Мутагенез и методы выделения мутантов

Индуцированный мутагенез и отбор продуктивных мутантов до настоящего времени остается важным методом повышения активности промышленных штаммов микроорганизмов, например в селекции продуцентов антибиотиков. При этом обработанную мутагеном культуру рассеивают на плотные питательные среды с таким расчетом, чтобы получить отдельные колонии, а затем исследуют каждый клон на продуктивность. Выделив более продуктивный вариант, процедуру мутагенеза и отбора повторяют, т. е. проводят ступенчатый отбор. Обычно ступенчатый отбор включает этапы мутагенеза, а также выделение спонтанных мутантов. Схема получения продуцентов этим методом имеет вид перевернутого дерева (рис. 7). [c.77]

Мутагенез и методы выделения мутантов [c.70]

Для того чтобы использовать мутагенез в генетических экспериментах с бактериями, необходимо согласованно провести ряд последовательных этапов работы, а именно 1) определить, какой тип мутанта соответствует цели исследования 2) выбрать наиболее подходящий мутаген для индукции желаемой мутации 3) создать условия для выражения новой мутации 4) произвести обогащение по желаемому мутанту для повышения вероятности его выделения 5) обнаружить новый мутант соответствующими прямыми и непрямыми методами отбора 6) изучить свойства мутанта и 7) картировать локус новой мутации, т. е. определить ее расположение в бактериальном геноме. [c.8]

В данной главе описано также два специальных метода один из них касается выделения щтаммов, у которых мутации локализованы в определенном участке бактериального генома (разд. 13.8.1), другой служит для оценки мутагенности различных канцерогенов (разд. 13.8.2). Рецепты приготовления сред даны в разд. 13.9, список поставщиков бактериальных щтаммов, специальных реактивов и оборудования приведен в разд. 13.10. Литературные источники обзорного типа по мутагенезу и выделению мутантов перечислены в разд. 13.11.1, а ниже приведена специальная литература по отдельным методикам (разд. 13.11.2). [c.9]

Для генетического анализа какого-либо вида организмов необходимо выявление мутантов с определенными физиологическими дефектами (отличиями от особей, принятых за дикий тип). До недавнего времени такие мутанты получали только в результате статистического (случайного, ненаправленного, общего) мутагенеза популяции организмов с последующей селекцией или отбором мутантов, обладающих характерным фенотипом. Измененный ген в выделенных мутантах может быть затем локализован на геноме путем комплементационного или рекомбинационного анализа с другими мутантами или методами физического картирования. Появление методов генетической инженерии позволило с помощью клонирования в молекулярных векторах извлекать отдельные гены даже из очень больших и сложно организованных геномов. Для клонированных генов может быть расшифрована последовательность нуклеотидов, а на ее основе — аминокислотная последовательность кодируемого белка. Более того, можно клонировать, а затем сравнивать последовательности гена (белка) дикого типа и мутантных форм. Исходя из полученной информации можно определить, какие изменения структуры гена (белка) приводят к тому или иному изменению фенотипа организма. [c.171]

Мутанты с измененной чувствительностью к эффектору. Мутантов, у которых изменена чувствительность какого-нибудь аллостерического фермента к эффектору, можно также выделять с помощью совершенно иного принципа, а именно как ревертантов к ауксотрофии. При этом поступают следующим образом. Сначала вьщеляют мутантов с дефектом регуляции, ауксотрофных в отношении метаболита, который хотят получить как конечный продукт, накапливающийся в среде. Затем среди этих ауксотрофных мутантов отбирают таких, у которых неспособность к синтезу данного метаболита обусловлена дефектом в аллостерическом ферменте соответствующего пути биосинтеза После этого из полученной мутантной популяции выделяют прототрофных ревертантов, которые не нуждаются в этом конечном продукте, так как сами спо-собнь его синтезировать. Среди ревертантов отбирают тех, которые выделяют нужный продукт в среду. Их можно выявить биоавтографиче-ским методом (разд. 10.2.2) или распознать по росту сателлитных колоний. О таком мутанте, полученном в результате двукратного отбора, можно составить себе следующее представление. У него после первой мутации перестал функционировать каталитический центр одного из аллостерических ферментов. Вторая мутация затронула структуру (конформацию) всей белковой молекулы, в результате чего каталитическая активность фермента восстановилась, но аллостерическая чувствительность оказалась утраченной. Как в этом, так и во многих других случаях для выделения желательного мутанта необходим ряд этапов, включающих мутагенез и отбор. [c.500]

Как индуцировать мутации в фаге К гидроксиламином in vitro указано в методике 8. Это весьма обычный метод мутаге-низирования как фага, так и выделенной в очищенном виде ДНК. Его преимущество заключается в высокой специфичности (индуцируются транзиции G—>-А) и большой эффективности. При работе с умеренным фагом контролировать эффективность мутагенеза очень просто — достаточно следить за появлением среди выжившего фага мутаций, приводящих к образованию прозрачных бляшек. По этой методике можно выделить амбер-мутантов фага К. С помощью спот-теста на комплементацию (методика 10) их можно охарактеризовать по их комплементации с амбер-мутациями в большинстве известных генов фага Л. Комплементационный анализ позволит определить положение полученных мутаций на карте. Мутации по ТЕМ-р-лактамазе можно использовать для картирования делеционных мутантов в этой модели клонированного фрагмента (эксперимент 6). [c.36]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология