Хроматография в колонке, заполненной ионообменником в Ag -форме

Схема процесса хроматографии белков сводится к следующему. Колонку заполняют гранулированным ионообменником, переведенным в солевую форму и отмытым от примесей избыточной кислоты или щелочи. Забуференный белковый раствор медленно вводят в колонку. Начинается процесс частичного, замещения подвижных ионов ионообменника ионами белков. Белки, обладающие большей способностью вытеснять подвижные ионы (N3+ ацетата и др.) и связываться с функциональными группировками полимера, задерживаются в первую очередь. Белки, в меньшей мере способные конкурировать с подвижными ионами, задерживаются позже. Обычно все белки разделяемой смеси фиксируются при этом в верхней части колонки. [c.28]

Колоночная система подавления была предложена в первой работе по ионной. хроматографии [1]. Реакция подавления, т. е. перевод элюента и определяемого иона в соединения, сильно различающиеся по своей электропроводности, осуществляется в колонке, заполненной ионообменником высокой емкости. Эта колонка устанавливается после разделяющей перед кондукто-метрическим детектором. При определении анионов (см. табл. 4.1) подавляющую колонку заполняют катионообменником высокой емкости в Н-форме. В большинстве случаев в подавляющей колонке элюент переводят в малодиссоциированную кислоту, а определяемые анионы в сильные кислоты. При определении анионов слабых кислот наблюдается обратная картина элюент переводят в сильную кислоту, а анионы — в слабые кислоты. [c.67]

Для современной ионообменной хроматографии ис- пользуются смолы с постоянным размером частиц в пределах 5—50 мкм. Частицы ионообменных смол несколько крупнее, чем наполнители с обращенной фазой для жидкостной хроматографии. Ионообменники представляют собой либо органические смолы с частицами сферической формы, либо пористый силикагель, с которым химически связана ионообменная фаза. Как и при анализе органических продуктов методом жидкостной хроматографии, для достижения высокой эффективности ионообменные колонки должны быть правильно заполнены. Колонки имеют длину 250—1000 мм и внутренний диаметр 2—5 мм. Для уменьшения размывания пиков Б современных системах применяют соединительные трубки малого диаметра (0,3 мм). Предпочтение отдается колонкам из нержавеющей стали, хотя для работы с коррозионно-активными элюентами необходимы пластиковые или стеклянные колонки. [c.12]

При работе с КМ-целлюлозой в NH -форме удобно реализовать возможность (в), поскольку связывание со смолой в NHf-форме довольно слабое, и это позволяет вести элюирование в мягких условиях, не повреждая полипептидные цепи. При хроматографии на КМ-целлюлозе обычно используются буферные растворы с pH 4—6,5 и молярностью 0,01—0,5 М. Если, например, в качестве стандартного раствора выбран 0,01 М аммонийацетатный буферный раствор pH 4, им же следует уравновесить КМ-целлюлозу. Однако иногда при переводе ионообменника из Н -формы в ЫН -форму возникают затруднения. Чтобы ускорить этот процесс, рекомендуется предварительно отмытую КМ-целлюлозу в течение по меньшей мере 10 мин перемешивать с 10 объемами стартового буферного раствора. Суспензию оставляют для отстаивания и надосадочную жидкость декантируют. Размешивание в стартовом буферном растворе повторяют до тех пор, пока pH и электропроводность надосадочной жидкости не станут стабильными. После этого заполняют колонку КМ-целлюлозой в стартовом буферном растворе и уплотняют смолу до ее конечного объема. [c.201]

Ионообменная хроматография заключается в ионном обмене между полимером, заполнившим колонку, и заряженным белком, пропускаемым через колонку. Различают два типа ионообменников. Катионообменник — КМ-целлюлоза — это полимер целлюлозы, к которой по ОН-группе пришита карбоксиметильная группа. Подготовка смолы к работе — пропускание через нее 0,5М NaOH. В результате образуется солевая форма с катионами N3+. Затем пропускаем через колонку катионы белка. Они вытесняют На и занимают его место. Прочность связи (электростатической) зависит от величины положительного заряда, т.е. числа ионизированных ННз" -групп. Анионообменник — ОЕЛЕ-целлюлоза. Предварительная обработка анионообменника щелочью или кислотой приводит к образованию солевой формы. Ионы С1 или ОН" обмениваются на анионы белка. В случае ионного обмена прочность связи белка с ионитом определяется величиной заряда белка. Для разделения кислых и нейтральных белков используют анионообменники, для разделения основных белков — катионообменники. Элюцию осуществляют 1) буферными растворами с изменяющимися значениями pH (возрастающими или убывающими) при этом белки разделяются в соответствии с их зарядами, т.е. отходят от заряженной группы ионита в Р1 2) буферным раствором того же значения pH, но содержащим катионы (анионы) с большим сродством к ионообменнику (вытеснение по величине заряда). [c.51]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология