Электрофорез на бумаге как метод определения электрофоретической подвижности

Он выполняется следующим образом. На середину полоски плотной, гомогенной фильтровальной (хроматографической) бумаги, пропитанной буферным раствором с определенным значением pH, наносят каплю исследуемого коллоидного раствора. Затем на полоску бумаги накладывают разность потенциалов. Под влиянием образующегося электрического поля отдельные компоненты, содержащиеся в капле, обладающие разными электрофоретическими подвижностями, передвигаются по полоске с различными скоростями. Через некоторое время компоненты распределяются на бумаге в виде стольких зон, различно удаленных от исходной точки, сколько компонентов содержалось в растворе. Полоску высушивают и прогревают для денатурации и фиксации находящихся на ней белков и после этого окрашивают подходящими красителями. В результате проявляется распределение компонентов по длине полоски. Роль бумаги в этом методе сводится к устранению диффузионного и конвекционного перемешивания белков при электрофорезе. [c.210]

Высокоэффективным методом разделения является сочетание электрофореза на бумаге с обычной хроматографией. При этом сначала через влажную бумагу, на которую нанесена смесь, пропускают ток высокого напряжения, а затем смесь хроматографируют с помощью подходящего растворителя в направлении, перпендикулярном направлению электрофореза. В результате достигается разделение первоначальной смеси в двух измерениях. Применение такого метода к продуктам ферментативного расщепления белков позволяет получить двухмерную картину, которую называют пептидной картой. Каждый белок дает характерную для него при каждом конкретном способе расщепления картину. Локализацию отдельных компонентов во многих случаях определяют с помощью специфических красителей. При определении аминокислот и пептидов в качестве такого красителя используют, например, нингидрин. Если производится элюция адсорбированных компонентов, то удобнее всего устанавливать их присутствие в элюате спектрофотометрически. Вероятно, наиболее тонким методом разделения белков следует считать иммуноэлектрофорез, при котором эффект достигается за счет использования различий в двух свойствах электрофоретической подвижности и иммунологической специфичности. [c.220]

Электрофоретический анализ используют для исследования сыворотки крови, смесей белков, нуклеиновых кислот и т, д. Широкое применение получил для изучения биохимически важных объектов вариант электро ретического исследования — метод электрофореза на бумаге. Каплю исследуемого раствора наносят в определенную точку на полоску специальной фильтровальной бумаги, увлажненную буферным раствором (бумага играет роль своеобразного сосуда) концы полоски находятся в контакте с электродами. Подвергнутые электрофорезу составные части, обладающие различной электрофоретической подвижностью, переносятся на различные расстояния. После опыта бумагу высушивают и прокрашивают красителем, проявляя компоненты смеси. [c.207]

Метод электрофореза основан на способности различных белков перемещаться под Действием электрического поля с неодинаковой скоростью (а иногда и в противоположных направлениях) в растворе, на влажной фильтровальной бумаге или в другой твердой опорной среде. Напряжение при этом устанавливают от нескольких сотен до нескольких тысяч вольт, силу тока—в несколько десятков миллиампер. Скорость передвижения белковых молекул определенного вида к аноду или катоду является функщ1ей электрического заряда, молекулярной массы и формы молекул, ионной силы, pH и состава буферного раствора, а также приложенных потенциалов. Сочетание перечисленных факторов всегда специфично для каждого индивидуального белка, и естественно, что разные белки обладают различной электрофоретической подвижностью. [c.28]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология