Мутации амбер

Рис. 9.15. Пары БУ—А и БУ—Г. тем, что мы не знаем, какой вырожденный кодон находится в данном месте ДНК. Однако определение аминокислотного состава ряда ревертантов амбер-мутантов (т. е. результатов мутаций, приводящих к бессмысленному кодону УАГ) в белке головки фага Т 4 показало, что замены пар оснований в различных локусах цистрона происходят с разными вероятностями [143]. Мутации ЦАА-)-УАА в локусе г II фага Т4 индуцируются ЫНгОН с частотами, меняющимися в 20 раз в зависимости от локуса ДНК [144]. Сходные факты обнаружены при ультрафиолетовой реверсии этих мутаций [145]. Все приведенные выше факты могут объясняться и тем, что вероятности мутаций внутри цистрона зависят от направления репликации гена, близости контрольных, регулирующих элементов и т. д. Однако Кох получил прямые доказательства влияния соседних пар оснований на мутагенез [146].

Нуклеотидную последовательность кодонов-терминаторов сначала определили, исходя из особенностей мутаций, вызвавших их образование. Зная, какие аминокислоты находились на месте мутантных кодонов-терминаторов, установили, что амбер-кодону соответствует триплет UAG, охра-кодону-UAA, а опал-кодону-UGA. Позднее эти же значения были получены при определении нуклеотидной последовательности генов, несущих соответствующие нонсенс-мутации. [c.61]

Процесс упаковки фаговой ДНК в зрелые фаговые частицы осуществляется в смеси бесклеточных экстрактов двух штаммов Е. соИ, лизогенных по дефектным бактериофагам X. Обычно в одном штамме амбер-мутацией инактивирован один из белков фагового капсида (продукт гена Е), а в другом - ген А, продукт которого необходим для включения фаговой ДНК в головку бактериофага. Имеются и другие пары лизогенных штаммов Е. соН, позволяющие производить упаковку ДНК в фаговые частицы с использованием тех же общих принципов. Объединение бесклеточных лизатов обоих штаммов Е. соИ приводит к взаимной комплементации недостающих функций с помощью соответствующих белков дикого типа. Таким образом, в объединенных экстрактах имеются все компоненты, необходимые для сборки зрелых инфекционных фаговых частиц, в них происходит упаковка рекомбинантной ДНК с эффективностью образования [c.82]

По чувствительности к различным супрессорам нонсенс-мутации делятся на три класса. Исходный класс нон-сенс-мутаций, изолированных у фага Т4, был назван ам-бер-мутациями. Все эти мутации оказались чувствительными к однопу супрессору Е. соН. Анализируя способность мутантов фага размножаться на разных штаммах Е. соН, несущих амбер-супрессоры, обнаружили новый класс нонсенс-мутаций, названный охра-мутациями. Мутации типа охра не супрессируются амбер-суп-рессорами, а соответствующие им супрессоры называют охра-супрессорами. Интересно, что охра-супрессоры способны супрессировать и амбер- и охра-кодоны, что говорит о возможном сходстве этих типов нонсенс-мутаций. Позднее был обнаружен третий класс нонсенс-мутаций, которых назвали опал-мутациями. Опал-мутации не чувствительны ни к охра-, ни к амбер-супрессорам, а их супрессоры не действуют на кодоны-терминаторы типа охра и амбер . [c.61]

Ген дикого типа содержит кодон UUG, детерминирующий включение лейцина. Этот кодон узнается тРНК с антикодоном AA. Мутация превращает исходный кодон в UAG, с которым взаимодействует фактор освобождения. Мутация в гене, кодирующем тирозиновую тРНК, превращает ее антикодон из GUA в UA, позволяя тем самым взаимодействовать ей с амбер-кодоном. В результате синтезируется белок обычной длины, в котором исходный лейцин заменен на тирозин. [c.99]

Эффективность супрессии амбер-мутаций весьма высока и составляет в зависимости от конкретной системы от 10 до 50%. Допустим, что клетка не может быть толерантной к такому высокому уровню супресии природных терминаторов, тогда очевидно, что амбер (amber) кодоны используются в конце генов с меньшей частотой, чем другие нонсенс-триплеты. [c.100]

АМБЕР-МУТАЦИЯ. Любое изменение в ДНК, приводящее к появлению амберькодонов вместо триплета, кодирующего аминокислоту. [c.519]

Различают крупные хромосомные перестройки (выпадение, перемещение на новое место или инверсия иа 180° значительных фрагментов хромосом) и точечные мутации. Именно последние представляют наибольший интерес для фотобиологии. При точечных мутациях происходит замена одного нз оснований в ДНК на другое, выпадение (делеция) или вставка одного нз нуклеотидных остатков. Замена пуринового основания на пуриновое и пиримидинового — на пиримидиновое называется транзицией, а пуринового на пиримидиновое или наоборот — трансверзией. Следствием и транзиций и трансверзий может быть 1) образование бессмысленных кодонов, ие кодирующих аминокислоты УАГ (амбер-мутация), УАА (охра-мутация) и У ГА. Эти три типа мутаций называются нонсенс-мутациями и приводят к прерыванию синтеза либо и-РНК, либо белка 2) изменение смысла кодона, приводящего к включению в белок неверной аминокислоты (м иссенс-мутации). [c.305]

Как индуцировать мутации в фаге К гидроксиламином in vitro указано в методике 8. Это весьма обычный метод мутаге-низирования как фага, так и выделенной в очищенном виде ДНК. Его преимущество заключается в высокой специфичности (индуцируются транзиции G—>-А) и большой эффективности. При работе с умеренным фагом контролировать эффективность мутагенеза очень просто — достаточно следить за появлением среди выжившего фага мутаций, приводящих к образованию прозрачных бляшек. По этой методике можно выделить амбер-мутантов фага К. С помощью спот-теста на комплементацию (методика 10) их можно охарактеризовать по их комплементации с амбер-мутациями в большинстве известных генов фага Л. Комплементационный анализ позволит определить положение полученных мутаций на карте. Мутации по ТЕМ-р-лактамазе можно использовать для картирования делеционных мутантов в этой модели клонированного фрагмента (эксперимент 6). [c.36]

Приступайте к обработке гидроксиламином (методика 8). Чтобы определить выживаемость и появление прозрачных бляшек в процессе обработки, отбирайте пробы и высевайте различные разведения их на чашки для фага к при 34°С. Если хотите выявить амбер-мутации в генах фага к, то обработанные мутагеном препараты высевайте также на газон штамма DB6431, который содержит супрессор амбер-мута-ций (или на любой другой супрессорный штамм см. список штаммов). Чтобы выявить мутации, приводящие к отсутствию -лактамазы, высевайте на чашки Red (методика 7). [c.37]

Имеющийся в этом штамме супрессор супрессирует амбер-мутации в генах 12 и 13 фага. Индукция при 40°С происходит из-за мутации 2ts29. Мутация в гене int фага обусловливает высокую частоту неправильного вырезания профага, и в результате фаги получаются дефектными, но включают элемент ТпЮ. [c.69]

В. Обычная схема выделения амбер-мутаций в генах фага включает высев мутагенизированного фага на чашку с газоном SU+ при 30°С и перекалывание образовавшихся бляшек на три чашки с газоном su (которую инкубируют при 40°С), с газоном su+ (которую инкубируют при 40°С) и еще на одну чашку с газоном sm+ (которую инкубируют при 30°С). Следуя такой схеме, можно выделить и амбер-мутантов, и температурочувствительных мутантов. [c.75]

В 1962 г. С. Бензер и С. Чеймп описали так называемые амбер-мутации в локусе гП фага Т4. Они могли ревертировать к дикому типу за счет дополнительных (супрессорных) мутаций в геноме бактерии-хозяина. Аналогичные амбер-мутации, подавляемые теми же генами-супрессорами, были обнаружены во многих генах бактериофага Т4 и бактерии Е. oli. При использовании систем ген — фермент было показано, что амбер-мутации приводят к преждевременному прекращению роста полипептидной цепи и в клетках синтезируются только N-терминальные фрагменты соответствующих белков. В результате амбер-супрессии синтез полипептидов восстанавливается. [c.400]

Наличие несущественной области в фаговом геноме является важным условием для конструирования гибридов. Однако у нитевидных фагов большинство амбер-мутаций приводит к гибели фага при непермиссивньк условиях. В геноме этих фагов существует лишь межгенная область IR размером 500 нуклеотидов, во многие места которой могут быть внесены изменения без нарушения жизнеспособности фага. Репликативная форма фаговой ДНК не имеет [c.111]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология