Электрофорез вертикальный

Рис. 11. Схема прибора для вертикального электрофореза в пластинках полиакриламидного геля.

Разработана препаративная сортировка клеточных частиц, основанная на различии их электрофоретической подвижности. Этот метод, названный свободным распределительным электрофорезом, нашел применение в иммунологических исследованиях. Через вертикально устанавливаемую камеру, боковыми стенками которой служат электроды, с постоянной скоростью протекает среда, в которой могут быть суспендированы клетки. В эту же камеру вводится взвесь клеток. Их путь в камере зависит [c.101]

Паспорт-инструкция к использованию аппарата для вертикального гель-электрофореза. Таллинн, 1984 [c.101]

Рассмотрим основные технические приемы приготовления и использования гелей для электрофореза. Это рассмотрение целесообразно провести отдельно для трех вариантов аналитического электрофореза вертикального в трубках, вертикального в пластинах и горизонтального в пластинах. Приемы препаративного электрофореза будут рассмотрены отдельно. Методы подготовки препаратов, выбора буферов и различных добавок к ним, а также условий протекания самого процесса электрофореза будут детально исследованы далее, в главах 3 и 4, посвященных описанию различных вариантов электрофоретического фракционирования белков и нуклеиновых кислот. [c.21]

Проведение электрофореза. Разделение можно проводить как в трубочках (с. 95), так и на пластинах для вертикального электрофореза (с. 97). После обработки ДСН к образцам добавляют сахарозу (до концентрации 10%) и в качестве лидирующего красителя — бромфеноловый синий (до концентрации 0,001%). Образцы исследуемых белков и белков-маркеров наносят на поверхность геля в объеме от 20 до 100 мкл (каждого или смеси нескольких образцов) и осторожно наслаивают электродный буфер. Нагрузка на гель определяется методом окраски гелей, а также способностью того или иного белка связывать используемый краситель. Как правило, при электрофорезе в трубочках удается обнаружить от 20 до 100 мкг белка, при электрофорезе в пластинке — от 4 до 15 мкг. В электродный буфер катодного отделения добавляют ДСН до концентрации 0,1%. Электрофоретическое разделение проводят при комнатной температуре и силе тока 8 мА на трубочку. При этом сначала устанавливают силу тока - [c.120]

Вертикальный электрофорез в пластине [c.97]

Приборы для вертикального электрофореза. Вертикальный электрофорез более трудоемок, чем горизонтальный, но обладает значительными преимуществами [449, 1200]. При горизонтальном электрофорезе в крахмальном геле электродекантация раствора белка, внесенного в канавку, может привести к искажению формы полос, что исключено в случае вертикального электрофореза. Кроме того, при использовании вертикального прибора теплоотдача идет с одинаковой скоростью с обеих поверхностей геля, а это позволяет применять более высокие градиенты напряжения, в результате чего разделение улучшается. Охлаждение геля при помощи рубашек дает возможность еще больше повысить градиент напряжения. [c.71]

В некоторых случаях в раствор препарата добавляют сахарозу и вносят зтот раствор под слой свободного элюента, как при электрофорезе в вертикальных трубках. Как правило, в этом нет необходимости. [c.77]

Рнс. 482. Схема вертикального электрофореза при средних значениях напряжения [49]. [c.538]

Аппараты для высоковольтного электрофореза обеспечивают градиент напряжения от 50 до 100 В/см. В них специальное охлаждение становится обязательным. В горизонтальных камерах оно осуществляется с помощью металлической охлаждающей плиты, а в вертикальных — с помощью эффективного контакта с органическими растворителями. [c.95]

Эти два принципа сочетания электрофореза с хроматографией схематически изображены на рис. 487 и 488 (в качестве носителя служит фильтровальная бумага, подвешенная вертикально в хроматографических кюветах) (см. также рис. 426, стр. 458). [c.541]

Вариант этого метода на бумаге известен под названием вертикального электрофореза. [c.146]

Электрофорез в крахмальном геле. Гель готовят из гидролизованного крахмала. Горячий гель заливают в кювету глубиной 5—6 мм, которую закрывают специальной крышкой, устроенной так, что в застывшем геле остается поперечный ряд узких щелей (0,3—0,7 мм). В щели вносят кусочки фильтровальной бумаги, смоченной раствором исследуемого вещества, и проводят одномерный или двумерный электрофорез в горизонтальных или вертикальных установках. Преимущество горизонтального варианта — простота исполнения, вертикального — большая разрешающая сила. [c.147]

Электрофорез выполняют в установках вертикального или горизонтального типа. В ходе электрофореза необходимо следить за тем, чтобы кювета не перегревалась во избежание возникновения конвекционных токов. [c.148]

После предварительного фракционирования дальнейшую очистку смеси пептидов удобно производить с помощью электрофореза на бумаге. Существует четыре разновидности этого метода 1) вертикальный электрофорез на бумаге без охлаждения [51 ] 2) вертикальный электрофорез на бумаге с охлаждением толуолом [50] [c.37]

ВЕРТИКАЛЬНЫЙ ЭЛЕКТРОФОРЕЗ В КРАХМАЛЬНОМ [c.78]

Полученная смесь меченых фрагментов ДНК подвергается электрофорезу в денатурирующем вертикальном полиакриламидном геле. При этом первыми будут двигаться фрагменты, имеющие наименьшую молекулярную массу — в нашем примере цепочки ДНК длиной в 1 нуклеотид. Все они будут нести метку, соответствующую этому нуклеотиду — первому в последовательности. Следующими мимо оптического датчика пройдут цепочки ДНК длиной в 2 нуклеотида — метка на их конце будет соответствовать второму нуклеотиду в последовательности исследуемой ДНК. И так далее, пока последними не пройдут наиболее длинные фрагменты. Следовательно, когда электрофорез закончится, будет получена четкая последовательность нуклеотидов в исследуемом фрагменте. [c.96]

Сущность действия переменного электрического поля на эмульсию заключается во взаимном притяжении поляризуемых под влиянием поля капелек воды и их слияния в более крупные капли, быстро оседающие под действием силы тяжести. Основное же действие постоянного электрического поля заключается в движении капель воды вдоль силовых линий поля, что обусловлено избыточными электрическими зарядами капель (электрофорез), а также неоднородностью электрического поля, образуемого вертикальными цилиндрическими электродами. Это приводит к стремительному передвижению капель к электродам, на поверхности которых они скапливаются и под действием силы тяжести стекают вниз. В этом способе, применяемом, как правило, для малообводненных эмульсий, в которых капельки воды расположены сравнительно далеко одна от другой, силы взаимного притяжения капель играют второстепенную роль. [c.36]

Подготовка к электрофорезу. Все растворы перед работой вынимают из холодильника и оставляют на столе для нагревания их до комнатной температуры. Сухие, хорошо вымытые стеклянные трубочки устанавливают в штатив строго вертикально. На нижний конец каждой трубочки надевают резиновую втулку. [c.33]

Устройство прибора для электрофореза ПЭФ-1. Схема (вид сверху) прибора для электрофореза ПЭФ-1 изображена на рис. У.9. Камера 1 прибора, изготовленная из пластмассы, снабжена крышкой (на рисунке не показана)". В камере расположены две свободно вынимающиеся электродные кюветы 2. Каждая из кювет разделена продольной перегородкой 4 пополам на два отделения. Наличие двух отделений в электродных кюветах предотвращает попадание на бумагу продуктов электролиза. В наружные отделения кювет опущены концы вертикально расположенных электродов 3, во внутренние — концы бумажных полосок 3. Бумажные полоски поддерживаются тремя планками 6. [c.150]

Предложен способ отделения частиц парафина (Пф) и капель воды от смазочных масел с помощью электрофореза. Очистка масла проводится в вертикальном аппарате, в верхнюю часть которого вводится суспензия Пф в масле и пропускается через электрод, связанный с источником высокого напряжения (2-ой электрод с более низким напряжением по отнощению к земле — нижняя стенка впускной камеры с отверстием для прохода суспензии). Поток суспензии, имеющий свободный избыточный заряд, попадает в верхнюю коническую часть аппарата и в потоке циркулирующего газа —носителя (N2) вводится в цилиндрическую часть аппарата, заполненную слоем шариков из стекла, керамики и др. материала с низкой электропроводностью. В нижней части аппарата суспензия пропускается через заземленную металлическую решетку или irro. Коагуляция заряженных частиц Пф происходит на шариках, слой которых периодически заменяется. Приводятся другие варианты устройства аппарата. [c.189]

Различные экспериментальные серийные установки для электрофореза на бумаге можно разделить на 3 группы з вертикальные, горизонтальные и с бумагой, зажатой между горизонтально расположенными стеклянными пластинками. Для точного измерения подвижности растворенных веществ особенно пригоден последний способ, при работе по которому отсутствует испарение. Испарение имеет место в установках с открытыми листами бумаги, поскольку при прохождении электрического тока выделяется тепло. Концы бумаги погружаются в раствор электролита, поток которого компенсирует испарение. [c.563]

Электрофорез с целью разделения и выделения белковых препаратов (в вертикальной колонке) [c.287]

Разработаны методы непрерывного электрофореза на бумаге. Схема установки для непрерывного электрофореза приведена на рис. 14.6в. В этой установке используется висящий вертикально большой лист фильтровальной бумаги, верхний край которого погружен в желоб с буферным раствором. Раствор разделяемой смеси непрерывно подается в одной точке недалеко от верхнего края бумаги. Буферный раствор, [c.467]

Электрофорез проводят в пластинах полиакриламидного геля в присутствии додецилсульфата натрия на приборе для электрофореза с вертикальным расположением пластин производства объединения Хийу Калур (ЭССР). Основные и рабочие растворы готовят по методике Лэммли (с. 121). [c.397]

Аппарат электрофореза в вертикальной колонке типа АЭВ [c.41]

При заказе необходимо указать наименование, тип, ТУ, количество приборов. Пример оформления заказа. Аппарат электрофореза в вертикальной колонке АЭВ, ТУ 25-П-340—69, 1 комплект. [c.42]

Измерения электрофореза. Микроскопический метод. При этом методе изучаемый коллоидный раствор или суспензия помещается в специальную микроячейку для электрофореза, закрепленную на предметном стекле микроскопа [18]. Обычно применяется мелкая плоская ячейка с прямоугольным сечением, с двух сторон которой впаяно по электроду. Эти электроды соединяются с источником э. д. с., и скорость движения любой частицы определяется с помощью окулярной шкалы микроскопа. Градиент потенциала вычисляется из величины силы тока и сопротивления раствора между электродами, расстояние между которыми известно. Поскольку взвешенные частицы постепенно оседают, для изучения электрофореза была сконструирована вертикальная микроячейка. Влияние силы тяжести исключается путем наблюдения движения частицы при наложении поля сначала в одном направлении, а затем в обратном. Для изучения электрофореза применяются также ячейки цилиндрической формы, поскольку их легче изготовлять и мыть, чем ячейки с прямоугольным поперечным сечением. Однако кривизна стенок таких ячеек несколько затрудняет точное наблюдение за движущимися частицами. [c.712]

Реймонд [322] разработал прибор, пригодный как для горизонтального, так и для вертикального электрофореза. Вертикальный электрофорез целесообразен лишь в том случае, если используемый гель непроницаем для жидкости, в противном случае трудно избежать перетекания электролита из верхней электродной ячейки в нижнюю. В упомянутом приборе слой геля толшиной 3 мм заключен между двумя параллельными пластинками, охлаждаемыми водой. По окончании разделения пластинки можно удалить, чтобы извлечь гель. При двухстороннем охлаждении прибор работает без заметного повышения температуры слоя при напряжении свыше 500 В и токе 200 мА. Этот прибор выпускает фирма Е-С Apparatus orp. [c.168]

Коагуляция дисперсной фазы идет тем интенсивнее, чем выше градиент внешнего поля, максимальное значение которого будет под вертикальным электродом, где вся разность потенциалов приходится на расстояние между электродами. Электрофорез начинается в водно-топливных эмульсиях при = 900-Ы000 В/см. При незначительном расстоянии [c.45]

Рассмотрим явление электрофореза, т. е. движение частиц, взвешенных в жидкости, под действием электрического поля. Электрофорез был вторым явлением, открытым Рейссом в 1808 г., и исследование его шло вслед за накоплением данных но электроосмосу. Электрофорез изучался Квинке и другими ранними авторами. Для золей электрофорез был впервые применен Линдером и Пиктоном в 1892 г. в цилиндрической вертикальной трубке. [c.125]

Приготовление геля. Для полимеризации 30 мл разделяющего геля (12,5%) смешивают 12,5 мл раствора акриламида, 7,5 мл буфера разделяющего геля и 10 мл воды. После деаэрирования (5—10 мин на водоструйном насосе) к смеси добавляют 16 мг персульфата аммония и 18 мкл ТЕМЕД. Полученный раствор заливают либо в гелевую ячейку для вертикального электрофореза в пластине (с. 97), либо в трубки (с. 95). На поверхность раствора наслаивают воду. После полимеризации удаляют воду шприцом или фитилем из фильтровальной бумаги. Готовят смесь для концентрирующего геля. Смешивают 4 мл раствора № 1 с 5 мл буфера концентрирующего геля и добавляют [c.122]

Для проведения электрофореза на порошкообразных носителях было сконструировано большое число различных приборов. Одним из наиболее эффективных является аппарат Пората [52], в котором разделение веществ осуществляется на вертикальной термостатированной колонке, наполненной целлюлозой. После окончания процесса разделения вещества элюируют буфером и собирают при помощи автоматического коллектора фракций. [c.537]

Приборы. Используют прибор для электрофореза, предназначенный для анализа белков jtpoBH (Институт им. А. А. Богомольца АН УССР, г. Киев), или прибор для электрофореза со специальными камерами, сконструированными на химическом заводе им. П. А. Войкова, с источником питания УИП-1. Также могут быть использованы аппараты для горизонтального и вертикального электрофореза, предназначенные для фракционирования протеинов, исследований по органической химии, биологических и фармакологических исследований, типа ОЕ-201 (фирма Labor, Будапешт). [c.56]

Проблема гомогенности белков в свое время решалась относительно просто с помощью традиционных методов анализа. Препарат считали гомогенным, если он не делился на фракции при электрофорезе или при ультрацентрифугировании. В настоящее время эти критерии гомогенности утратили свое значение. В нашем распоряжении появились более чувствительные методы исследования и стали обязательными более строгие показатели гомогенности. Ионообменная хроматография и электрофорез в геле являются сейчас наиболее чувствительными методами выявления так называемой микрогетерогенности белковых препаратов, какова бы ни была ее природа. Термин микрогетерогенность предложили Синг [82] в 1943 г. и Колвин с сотр. [6] в 1954 г. Из методов электрофореза в геле наиболее чувствительным для анализа микрогетерогенности белков оказался вертикальный диск-электрофорез. При использовании этого метода требуются весьма малые количества необходимого для исследования материала, с его помощью можно одновременно анализировать большое число образцов и к тому же он отличается высокой разрешающей способностью. Диск-электрофорезом можно обнаружить микрогетерогенность препарата даже в том случае, [c.31]

Аппараты для высоковольтного электрофореза, относящиеся к другой группе, устроены таким образом, что фильтровальная бумага погружена в охлаждающую жидкость, не смешивающуюся с водой тепло, воспринятое этой жидкостью, поглощается затем в системе водяным охлаждением. В таких аппаратах бумага помещается вертикально между двумя ваннами, содержащими буферный раствор. В связи с вертикальной укладкой бумаги важно правильно выбрать полярность электродов. Из-за электроэндоосмоса происходит перемещение буферного раствора от анода к катоду. Если, например, отрицательный полюс источника тока соединить с верхней ванной, то специфическое образование хвостов при электрофорезе, вызванное электроэндоосмотическим потоком снизу вверх,, будет полностью компенсировано неспецифическим образованием хвостов , обусловленным движением буферного раствора сверху вниз под влиянием силы тяжести. [c.114]

Исследован состав продуктов метаболизма золоторастворяю- Цих бактерий. Методом хроматографии на бумаге в натуральных Средах активных организмов установлено значительное количество аминокислот. С помощью методов вертикального электрофореза на бумаге ионного обмена и химического осаждения продукты етаболизма разделены на составляющие фракции. [c.153]

I — накопление копий секвенируемого участка ДНК 2 — щелочной гидролиз ДНК 3— присоединение меченых дидезоксинуклеотидов 4-х типов 4 — анализ фрагментов ДНК при электрофорезе в вертикальном полиакриламидном геле [c.95]

При электрофоретическом разделении водного гумуса использовалась подвижность составляющих его высокомолекулярных соединений в электрическом поле вследствие наличия у них ионогенных групп. Представлялось целесообразным получить не электрофореграммы, а отдельные фракции, как при жидкостной хроматографии. Поэтому применяли методику непрерывного электрофоретического разделения на бумаге, при котором перпендикулярно нисходящим потокам исследуемого и буферного растворов в капиллярах вертикального листа бумаги накладывается электрическое поле постоянного тока высокого напряжения. Гуминовые вещества для электрофореза извлекали из днепровской высокоцветной воды экстракцией изобутиловым спиртом [46]. После испарения растворителя осадок растворяли в 0,1-н. едком натре и добавляли фосфатный буферный раствор pH 7,5, этот же раствор использовали и как фон при разделении. [c.61]

Условия электрофореза напряжение 850—700 в, сила тока 8—12 ма, время фракционирования 5—6 ч. После прекращения подачи разделяемой смеси и снятия напряжения протекание буферного раствора по бумаге не прекращалось, в течение суток производили вымывание фракций, сдвинутых под влиянием электрического поля. Как и при хроматографическом разделении, для характеристики фракций применяли спектрофотометрический метод анализа. Результаты псследовачий приведены на рис. 23, е. Они описываются семейством монотонно убывающих кривых приведенных оптических плотностей с удалением пробы от вертикальной линии ввода исследуемой смеси они приближаются к абсциссе в длинноволновой области спектра. Крутизна спада спектральных кривых поглощения света, определяемая величиной отношения 48о/ 56о, для отдельных фракций следующая проба V — 3,2 проба VII — 3,4 проба X — 6,0. Таким образом, отклонение движения потока жидкости от вертикального при электрофорезе увеличивается с переходом от гуминовых кислот к фульвокислотам в связи с большей подвижностью последних в электрическом поле постоянного тока. [c.61]

Подготавливают к работе прибор для электрофореза на бумаге. Может быть использован прибор для вертикального электрофореза ПВЭФ-1. Электрофоретическая камера ПВЭФ-1 представляет собой ванну с перегородкой в середине и стойкой для крепления бумажных полос. Камеру заполняют соответствующим раствором электролита. [c.176]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология