно по частоте генотипов, так что единственной возможностью становится применение закона Харди-Вайнберга. Рассмотрим пример. [c.181]

Эта глава включает материал по основным физикоаналитическим методам и процедурам разделения фотометрии, ионселективным электродам, хроматографии, измерению радиоактивности, гель-электрофорезу и ма-нометрии. Их использование в бактериологии во многих случаях сыграло важную роль и стало почти характерной чертой этой области науки. В настоящем руководстве приводится общее описание как достоинств, так и слабых сторон методов, специальных методик, прописей, а также примеров их применения в исследованиях бактерий. [c.167]

Промышленность выпускает несколько типов приборов для крупномасштабного колоночного препаративного электрофореза. Примером может служить колонка Пората фирмы LKB. Трубка в ней снабжена внутренним и внешним холодильниками. В ходе электрофореза сместившиеся ко дну колонки фракции можно извлекать, прокачивая буфер через специальные выводы. Этот метод был применен, в частности, для выделения транофер рина из сыворотки крови человека [405]. [c.52]