Гель-электрофорез в крахмальном горизонтальный

Электрофорез в крахмальном геле. Гель готовят из гидролизованного крахмала. Горячий гель заливают в кювету глубиной 5—6 мм, которую закрывают специальной крышкой, устроенной так, что в застывшем геле остается поперечный ряд узких щелей (0,3—0,7 мм). В щели вносят кусочки фильтровальной бумаги, смоченной раствором исследуемого вещества, и проводят одномерный или двумерный электрофорез в горизонтальных или вертикальных установках. Преимущество горизонтального варианта — простота исполнения, вертикального — большая разрешающая сила. [c.147]

Полученный гель выливают в горизонтальную ванну, прикрытую стеклянной пластинкой. Эта ванна входит в комплект прибора для электрофореза. Гель должен полностью закрывать обеспечивающие электрический контакт фитили. Подготовку ванны с крахмальным гелем необходимо закончить в течение 3—5 мин. Примерно через час после этого в гель можно вносить исследуемый образец, как это описано в п. 4 разд. 1. [c.81]

ГОРИЗОНТАЛЬНЫЙ ЭЛЕКТРОФОРЕЗ В КРАХМАЛЬНОМ ГЕЛЕ [c.80]

Крахмал суспендируют в 270 мл буферного раствора, предназначенного для геля, в котором растворено 40,0 г мочевины. Все остальные процедуры проводят так же, как и при обычном горизонтальном электрофорезе в крахмальном геле (стр. 80). [c.83]

Приборы для вертикального электрофореза. Вертикальный электрофорез более трудоемок, чем горизонтальный, но обладает значительными преимуществами [449, 1200]. При горизонтальном электрофорезе в крахмальном геле электродекантация раствора белка, внесенного в канавку, может привести к искажению формы полос, что исключено в случае вертикального электрофореза. Кроме того, при использовании вертикального прибора теплоотдача идет с одинаковой скоростью с обеих поверхностей геля, а это позволяет применять более высокие градиенты напряжения, в результате чего разделение улучшается. Охлаждение геля при помощи рубашек дает возможность еще больше повысить градиент напряжения. [c.71]

Насыщенный буфером носитель, на который нанесен образец, обычно располагают горизонтально горизонтальный электрофорез) на плоской поверхности изолирующего материала, например плексигласа (рис. 4.1), При горизонтальном Электрофорезе разделение можно проводить на бумаге, ацетате целлюлозы, в гелевых пластинах и в тонком слое, хотя работа с тонкими слоями при более высоких напряжениях требует применения металлических охлаждающих пластин, как при высоковольтном электрофорезе (разд. 4.4.1), Иногда гели и тонкие слои прикрывают пластиной из изолирующего материала, чтобы предотвратить испарение. Для работы с низким напряжением имеется простое оборудование для вертикального электрофореза (рис, 4.2) можно использовать пластины крахмального геля, помещая их вертикально в специальные камеры. [c.120]

В 1966 г. появились первые сообщения об использовании при электрофорезе крахмального геля в первом направлении и агарозного — во втором [725, 744]. Фагерхол и Лорелл [356] описали сочетание диск-электрофореза в крахмальном геле с электрофорезом в агарозном геле, содержащем антитела к антитрипсину, причем они обнаружили 12 хорошо разделившихся фенотипических вариантов (см. рис. 106). Крахмальный гель разрезали в горизонтальном направлении и из нижнего слоя (толщиной 2 мм) вырезали полоски шириной 2 мм, которые помещали в канавки, сделанные в геле, содержащем антитела. Пространство между краями крахмального и агарозного гелей заполняли жидкой агарозой, нагретой до 45 С. [c.260]

Первоначально для гель-электрофореза применяли крахмаль-ный гель. На рис. 9.4 изображено типичное устройство для электрофореза в крахмальном геле. Гель представляет собой пасту из картофельного крахмала, зерна которого разрушены нагреванием в буфере. При горизонтальном положении геля, как показано на рисунке, образец наносится в пхель, прорезанную лезвием бритвы, в виде раствора или смеси с зернами крахмала. Щель заливают воском или жиром, после чего прикладывают напряжение. После окончания электрофореза полутвердый гель отделяют и часто разрезают на два или три слоя, каждый из которых окрашивается различным способом. Разнообразные компоненты проявляются в геле в виде серии полос (рис. 9-5). В настояш ее время крахмальный гель используется редко, поскольку более удобным оказался полиакриламидный гель. [c.229]

Локализация белковых фракций. Закончив электрофорез, ъанну с крахмальным гелем извлекают из прибора и располагают горизонтально на столе. Пленку парафина, закрывающую гель, удаляют, и всю поверхность крахмала покрывают листом фильтровальной бумаги. Лист плотно прижимают к поверхности геля в течение 5 мин, затем снимают его, высушивают в сушильном шкафу при 100 С и окрашивают белковыми красителями (см. стр. 54). Этим способом удается установить локализацию фракций, не прибегая к окрашиванию самого крахмального геля (метод отпечатков), [c.80]

В нашей лаборатории горизонтальный электрофорез в крахмальном геле проводят по методу Смитиса [26] в камере для зонального полумикроэлектрофореза следующим образом. [c.80]

Электрофорез двух фракций легких цепей свиного иммуноглобулина был проведен с помощью горизонтального метода по Франеку. На рисунке старт указан неясной линией около катода. Слой крахмального геля толщиной 2 мм содержит 0,035 М глициновый буферный раствор с pH 8,8 в 3. 4 мочевине (по данным Коэна и Портера [133). В электродных камерах находится раствор с pH 8.2, 0,3 М по борной кислоте и 0,06 М по ЫаОН. [c.339]

Церулоплазмин (система Ср). Показано, что переносящий медь гликопротеид плазмы также существует в нескольких формах, обладающих различной электрофоретической подвижностью. Вариантные фенотипы довольно часто встречаются в популяциях негроидов и очень редко у европеоидов. Шреффлер и др. [1146] применяли для определения фенотипа церулоплаз-мина горизонтальный электрофорез в крахмальном геле с бо-ратным буфером (pH 9,5). Образцы сыворотки в разведении 1 3 (по объему) подвергали электрофорезу при 4 °С и напряжении 7 В/см. Для окрашивания церулоплазмина может быть использована его оксидазная активность. Шреффлер и др. [1146] окрашивали церулоплазмин 0,1%-ным раствором о-дианизидина в 0,04 М ацетатном буфере (pH 5,5), содержащим 20% этанола. Фрагменты геля инкубируют в этом растворе [c.340]

Смитис [1199] предложил использовать для определения фенотипа гаптоглобинов горизонтальный электрофорез в крахмальном геле. Электрофоретические методы этого типа до спх пор широко применяются при повседневных анализах. Вертикальный электрофорез [1200] дает более высокое разрешение, так как он лишен недостатков, присущих горизонтальному электрофорезу (см. гл. I.I0). Однако для определения фенотипов гаптоглобина вполне пригоден и горизонтальный электрофорез. Смитис [1199] рекомендует использовать в качестве разделяющего буфера смесь 30 мМ борной кислоты и 12 мМ NaOH (конечный pH после смешивания с крахмалом равен [c.342]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология