Титрование первичных антител

Б. Титрование первичных антител [c.222]

Предварительное титрование первичной сыворотки или секрета. Довольно часто исследователь приблизительно представляет, каков может быть титр специфических антител в сыворотке. В противном случае мы прибегаем к тестированию серии логарифмических разведений сыворотки, как показано на рис. 14-5, Л. Для приготовления разведений в зависимости от конкретной системы можно использовать [c.222]

ООО. Охарактеризованные таким образом препараты были использованы для определения активности антител к динитро-фенильным группам по отношению к ДНФ-желатине, иммобилизованной на поверхности лунок. Полученные результаты (рис. 14-10) согласуются с выводами о том, что сигмоидный характер кривой титрования в области высоких концентраций антител обусловлен пространственными затруднениями. Наибольшим сходством с кривой связывания первичных антител обладает кривая титрования конъюгата, имеющего состав [1 молекула Fab — 1 молекула щелочной фосфатазы]. [c.230]

Из рис. 14-9 видно также, что в то время как сами первичные антитела линейно связываются на протяжении трех логарифмических единиц шкалы, их косвенное обнаружение в ходе последующего анализа характеризуется кривой иного рода. Это означает, что сигмоидный профиль кривой титрования в микроварианте метода ELISA обусловлен не связыванием первичных антител с иммобилизованным на подложке причинами. [c.229]

Влияние размера конъюгата. Сигмоидный характер кривой титрования в ее верхней области, т. е. в области относительно высокой загрузки первичными антителами, позволяет предположить, что а) в области более высокой концентрации антител пространственные затруднения для работы системы детектирования возрастают или б) связывание конъюгатов с различным молярным соотношением фермент антитело или с ферментативной активностью, отличной от активности конъюгатов, преимущественно связывающихся в области низкой концентрации антител, происходит избирательно. Второе из названных предположений кажется маловероятным ввиду однородности состава ИФК, используемого в a-ELISA (см. рис. 14-2), Поэтому мы исследовали влияние на форму кривой титрования конъюгатов различного состава с разной способностью вызывать пространственные затруднения при связывании. Для этого использовали системы, схематически показанные на рис. 14-1. Размер частиц конъюгата определяли ультрацентрифугированием в сахарозном градиенте аналогично тому, как это делали при получении данных на рис. 14-2. Было установлено, что конъюгаты, полученные с помощью глутарового альдегида, представляют собой крупные агрегаты, в то время как конъюгаты на основе Fab однородны по размеру и имеют мол. массу [c.229]

Кроме метода титрования существуют и другие способы количественного определения антигенов путем иммуноэлектрофореза. Был описан метод, основанный на принципе простой иммунодиффузии f80, 81, 1962], при которой углубления для антигенов и антител примыкают непосредственно друг к другу. Антиген, находящийся в одной части геля, диффундирует в другую, содержащую антитела, и на границе этих двух частей образуется линия преципитации. Первичная зона преципитации растворяется затем в избытке антигена, продолжающего поступать благодаря диффузии в ту часть геля, где находятся антитела. Растворимые комплексы антиген-антитело вновь преципи-тируют при реакции с антителами в прилежащей зоне геля. Описанная последовательность событий — преципитация, растворение и повторная преципитация — создает впечатление, что преципитат движется. Путь, пройденный передним краем преципитата за тот или иной период времени, может служить мерой для определения концентрации антигенов. При этом в качестве стандартов необходимо использовать образцы с известной концентрацией антигена. При количественном иммуноэлектрофорезе для проведения простой иммунодиффузии разделенных компонентов в геле вырезают широкую канавку, непосредственно примыкающую к лунке с антигеном (рис. 85), и заполняют [c.240]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология