Иммуноэлектрофорез количественный

Область применения. Предварительное определение зоны эквивалентности необходимо для постановки количественной реакции преципитации (см. стр. 125) и иммуноэлектрофореза (см. стр. 137). [c.123]

Оси. работы посвящены исследованию адсорбции и электрофореза. Создал (1931 —1935) метод фронтальной адсорбционной хроматографии, с помощью которого смог анализировать качественно и количественно смеси, содержащие аминокислоты, пептиды, углеводы. В результате проведенных им (с 1935) исследований электрофореза разработал метод электрофоретического анализа биоколлоидов с его различными модификациями (микроэлектрофорез, электрофорез на бумаге, иммуноэлектрофорез). Применил электрофоретический метод для решения ряда прикладных задач биохимии — исследования и разделения нормальной и патологической сывороток, изучения чистых белков и их смесей, ферментов, нуклеопротеидов, нуклеиновых и аминокислот и др. С помощью иммуноэлектрофореза заложил основы изучения белковой структуры нормальной сыворотки крови, выделив из нее три различных белка (теперь их обнаружено более 20). [c.428]

Известны четыре широко распространенных модификации иммуноэлектрофореза. Они незаменимы для качественного и (или) количественного определения антигенов (как индивидуальных, так и находящихся в смеси) и значительно облегчают определение специфичности антисывороток. [c.216]

Попытки разработать методы иммунодиффузии, позволяющие количественно оценивать содержание антигенов и антител, делались неоднократно. Одна группа таких методов основьгоается на двойной диффузии в геле по Ухтерлони (см. стр. 131), другая — на измерении скорости диффузии и степени мутности полос преципитации при иммуноэлектрофорезе (стр. 137). Пока эти методы еще не получили широкого распространения. [c.157]

На САМ удобно оценивать количественно содержание фракций. САМ, предназначенную для колориметрических определений, пропитывают парафиновым маслом, например Shell Whitmore Oil 120, или уксусной кислотой, при этом САМ становится прозрачной, и на ней можно измерять поглощение и отражение. Поскольку САМ растворима в ряде органических растворителей, при проведении некоторых количественных определений можно использовать это ее свойство. Полученные растворы можно анализировать, колориметрически или сцинтилляционным методом. Для иммуннодиффузии и иммуноэлектрофореза САМ можно применять даже без агара. Разделяемые на САМ соединения, как правило, дают узкие зоны, что позволяет для большинства типов разделений уменьшить общую длину пути до 6—12 см. Миграция на меньшее расстояние приводит к сокращению длительности электрофореза и меньшему уширению зон под влиянием диффузии. В результате разделение, например, сывороточных белков можно осуществить при градиенте поте.ч-циала в 20—25 В/см за 60—90 мин. [c.293]

Дальнейших успехов в химии гликонротеинов следовало ожидать на основе развития методов и лабораторной техники идентификации и количественного определения малых количеств сахаров и аминокислот, структурного анализа олиго- и полисахаридов, эффективного разделения и очистки белков, оценки гомогенности макромолекул и определения их молекулярных весов. С введением улучшенных методов исчерпывающего метилирования и периодатного окисления углеводов, реагентов (борогндридов щелочных металлов), избирательно восстанавливающих карбонильную группу, аналитической ультрацентрифуги Сведберга, аппарата Тизелиуса для электрофореза с подвижной границей, ультрафиолетовой и инфракрасной спектроскопии, метода меченых атомов, метода фракционирования белков плазмы крови холодным спиртом по Кону, хроматографии на бумаге и на колонках, хроматографии на ионообменниках, полученных из целлюлозы, упрощенных микрометодов электрофореза (электрофорез на бумаге, крахмальном или агаровом гелях), иммуноэлектрофореза и, наконец, последнего по времени, но важного в этой области открытия конститутивных и индуцируемых бактериальных ферментов, действующих избирательно на гетеросахариды, настало время для третьего и наиболее сложного и плодотворного периода исследования гликонротеинов. [c.18]

Используя количественный метод связывания комплемента и применяя очищенный фетуин в качестве стандарта, Бергманн и сотр. [6] показали, что фетуин обнаруживается на наиболее ранних из изученных ими стадиях развития эмбриона, а отношение содержания фетуина к общему количеству белка колеблется в зависимости от возраста эмбриона от 0,4 до 0,5, абсолютное же содержание фетуина изменяется от 10 мг/мл на третьем месяце беременности до 22 мг/мл на девятом месяце. У взрослых животных можно обнаружить около 0,4 мг фетуина на 1 мл сыворотки. С помощью иммуноэлектрофореза Бодманн [7] обнаружил, что антитела к фетуину теленка перекрестно взаимодействуют с одним из компонентов сыворотки эмбрионов овцы и козы, а также с сывороткой крови матери. Эти результаты были подтверждены Бергманном и сотр. [6] с помощью метода диффузии в геле. [c.58]

Кроме метода титрования существуют и другие способы количественного определения антигенов путем иммуноэлектрофореза. Был описан метод, основанный на принципе простой иммунодиффузии f80, 81, 1962], при которой углубления для антигенов и антител примыкают непосредственно друг к другу. Антиген, находящийся в одной части геля, диффундирует в другую, содержащую антитела, и на границе этих двух частей образуется линия преципитации. Первичная зона преципитации растворяется затем в избытке антигена, продолжающего поступать благодаря диффузии в ту часть геля, где находятся антитела. Растворимые комплексы антиген-антитело вновь преципи-тируют при реакции с антителами в прилежащей зоне геля. Описанная последовательность событий — преципитация, растворение и повторная преципитация — создает впечатление, что преципитат движется. Путь, пройденный передним краем преципитата за тот или иной период времени, может служить мерой для определения концентрации антигенов. При этом в качестве стандартов необходимо использовать образцы с известной концентрацией антигена. При количественном иммуноэлектрофорезе для проведения простой иммунодиффузии разделенных компонентов в геле вырезают широкую канавку, непосредственно примыкающую к лунке с антигеном (рис. 85), и заполняют [c.240]

Рис. 85. А. Простая линейная иммунодиффузия в одном направлении. 1 — гель, содержащий антитела А1—/14 — расстояние, пройденное передним краем> прс ципитата при повышающихся концентрациях антигена, Б. Простая двухмер ная иммунодиффузия. У — участок геля, содержащего антитела 2—участки геля, содержащие антиген в повышающихся концентрациях Л]-—Л4 — расстояние, между самой дальней точкой дуги преципитата и границей между двумя гелями при возрастающих концентрациях антигена. Б. Количественный иммуноэлектрофорез по Бакхаушу и др. [81] и по Ухтерлони [951]. После электрофореза участок геля (У) заменяют гелем, содержащим антитела. Во время иммунодиффузии несколько раз измеряют расстояние Л, исходя из которого рассчитывают концентрацию антигена. Показано, что расстояние К также может быть использовано для определения концентрации антигена [80]. 2 —прямо угольная канавка для антигена (стартовая зона электрофореза).

Описанный метод используют главным образом для одновременного количественного определения всех компонентов какой-либо гетерогенной смеси. Для этой цели нужна антисыворотка, содержащая антитела ко всем анализируемым компонентам, причем титр этих антител должен быть достаточно высоким, чтобы образовались преципитаты, поддающиеся измерению. Подобную сбалансированную антисыворотку трудно получить путем иммунизации. Ганрот [424] предлагает готовить антисыворотки высокого титра для нескольких антигенов, а затем смешивать их в таком соотношении, при котором обеспечивается адекватное содержание антител для каждого антигена. Очевидно, более выгодно использовать при перекрестном иммуноэлектрофорезе смесь антигенов в двух разных концентрациях [1017]. Само количественное определение заключается в измерении площадей под пиками преципитации. Его можно провести с помощью полуавтоматического электронного планиметра [873, 1386]. Другой способ состоит в том, что пластинку проецируют на лист белой бумаги, пики обводят карандашом, вырезают и взвешивают. Если методика электрофореза отличается высокой [c.256]

Принцип совмещения электрофоретической миграции антигена в агаре с его преципитацией под действием антител был развит в 1966 г. Лореллом [И], который разработал метод ракетного иммуноэлектрофореза для быстрой оценки количества индивидуальных антигенов в смеси с помощью моноспецифических антител, введенных в гель, а также двумерный (перекрестный) иммуноэлектрофорез, позволяющий оценить как качественный, так и количественный состав сложной смеси антигенов с помощью полиспецифических антисывороток. [c.12]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология