Карбоангидразы устойчивость

Для выяснения механизма катализа оказались полезными исследования смещения кислотно-основных равновесий в ферментативной системе вследствие присоединения лигандов к свободным местам координационной сферы металла активного центра. При ингибировании ионами, подобными N или HS", в области значений pH, меньщих величины pH для диссоциации H N или HzS (при 23°С —9,3 или 6,9 соответственно [108]), должно наблюдаться выделение протонов. Общее количество последних будет зависеть уже от нового положения кислотно-основных равновесий системы. Для карбоангидразы исследавание этих явлений было проведено с помощью дифференциального титрования в интервале pH от 6 до 10 [86], т. е. в области устойчивости циа-нидного комплекса фермента. Метод заключался в фиксировании (на рН-стате с точностью 1 0,02 мкмоль Н+) выде.тения или поглощения протонов после прибавления к раствору фермента экви-молярного количества ингибитора, содержащегося в небольшом объеме его концентрированного раствора. [c.591]

Однако имеются многочисленные случаи связывания ионов с глобулярными белками, которые не поддаются такому простому объяснению. Обнаружено, например, что некоторые ферменты, для каталитической активности которых необходимы специфические ионы, связывают эт1г ионы значительно прочнее, чем этого можно было ожидать из известного поведения лигандов, принадлежащих ферменту. Специфичность связывания ионов часто таки е совершенно отлична от поведения низкомолекулярных комплексообразователей. Например,ферментенолаза активируется ионом 7п +, который, как известно, образует очень устойчивые комплексы, а также ионами Mg + и Мп +, являющимися плохими комилексообра-зователями. Никакими другими ионами этот фермент ие активируется [928]. Константа ассоциации енолазы с при pH 7,2 составляет 3300 [9281, а константа ассоциации карбоангидразы с активирующим 7п + при pH 7,5 равна 10 [929]. Эти высокие значения, несомненно, указывают на кооперативный эффект нескольких лигандов, располагающихся [c.323]

Наиболее очищенные препараты фермента, полученные Сибли и Вудом, согласно данным полярографических измерений, содержат очень мало цинка (0,056%), который не удаляется при диализе против воды. Кроме того, карбоангидраза растений очень устойчива к цианиду. При исследовании томатов и овса на различных стадиях развития фермент был обнаружен лишь во фракциях листа, не содержащих хлоропластов (Wood а. Sibly, [c.135]

МЧ из сшитого полиакриламида с включенным в них белком описаны в работе [26]. Количество белка зависит от концентрации акриламида и сшивающего агента, а также от природы белка (сывороточный альбумин, р-лактоглобулин, иммуноглобулин G) и достигает 35% или 1,05 мкмоль на 1 г массы сухого вещества. Включенные белки (альбумин) сохраняют способность обратимо взаимодействовать с низкомолекулярными соединениями вследствие макропористой структуры носителя. Плотность МЧ, содержащих белок (1,05—1,07 г/см ), достаточно близка к плотности форменных элементов крови, что важно для обеспечения устойчивости их суспензии. Механическая стабильность и устойчивость к бактериальной деградации также вполне достаточны. Карбоангидраза, иммобилизованная в сильно сшитых полиакриламидных микрочастицах [27], ведет себя подобно ферменту в растворе при значительном повышении стабильности к термоинактивации и протеолизу, так как протеазы могут реагировать только с белком, находящимся на поверхности частиц. По всем этим параметрам МЧ с карбоан-гидразой превосходят микрокапсулы с тем же ферментом. [c.227]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология