Эндонуклеаза I кишечной палочки

ДНК-лигазы — ферменты, катализирующие репарацию одноцепочечного разрыва, который обычно возникает под влиянием эндонуклеаз. Поэтому ДНК-лигазы называют еще исшивающими ферментами. Лигазы обнаружены в самых различных клетках, в том числе и в клетках, зараженных вирусами. Под влиянием этих ферментов образуются фосфодиэфирные связи между свободным 5 -фосфатным концом олнго- или полинуклеотида и З -гидроксильной группой соседнего олиго- или полинуклеотида. Скорее всего реакция протекает с обязательным образованием промежуточного комплекса лигазы с АМФ. Например, в клетках кишечной палочки такой комплекс образуется при взаимодействии лигазы с НАД, а в клетках млекопитающих такой комплекс образуется при взаимодейЛвии лигазы с АТФ. Предположительно схему действия ДНК-лигаз можно показать так (рис. 13) Катализируемые ДНК-лигазой ре- [c.51]

Эндонуклеаза I кишечной палочки — фермент, гидролизующий цепь ДНК во многих местах с образованием смеси олигонуклеотидов со средней длиной в семь нуклеотидов с 5 -фосфатными группами на конце. Это высокоспецифичный фермент по отношению к нативной ДНК, которую он расщепляет в семь раз быстрее, чем денатурированную. Экзонуклеаза I шишечной палочки в произвольных точках цепи ДНК вызывает двойные разрывы. Фермент ингибируется РНК. [c.89]

Эндонуклеаза И кишечной палочки —> специфический фермент, гидролизующий поочередно любую из цепей двухцепочечной алкилированной ДНК. В продуктах реакции содержатся 5 -фосфатные концевые группы. [c.89]

Р й5онуклеаза V — эндонуклеаза кишечной палочки единственная из всех известных эндонуклеаз, расщепляющих РНК до 5 -монофосфатов. Она атакует фосфодиэфирные связи в направлении 5 - 3, гидролизует только синтетические полирибонуклеотиды и природную информационную РНК. Для действия рибонуклеазы V требуется наличие всех компонентов, необходимых для транслокации, в том числе и 70S рибосом. В связи с этим предполагают, что данный с рмент играет роль в разрушении матричной РНК после ее трансляции. [c.75]

Представление о том, что носителем генетич. информации является ДНК, возникло еще в 1944. Было известно также, что ген представляет собой отрезок ДНК, кодирующий определенный белок, и что передача наследств. ин(]юр-мации между поколениями происходит посредством удвоения молекул ДНК. Но любым манипуляциям препятствовала огромная молекулярная масса ДНК, составляющая миллионы и миллиарды иа клетку, и невозможность получать химически однородные небольшие ее фрагменты. Положение изменилось, когда удалось обнаружить и выделить два рода ферментов 1) рестриктирующие эндонуклеазы (рестриктазы)-они рассекают молекулы ДНК в пределах строго определенных нуклеотидных последовательностей их описано ок. 400, наиб, употребительны рестриктазы E o RI, Hind III, Bam HI, Pst I, Sal I и др. 2) ДНК-лигазы (прежде всего фермент кишечной палочки, индуцируемый бактериофагом Т4), к-рые сшивают двухцепочечные фрагменты ДНК, восстанавливая межнуклеотндные связи в местак единичных разрывов. С помощью этих ферментов получают удобные для генетич. операций фрагменты ДНК и соединяют их в единое целое. Для такого объединения безразлично происхождение ДНК (химически у всех существ она одинакова), между тем в природе объединению генетич. информации неродственных существ препятствуют разл. межвидовые барьеры. [c.518]

ДНК> модель разматывающегося рулона — система представлений, предложенная для объяснения репликации ковалентно замкнутых кольцевых ДНК. Модель разматывающегося рулона возникла благодаря открытию (+)-цепей ДНК. превосходящих по длине зрелый вирусный геном, (—)-цепеЙ в виде ковалентно замкнутых одноцепочечных колец, а также длинных (- -)-цепей с З -гидроксильным концом, лежащим на матричном кольце, и свободным 5 -гидроксильным концом, выходящим В раствор. Эта модель довольно удачно объясняет строение реплицирующёйся ДНК некоторых бактериофагов (ФХ174, Т4 к) и кишечной палочки, состоящей из двух ковалентно замкнутых кольцевых цепей. В этой структуре (+)-цепь в определенной точке разрывается эндонуклеазой. При этом освобождаются З -гидрокснльная и -фосфатная группы. 5 -Фосфатная группа прикрепляется к какому-то участку мембраны, а цепь начинает наращиваться с З -гидроксильного конца, достраиваясь на матрице (—)-цепи, которая при этом продолжает оставаться замкнутой. В таком виде она представляется бесконечной матрицей в виде кольца. [c.52]

Модель Кэрнса объясняет механизм репликации кольцевой ДНК- Согласно этой модели удвоение всегда начинается с одной и той же точки и идет всегда в одном направлении с помощью своеобразного шарнирного механизма шарнир расположен в стартовой точке и дает возможность свободно вращаться неудвоенной части молекулы. Первоначально модель Кэрнса основывалась на радиоавтографических данных, свидетельствовавших о существовании репликационной вилки Шарнир может возникнуть в результате поочередного действия эндонуклеазы и лигазы, разрывающих и вновь соединяющих кольцевую молекулу ДНК. Радиоавтографические данные Кэрнса можно объяснить двумя вилками, которые движутся от общего начала в противоположном направлении. Такой двунаправленный синтез ДНК обнаружен в клетках кишечной палочки и подтверждается методами генетического анализа. Несмотря на то, что проблема раскручивания ДНК продолжает оставаться дискуссионной, все же результаты исследований указывают на то, что каждая из исходных цепей ДНК полностью сохраняется в течение всего периода репликации. [c.60]

Рестриктазы — специфические бактериальные эндонуклеазы, которые в зависимости от последовательности нуклеотидов расщепляют чужеродную ДНК, омичаю-щуюся по характеру строения от ДНК хозяина. Для появления-вктивности очищенного препарата рестриктазы из Кишечной палочки (ее" раньше называли экзонуклеазой П1) необходимо наличие ионов АТФ и 5-аденозилметионина. Этот фермент, [c.74]

Кроме ДНКазы I и II существует большая группа эндонуклеаз, атакующих как дву-, так и одноцепочечную ДНК. Так, например, у кишечной палочки их 7, среди них—4 низкомолекулярные (12—33 тыс. Да) и 3 высокомолекулярные (68—114 тыс. Да). [c.225]

Так, векторы для молекулярного клонирования первого поколения представляют собой естественные бактериальные плазмиды так называемого дикого типа, обнаруженные ранее в клетках кишечной палочки Es heri hia соИ как экстрахромосомальные элементы. Плазмида pS lOl, характеризующаяся большим размером, низкой копийностью и естественным расположением сайтов узнавания всех рестрикционных эндонуклеаз, была одним из таких векторов, который широко использовался в те первые годы молекулярного клонирования. Ее возможности как векторной молекулы были сильно ограничены и поэтому шло конструирование новых плазмид, обладающих целым рядом преимуществ. [c.224]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология