Методы определения электрофоретической подвижности

Он выполняется следующим образом. На середину полоски плотной, гомогенной фильтровальной (хроматографической) бумаги, пропитанной буферным раствором с определенным значением pH, наносят каплю исследуемого коллоидного раствора. Затем на полоску бумаги накладывают разность потенциалов. Под влиянием образующегося электрического поля отдельные компоненты, содержащиеся в капле, обладающие разными электрофоретическими подвижностями, передвигаются по полоске с различными скоростями. Через некоторое время компоненты распределяются на бумаге в виде стольких зон, различно удаленных от исходной точки, сколько компонентов содержалось в растворе. Полоску высушивают и прогревают для денатурации и фиксации находящихся на ней белков и после этого окрашивают подходящими красителями. В результате проявляется распределение компонентов по длине полоски. Роль бумаги в этом методе сводится к устранению диффузионного и конвекционного перемешивания белков при электрофорезе. [c.210]

До сих пор не существует строгой экспериментальной проверки теории, что ставит под сомнение выводы о величине -потенциала (или заряда) коллоидных частиц, сделанные на основе их электрофоретической подвижности. Несмотря на это, из-за простоты метод идентификации по электрофоретической подвижности находит широкое применение, особенно для биологических объектов. Поэтому ниже мы подробнее остановимся на методах определения электрофоретической подвижности. [c.140]

Электрические свойства растворов полиэлектролитов. Электрокинетический потенциал, как известно, с большей или меньшей точностью может быть подсчитан по уравнениям Гельмгольца — Смолуховского или Генри только для коллоидных частиц, размер которых значительно превосходит толщину двойного электрического слоя. Для частиц же, диаметр которых мал по сравнению с толщиной двойного электрического слоя, при расчете электрокинетического потенциала следует вводить ряд поправок и в первую очередь поправку на электрическую релаксацию. Кроме того, если макромолекулы находятся в растворе в виде рыхлого клубка, то должно быть принято во внимание движение среды через петли свернутой цепи. К сожалению, до сих пор теория электрофореза для свернутых в клубок макромолекул отсутствует. Поэтому в настоящее время распространено определение электрофоретической подвижности не отдельных макромолекул, а макромолекул, адсорбированных на достаточно крупных частицах кварца или угля или на капельках масла. В этом случае электрокинетический потенциал легко определить с помощью микроэлектрофоретических методов. Как показали многочисленные исследования, при достаточной толщине слоя полимера, покрывающего частицу, подобный прием дает вполне воспроизводимые результаты. [c.477]

Экспериментальные методы определения электрофоретической подвижности [c.155]

В начале этой главы описаны явления электрофореза и электроосмоса в самом общем виде. Рассмотрим элементарную теорию электрокинетических явлений и применяемые на практике методы определения электрофоретической подвижности и скорости электроосмотического переноса более подробно, поскольку эти величины позволяют вычислить весьма важную характеристику коллоидных систем — -потенциал. [c.197]

Микроскопический и ультрамикроскопический методы. Эти методы определения электрофоретической подвижности заключаются в определении скорости передвижения индивидуальных коллоидных частиц в электрическом поле при помощи микроскопа или ультрамикроскопа. Преимущество этого метода перед методом подвижной границы состоит в том, что при исследовании с помощью микроскопа частицы находятся в одной и той же окружающей их среде и отсутствует поверхность раздела между коллоидной системой и боковой жидкостью. Другое преимущество этого метода заключается в том, что для определения достаточно очень малое количество раствора. Недостаток этого метода тот, что нельзя исследовать электрофоретическую подвижность частиц в растворах с более или менее значительной концентрацией дисперсной фазы, так как в таких растворах наблюдение за перемещением отдельной частицы невозможно. Разбавление же системы чужеродной жидкостью всегда влияет на -потенциал. [c.210]

МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЭЛЕКТРОФОРЕТИЧЕСКОЙ ПОДВИЖНОСТИ [c.119]

В заключение следует указать, что описанный метод определения электрофоретической подвижности можно применять и к растворам высокомолекулярных соединений, отдельные молекулы которых в ультрамикроскопе не видимы. Для этого в раствор вводят < малые частицы кварца или угля, которые- адсорбируют на себе высокомолекулярное вещество. Как показали многие эксперименты, электрофоретическая подвижность таких частиц такая же, как и подвижность свободных макромолекул. Это становится понятным, если учесть, что электрофоретическая скорость, согласно уравнению Гельмгольца — Смолуховского, не зависит от размера частиц. Однако всегда следует помнить, что -потенциал, вычисленный по результатам таких измерений, является в некоторой степени фиктивной величиной, так как в этом случае довольно трудно представить себе наличие двойного слоя с более или менее постоянным потенциалом. [c.212]

Аналогичное уравнение будем иметь и для скорости электрофореза, если принять во внимание, что при электроосмосе жидкость движется относительно неподвижной твердой фазы, а при электрофорезе, наоборот, происходит перемещение твердых частиц относительно жидкой фазы. Движение в обоих случаях определяется одними и теми же силами, действующими на двойной электрический слой. Методы определения скорости электрофореза заключаются или в наблюдении за движением границы раздела золь — жидкость в электрическом поле (макроскопический метод), или в случае более крупных коллоидных частиц— в определении электрофоретической подвижности непосредственно под микроскопом (микроскопический метод). [c.89]

Методы определения электрофоретической подвижности 121 [c.121]

Электрофорез уже давно использовался в биологии различными авторами для суждения о знаке и величине заряда, главным образом различных бактерий и белков. Определение электрофоретической скорости белков по методу подвижной границы с получением электрофоретических диаграмм, на чем мы остановимся далее подробно, является весьма важным методом не только для изучения сложных белковых систем, но и используется широко для практических медицинских целей. При различных инфекционных заболеваниях специфически изменяется белковый состав плазмы крови, и поэтому электрофоретические диаграммы могут быть успешно применены для диагностики болезней. [c.6]

Методы определения электрофоретической подвижности 125 [c.125]

Основы метода электрофореза с подвижной границей, предназначенного для определения электрофоретической подвижности белков, рассмотрены в работах [80, 81]. В настоящее время этот метод не применяется и представляет только исторический интерес. [c.115]

Метод является единственным способом прямого определения абсолютной электрофоретической подвижности. Его применяют для веществ с высокой молекулярной массой, которые обладают слабой диффузией. [c.145]

Из рис. 129 видно, что подвижность протеина в сравнительно кислом растворе положительна, т. е. в этом растворе частица имеет положительный заряд, чего и можно было ожидать ввиду амфотерного характера протеинов. При pH большем 4,9 частицы заряжены отрицательно и движутся в направлении, обратном направлению наложенного поля. При pH = 4,9 частицы протеина не обнаруживают электрофоретической подвижности, и, следовательно, значение pH, равное 4,9, соответствует изоэлектрической точке этого вещества (ср. стр. 553). Измерение электрофоретической подвижности при различных значениях pH является наиболее прямым методом определения изоэлектрической точки протеинов и родственных им веществ. [c.717]

Оценка чистоты. — Шведские химики Сведберг и Тизелиус внесли большой вклад в развитие химии белка разработкой аналитических методов, чрезвычайно удобных для характеристики этих, высокомолекулярных соединений. Метод ультрацентрифугирования Сведберга служит для определения молекулярного веса. При вращении с очень большой скоростью ячейки, содержащей раствор белка, молекулы белка под действием центробежных сил движутся от центра со-скоростью, зависящей от величины молекулярного веса. Специальная оптическая система дает возможность наблюдать и фотографировать ячейку во время центрифугирования. Молекулярный вес может быть, найден либо из определения седиментационного равновесия, либо по-скорости седиментации- Хотя теоретически первый метод точнее, для достижения равновесия требуется длительное время, и поэтому более точные значения получают, исходя из определения скорости седиментации. При применении ультрацентрифуги можно установить также гомогенность молекул (по величине и форме). Тизелиус предложил (1937) электрофоретический метод разделения молекул белка в электрическом поле молекула белка движется со скоростью, определяющейся величиной молекулы, ее формой, количеством и типом ионизированных групп. Материал, кажущийся гомогенным по растворимости, может содержать компоненты, отличающиеся по электрофоретической подвижности. Жестким критерием чистоты является профиль кривой распределения, получаемой при противоточном распределении молекул (Крейг, см. 31.29). [c.674]

Определение электрофоретических свойств индивидуальных белков. Фронтальный электрофорез — единственный метод, позволяющий определять подвижность и изоэлектрическую точку белка с очень высокой точностью. Подвижность и р1 белка являются его важной характеристикой, нужно только иметь в виду, что каждое измерение дает характеристики, справедливые лишь для определенных значений pH, ионной силы и состава буфера. [c.63]

Существуют различные методы определения электрофоретической подвижности коллоидных частиц. Микрометоды основаны на наблюдении в микроскоп за скоростью движения отдельных коллоидных частиц. В макрометодах определяют скорость перемещения подвижной границы раздела между окрашенным или мутным золем и так называемой боковой жидкостью , в которую погружаются электроды. Необходимо, чтобы электропроводности золя и боковой жидкости были близки, в этом случае градиент потенциала в золе и в боковой жидкости будет практически одинаков, что важно при вычислении электрофоретической подвижности. Кроме того, при равенстве электропроводностей золя и боковой жидкости граница раздела между ними более резкая. Применение ультрафильтрата или ультрацен-трифугата золя в качестве боковой жидкости с достаточным приближением удовлетворяет этим требованиям. [c.72]

Малые размеры частиц синтетических латексов, лежащие, как правило, за пределами разрешающей способности обычных микроскопов, в большинстве случаев не позволяют воспользоваться при определении электрофоретической подвижности микроэлектрофоретическим методом. Макроэлектрофорез латексов имеет свои особенности, обусловленные спецификой объекта исследования. [c.72]

Взгляды Блэка и Ланжелье не совпадают полностью, но оба автора первостепенное значение в снижении заряда минеральных частиц придают катионам алюминия. Позднее, когда были применены стандартные методы химических анализов и определения электрофоретической подвижности частиц, подтвердилась точка зрения Мэттсона [18—20], Каргина и др. [21] о сильном нейтрализующем действии продуктов гидролиза алюминия. Получены [c.154]

Электрофорез белков в жидкой среде имеет как преимущества, так и недостатки по сравнению с электрофорезом на нейтральных носителях. Этот метод незаменим для количественных определений электрофоретической подвижности и изоэлектричес- [c.164]

Этот метод в применении к коллоидным системам особенно точен благодаря большой массе дисперсной фазы, приходящейся на единицу заряда. Однако этот способ применяется на практике довольно редко. Таттье использовал метод Гитторфа не только для определения электрофоретической скорости, но и для одновременного определения подвижности противоионов. [c.207]

Высоту камеры определяют, как указывалось выше. Значение ширины камеры удобно находить, пользуясь микроскопом Брюнеля. Другой метод определения поперечного сечения, дающий лучшие результаты, состоит в измерении электрофоретической скорости частиц, имеющих определенную, постоянную подвижность и. [c.203]

Метод капиллярного электрофореза постоянно совершенствуется. Предложены методы разделения нейтральных молекул, ионов с одинаковой электрофоретической подвижностью. Для этого используют взаимодействия разделяемых компонентов с псевдонеподвижной мицеллярной фазой в буферном электролите (мицеллярная электрокинетическая хроматография). Для повышения чувствительности определения используют дфугие способы де-текпфования флуоресцентное, электрохимическое, масс-спекгрометрическое. [c.255]

Молекула БСА образована из одной полипептидной цепи с ас-симетрией, соответствующей элипсоиду, диаметром 40 и длиной 120 А. Молекулярная масса этого белка составляет 66 700 дальтон [305]. Изоэлектрическая точка его находится в интервале 4,3—4,8 и зависит от метода ее определения [306]. Всего альбумин имеет 180 титруемых зарядов на молекулу, которые определяют его большую электрофоретическую подвижность и степень растворимости [307]. [c.231]

СВ573И при этом звене . Положение олигосахаридной цепи, присоединенной к восстанавливающему звену, в сильной степени сказывается на электрофоретической подвижности олигосахаридов и соответствующих полиолов в подходящих буферных pa твopax что иногда может быть использовано для предварительных заключений о строении олигосахарида. Недавно показано, что дисахариды с 1 2-, 1 —3-, 1 ->4- и 1 —б-гликозид-ными связями при восстанавливающем звене резко различаются по скорости щелочной деструкции предложенный метод измерения скорости деструкции, требующий весьма малого количества вещества, удобен для быстрых определений . [c.433]

Бойер и Спенсер [43] на основании экспериментальных результатов предыдущих авторов указывают, что аномальные явления наблюдаются не только при изучении растворов вискозиметрическим методом, но и при определении скорости седиментации, осмотического давления и электрофоретической подвижности. Хорт и Ринфрет [59] наблюдали эффект критической концентрации в плотности и при измерении теплоты разбавления. [c.300]

Наиболее серьезные ошибки в эксперименте возникают из-за использования авторами различных нестандартных способов приготовления и очистки (диализации) золей, методов физического и физико-химического анализа. В частности, степень агрегативной устойчивости золя Ре(ОН)з, часто являющегося объектом исследования при изучении механизма коагуляции, зависит от способа его приготовления [30]. Результаты определения ДП дисперсных частиц связаны со способом измерения их электрофоретической подвижности. [c.112]

Иногда взаимодействие между формами высокого молекулярного веса можно изучить определением скорости седиментации при высокой скорости враще И1я. Шахман рассмотрел теорию и практику этого метода [60], Интерпретация скорости седиментации аналогична интерпретации электрофоретических подвижностей (сдк гл. 15, разд. 2). [c.386]

При реагентной обработке природных и сточных вод для определения оптимальной дозы коагулянта Дот используют метод пробного коагулирования либо методы, основанные на измерении электрофоретической подвижности и -потенциала частиц. В первом случае за Допт принимают дозу коагулянта, соответствующую наилучшему осветлению или обесцвечиванию воды, во втором случае оптимальной считают дозу, соответствующую нулевому значению -потенциала. [c.36]

Высокоэффективным методом разделения является сочетание электрофореза на бумаге с обычной хроматографией. При этом сначала через влажную бумагу, на которую нанесена смесь, пропускают ток высокого напряжения, а затем смесь хроматографируют с помощью подходящего растворителя в направлении, перпендикулярном направлению электрофореза. В результате достигается разделение первоначальной смеси в двух измерениях. Применение такого метода к продуктам ферментативного расщепления белков позволяет получить двухмерную картину, которую называют пептидной картой. Каждый белок дает характерную для него при каждом конкретном способе расщепления картину. Локализацию отдельных компонентов во многих случаях определяют с помощью специфических красителей. При определении аминокислот и пептидов в качестве такого красителя используют, например, нингидрин. Если производится элюция адсорбированных компонентов, то удобнее всего устанавливать их присутствие в элюате спектрофотометрически. Вероятно, наиболее тонким методом разделения белков следует считать иммуноэлектрофорез, при котором эффект достигается за счет использования различий в двух свойствах электрофоретической подвижности и иммунологической специфичности. [c.220]

Если один из сравниваемых белков обладает какими-то отличиями в аминокислотной последовательности определенного участка первичной цепи, то пептидные фрагменты этого участка будут передвигаться по электрохроматографическому полю с иными скоростями (а часто и в ином направлении) по сравнению с фрагментами такого же участка другого белка. В результате первые пептиды займут особое положение на пептидных картах, тогда как фрагменты цз идентичных участков полипептидных цепей займут аналогичные места. Отличия в последовательности, таким образом, будут обнаружены в пятнах, имеющихся на одной электрохроматограмме и не появляющихся на другой. Элюция и количественный аминокислотный анализ лишних пептидных пятен позволяет далее установить наличие специфических для данного белка аминокислот, характеризующих эти фрагменты. В частности, методом пептидных карт для триптического гидролизата удалось выявить особенности структуры различных гемоглобинов. Гемоглобин 5 отличается от нормального гемоглобина А по электрофоретической подвижности и частично замещает последний у больных серповидно-клеточной анемией. Исследования методом пептидных карт позволили локализовать различие в первичной структуре между гемоглобинами А и 5 в одной точке полипептидной цепи [c.82]

Измерить потенциал на поверхности клетки прямыми методами не удается. Однако можно определить другую величину, большей частью симбатно изменяюшуюся с изменением поверхностного потенциала — электрокинетический ( ) потенциал. Она вычисляется из данных электрофоретической подвижности (ЭФП) с учетом влияния поляризации двойного электрического слоя, изменения самой формы клеток при наложении внешнего электрического поля и других факторов [16]. Метод электрофореза позволяет, помимо определения 5"=потенциала и соответственно электрофоретического заряда клеток, локализованного в гидродинамически подвижной части двойного слоя [14], также анализировать строение клеточной поверхности на основе идентифицированных химических функциональных групп. С этой целью изучают влияние химической и биохимической (чаще всего ферментативной) модификации поверхностных функциональных групп, а также влияние ионной [c.17]