Антитела специфические, титр

Иммунная электронная микроскопия. ИЭМ позволяет обнаружить специфически связанные с антителами вирусные частицы. Преимуществом этого метода является одновременная концентрация вируса и его идентификация с помощью специфической сыворотки. Предложенные модификации ИЭМ предусматривают обработку вирусосодержащего материала антисывороткой в высоком титре, добавление к осадку фосфорно-вольфрамовой кислоты или уранилацетата с последующим нанесением на пленку (подложку) и высушиванием. При электронной микроскопии видны скопления вирусных частиц. [c.276]

Для реакции преципитации необходимо иметь специфические антисыАоротки достаточно высокого титра. В лабораторных условиях кролик — наиболее удобный продуцент таких антисывороток. Существует два типа схем иммунизации животных-продуцентов 1) иммунизация без введения адъювантов (вещества, стимулирующие образование антител) и 2) иммунизация с адъювантами. [c.116]

Рис. 5. Динамика титров специфических антител (0-агглютининов) у иммунизированных крыс 2-й подопытной группы (средние данные)

Специфичность и титр выделенных специфических антител проверяют реакцией иммунопреципитации. [c.268]

Серологическое исследование позволяет поставить диагноз в случае обнаружения специфических антител в сыворотке больных. Для серологических реакций используют парные сыворотки, которые берут в первые дни от начала заболевания и спустя 1 — 3 недели, но изучают одновременно. Диагностическое значение имеет нарастание титра антител в 4 раза и более. РТГА, PH, РСК, РТГадс, РИФ, РИА, ИФА ставят с антигенами (диагностикумами), приготовленными из эталонных штаммов соответствующих вирусов. [c.282]

Интерпретация результата обнаружены специфические комплементсвязывающие антитела в титре 1 16 [c.275]

Так происходит в идеальном случае, когда неспецифическое связывание пренебрежимо мало. Чтобы проверить, так ли это, подвергают фильтрации ряд разведений антител (с титрами от 1 до 50) и сравнивают титры до и подле фильтрации. Если обнаружится, что часть антител задержана мембраной, то эксперимент повторяют с фильтрами, подвергнутыми до помещения в фильтрующую ячейку предварительной обработке мембраны выдерживают (не погружая ) на поверхности 0,2%-ного раствора желатины в буфере в течение 10 мин при комнатной температуре и подсушивают между двумя листами впитывающей бумаги. Такая обработка обычно уменьшает неспецифическое связывание до приемлемого уровня, но она примерно вдвое увеличивает время фильтрации. Если эта обработка не вполне удовлетворительна, мембраны выдерживают на 0,1%-ном растворе глобулина, гомологичного исследуемому, но не содержащего специфических антител. Последняя процедура дороже и еще больше снижает скорость фильтрации, но она практически полностью исключает неспецифическое связывание. После предварительной обработки мембран желатиной или глобулином их можно хранить в сухом виде (между двумя листами фильтровальной бумаги) и использовать по мере надобности. [c.35]

Поставить развернутую реакцию агглютинации в пробирках для определения титра специфических антител в сыворотке, полученной от кролика на предыдущем занятии. [c.109]

Серологическое исследование. Серодиагностику проводят при отрицательных результатах других исследований. Для этого начиная со 2 —3-й недели заболевания можно исследовать сыворотку крови в РСК или РА. В связи с массовым проведением прививок, приводящих к появлению в крови здоровых людей специфических антител, необходимо исследовать парные сыворотки. Нарастание титра антител в динамике заболевания подтверждает диагноз. Антигеном в серологических реакциях служит взвесь живых культур бордетелл. В качестве дополнительного контроля рекомендуется при проведении реакций использовать коклюшную и паракоклюшную иммунные сыворотки. Диагностическим титром у непривитых и ранее не болевших считается разведение сыворотки 1 80. [c.135]

Если раствор антигена (например, раствор белка) в адекватных пропорциях смешать с сывороткой, содержащей специфические антитела иммунной сывороткой), то в результате реакции образуется преципитат, образованный молекулами антигена и антител. Наибольшее разведение иммунной сыворотки, при котором еще происходит реакция преципитации с антигеном, присутствующим в постоянной концентрации, называют титром данной сыворотки. Титр отражает ее активность например, сыворотка с титром 1 25 ООО считается в пять раз активнее сыворотки, имеющей титр 1 5000. [c.16]

Рабочие титры антител определяют в реакции ИФА методом шахматного титрования с использованием сэндвич -метода ИФА. Суть метода заключается в использовании подложки , т. е. слоя неспецифически сорбированных иммуноглобулинов, с которыми затем взаимодействует специфический антиген. Этот антиген в дальнейшем выявляется с помощью конъюгатов антител с ферментной меткой. Схема сэндвич -метода представлена на рис. 38. 96-луночный микропланшет заполняют раствором антител в концентрации 10 мкг/мл по 100 мкл в лунку и оставляют на ночь при 4 С. На следующий день после 3-кратного отмывания фосфатным буфером с твином-20 (с. 321) титруют положительный антиген по короткому ряду микропланшета, так же титруют отрицательный антиген . После инкубации в течение 1 ч при 37° С и последующего 3-кратного отмывания в таких же условиях титруют конъюгат антител в буфере по длинному ряду микропланшета. [c.319]

Серологическое исследование. Для серологической диагностики ставят РНГА с сальмонеллезными поливалентными и групповыми (групп А, В, С, Д Е) диагностикумами. Для выявления нарастания титра специфических антител реакции ставят с сыворотками, взятыми с интервалом 7— 10 дней. Диагностическое значение имеет повышение титра антител в четыре и более раз. [c.153]

Из материала, содержащего вирус, готовят серийные разведения и добавляют к ним специфическую сыворотку в разведении в соответствии с титром, указанным на этикетке ампулы. Смеси вирус-сыворотка инкубируют 30 — 60 мин при 37 °С для обеспечения связывания антигенов с антителами. После этого смесью заражают культуру ткани, куриные эмбрионы или лабораторных животных. Контролем служит чувствительная система, зараженная вирусом без сыворотки. [c.270]

Построение кривой титрования. Результаты эксперимента представляют в виде, графика, по ординате которого отложен регистрируемый в ИФА сигнал, а по абсциссе — разведение (или титр) исследуемой сыворотки (рис. 50). За титр исследуемой сыворотки принимается максимальное разведение, при котором данным методом анализа достоверно определяется наличие антител, т. е. в отличие от концентрации титр антител для данного образца не является постоянной величиной-, а зависит от чувствительности и точности метода анализа. (Например, титр сыворотки в ИФА больше, чем в реакции преципитации.) Так как регистрируемый в ИФА сигнал обусловлен как специфическими, так и неспецифическими взаимодействиями, обычно параллельно с исследуемой сывороткой титруют контрольную сыворотку той же видовой принадлежности, но заведомо не содержащую антител. Тогда за титр исследуемой сыворотки следует принимать максимальное разведение, при котором регистрируемый сигнал статистически достоверно отличается от сигнала в случае контрольной сыворотки. [c.262]

Определяют титр антител. Концентрированную IgG-фракцию можно добавить к сыворотке для увеличения отношения антитела общий белок. Альтернативный путь — приготовить цельную сыворотку как фракцию IgG необходимой концентрации. Преимущество такого подхода заключается в еще большем увеличении отношения антитела белок при уменьшении количества добавляемого белка в системе и уменьшении фона. Это также позволяет стандартизовать концентрацию антител в последовательно приготавливаемых сериях антител одной и той же специфичности. Целесообразно иметь в запасе некоторое количество антител в концентрации выше требуемой для улучшения сывороток. Антисыворотка, предназначенная для реакции преципитации, должна содержать не менее 1—2 мг специфических антител в 1 мл, а еще лучше— 5—10 мг/мл для уменьшения количества добавляемого белка. Необходимо проверить чистоту IgG-фракции полученных антител, и если она удовлетворительна, то определить общий белок по оптической плотности и установить отношение антитела общий IgG. [c.112]

Бактериостатическое влияние может быть также достигнуто другими белками, направленными непосредственно в молочную железу и вызывающими уменьшение заболевания маститами. Например, лизоцим (Maga Е.А. et al., 1995) оказывает не только антибактериальное влияние, но также способствует увеличению выхода сыра, вследствие его связи с казеинами. Возможно, он также вызывает специфический пассивный иммунитет у новорожденных с секрецией специфических антител. Высокие титры нейтрализующих антител были получены в молоке траисгенных мышей против специфических вирусных агентов, вызывая экспрессию специфических иммуноглобулинов в молочную железу ( astilla J. et al., 1998). [c.238]

В настоящее время используют моно- и поливалентные сыворотки, активные соответственно против яда одного или нескольких видов змей. Наиболее эффективными и специфическими являются моновалентные сыворотки, поскольку в поливалентных титр антител сравнительно низок (Russell et al., 1970). [c.200]

Принцип метода. При внесении в специфическую иммунную сыворотку растворимого белкового антигена происходит реакция преципитации. Количество преципитирующих антител в неразведен-ной или в разведенной в 10 раз антисыворотке можно охарактеризовать тем наибольшим разведением антигена, которое еще способно вызвать реакцию преципитации с данной сывороткой это раз-ведение называется титром преципитинов. [c.121]

Кровянокапельная РА. Кровь из пальца в виде толстой капли наносят на предметное стекло и добавляют в нее равный объем дистиллированной воды, чтобы вызвать гемолиз. Рядом с кровью помешают каплю туляремийного диагностикума, обе капли смешивают стеклянной палочкой. У больных туляремией в серопозитивном периоде (при титре антител 1 100 и выше) агглютинация происходит немедленно. Иногда сыворотки крови больных туляремией перекрестно реагируют с бруцеллезным диагностикумом (ввиду наличия общих антигенов у бруцелл и туляремийных бактерий). У лиц, перенесших туляремию, в течение длительного времени в крови обнаруживаются специфические агглютинины. Эти особенности надо учитывать при интерпретации результатов серодиагностики. [c.124]

ПЦР. Метод ПЦР в диагностике гепатита А не получил широкого распространения, так как к моменту обращения за медицинской помощью у пациентов уже удается обнаружить специфические /gMметодом ИФА. Выявление HAV методом ПЦР может быть использовано для ранней диагностики гепатита у пациентов с иммунодефицитами, когда титр антител не определяется в ИФА (в качестве мишени при этом используют РНК HAV). [c.303]

Серологическое исследование. Для сероэпидемиологических исследований в очагах применяют реакцию латекс-агглютинации или иммунодиффузии. Для диагностики и оценки состояния больных ставят РП, РСК, РИФ, ИФА, позволяющие выявлять титры специфических IgM и IgG. Для подтверждения кокцидиоидного менингита важным является обнаружение антител в ликворе больных, так как другие методы исследования при этой форме заболевания часто оказываются безрезультатными. [c.333]

Результаты аллергической пробы следует учитывать только в сочетании с данными серологического исследования. Так, положительная проба с токсоплазмином при отрицательных результатах серологических реакций указывает на давно перенесенную инвазию, а положительная РИФ в низких титрах в сочетании с отрицательной РСК свидетельствует о затухании процесса. Для свежей инфицированности характерно наличие антител в РИФ при отрицательных РСК и аллергической пробе. Диагноз врожденного токсоплазмоза ставят при наличии типичных клинических проявлений и нарастания титра специфических антител у ребенка в сочетании с положительными результатами серологических реакций у матери. [c.359]

Изготовление антитоксических лечебных сывороток — противодифтерийной, противостолбнячной, протнводизентерийной и др. — основано на появлении в сыворотке крови животных (лошадей) специфических антител, в данном случае антитоксинов, после повторного введения животным возрастающих доз соответствующих токсинов (т. е. продуктов жизнедеятельности патогенных микробов). Сыворотка таких лошадей, подвергнутых активной иммунизации, приобретает способность нейтрализовать соответствующий токсин и при введении ее в организм больного облегчает борьбу последнего с возбудителем болезни. Лечебное действие сыворотки обычно тем значительнее, чем выше ее титр, т. е. чем выще содержание антитоксина в единице объема. Однако повышение титра сыворотки не может продолжаться безгранично. После ряда иммунизаций достигается относительная граница, перейти которую обычным путем уже не удается. [c.52]

Влияние усиливающих реактогенность гаптена радикалов выявляется и при тестировании животных, сенсибилизированных различными производными гаптена. Такие исследования были проведены нами с различными фурансодержащими соединениями при сенсибилизации ими морских свинок в дозе 40 мкг по методу Алексеевой— Петкевич. Перекрестные реакции на фуран выявляли на 14-е сутки в реакции специфической агломерации лейкоцитов (РСАЛ) и на 21-е сутки —по титру ан-тифурановых антител в РИГА (табл. 6). Так как для всех изученных веществ групповой детерминантой было фурановое кольцо, исходный гаптен фуран позволил выявить их аллергенное действие. Однако интенсивность и частота перекрестных реакций зависели от уровня сенсибилизации, обусловленной реактогенной способностью соединения. Так, фурфуриловый спирт, не имеющий заместителей, усиливающих реактогенность молекулы, вы- [c.39]

Определение .v-реактивного белка (со специфической иммунной сывороткой в модификации П. М. Пашинина [5]) на фоне 43 дней отравления показало наличие его у подопытных кроликов. Изучение динамики содержания .v-реактивного белка на фоне острофазовой реакции , вызванной тетравакциной, показало, что его уровень выше, чем у контрольных животных. Определение титра антител после первой (на фоне 43 дней отравления) и второй (на 112 день) вакцинации показало замедленную выработку О- и Н-агглютининов у подопытных кроликов, причем различия были более выраженными после повторной вакцинации. Очевидно, вследствие нарастающего действия продуктов термоокислительной деструкции пентапласта изменения реактивности организма кроликов усиливались. [c.157]

Размер гетерологичного белкового фрагмента — важный параметр при клонировании гибридных белков, содержащих -галактозидазу. Стабильность (а следовательно, и выход) гибридных белков, как правило, снижается при увеличении размера чужеродного фрагмента. Во многих случаях желательно, чтобы в состав гибридных белков входили короткие фрагменты. Для получения специфических антител вполне достаточными оказываются фрагменты гетерологичной ДНК, кодирующей антиген длиной всего 200 п.н. [16]. Вместе с тем использование коротких фрагментов может привести к тому, что при небольшой относительной массе чужеродного полипептида (по сравнению с массой -галактозидазы) титр специфичных к чужеродному белку антител у иммунизированных животных окажется низким. Аффинная очистка антител в этом случае также менее эффективна вследствие низкой емкости аффинных колонок, в которых связанные с носителем гибридные белки несут короткие гетерологичные фрагменты. Один из путей решения этой проблемы состоит в увеличении молярного соотношения гетерологичный фрагмент -галактозидаза в гибридном белке. Это достигается пришиванием к гену la Z множественных тандемных копий гетерологичного фрагмента ДНК. На рис. 5.5 приведены сравнительные результаты клонирования и экспрессии одной из пяти копий кодирующего фрагмента гена ftz Drosophila в pUR291. Выход гибридного белка, кодируемого одной копией этого гена, примерно в десять раз превышает выход белка, кодируемого пятью тандемными копиями. [c.147]

При различных инфекционных заболеваниях накопление специфических антител в сьшоротке вдет с неодинаковой скоростью и достигает разных величин. В связи с этим принято говорить о диагностическом титре антител—той величине титра, при которой можно с уверенностью поставить серологический диагноз заболевания в определенный его период. При многих инфекциях наиболее надежным диагностическим признаком считается не наличие антител, а нарастание их титра в динамике заболевания, которое выявляется путем постановки серологических реакций с парными сьшоротками, т. е. полученными дважды от одного и того же больного. [c.108]

Отметить результаты РПГА а) определить титр специфических антител в сьшоротке крови по результатам РПГА и 6) присутствие специфического антигена в исследуемом материале от больного по результатам РПГА. Объяснить необходимость контролей в РПГА. [c.109]

Гамма-глобулиновая фракция сьшоротки крови, содержащг стафилококковый антитоксин. Готовят из крови людей, соде] жащих высокие титры антител, или доноров, иммунизированнь стафилококковым адсорбированным анатоксином. Применяете для специфического лечения стафилококковых заболеваний. [c.140]

Иммуноглобулин против клещевого энцефалита. Содержит i высоком титре специфические противовирусные антитела которые извлекают из сыворотки крови лошадей, гипериммуни зированных вирусом клещевого энцефалита. Данный иммуно глобулин применяют для лечения и профилактики клещевоп энцефалита. [c.245]

Иногда для получения гибридов приходится прибегать к очень массированным схемам иммунизации. В качестве примера можно привести схему, предложенную Стели и сотр. (1980). Авторам не удавалось получить гибридомы против хорионного гонадотропина человека, применяя обычную схему иммунизации, несмотря на то что титр антител в сыворотках животных был высоким. Тогда авторы предположили, что для гибридизации важно, чтобы клетки находились в стадии активной бласттрансформации под действием антигена. Ими была выявлена высокая степень корреляции между числом больших бластных клеток в популяции клеток селезенки и образованием специфических антителообразующих гибридов. Максимальный выход гибридов получался при схеме иммунизации, представленной в табл.. 9. [c.101]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология