Метилазы сайт-специфические

Разрезание ДНК на фрагменты Любая нативная ДНК может быть "измельчена" с помощью ферментов эндонуклеаз, среди которых особое место занимает рестриктазы (рестрикционные эндонуклеазы) Биологическая роль их, например, в клетках прокариот заключается в гидролизе чужеродной ДНК, проникающей в клетки извне Собственная хромосомная ДНК при этом остается незатронутой рестриктазами, что обусловлено наличием ферментов, называемых моди-фикационными мети-лазами, узнающими одинаковые с рестриктазами сайты Названные метилазы катализируют реакции метилирования А или Ц в немногих специфических сайтах в хромосомах, в результате чего метилированная ДНК оказывается нечувствительной к атаке рестриктазами Переносчиком метильных групп выступает S-адено-зил-Ь-метионин (SAM) [c.188]

Рестриктазы О явлении рестрикции и модификации у бактерии уже упоминалось в гл 5. В частности подчеркивалось, что специальные ферменты — рестриктазы — узнают в ДНК определенные специфические для каждого фермента последовательности нуклеотидов и расщепляют ее, e jin она не модифицирована в этих же участках сайт-специфическими метилазами. Уже описано около 2500 рестриктаз, выделенных из разных микроорганизмов. [c.163]

Метилазы. Следует различать сайт-специфические метилазы, сопряженные с рестриктазами, и метилазы, используемые клетками про- и эукариот для различных регуляторных целей. Молекулярный механизм действия метилаз RM-систем заключается в переносе метильных групп с 8-аденозил-Ь-метионина на определенные [c.171]

Чувствительностью к сайт-специфическому метилированию отличаются не только рестриктазы, но и другие белки, взаимодействующие с ДНК [357, 387]. Метилазы не являются в этом отношении исключением. Сайт-специфические модификации типа С, А, и (5-гидроксиметилцитозин) в неканонических положениях иногда ингибирует действие некоторых метилаз. Сводные данные представлены в табл. 18. [c.62]

Сравнение некоторых изометимеров (метилаз, узнающих идентичные нуклеотидные последовательности) позволило в вариабельных участках выделить схожие последовательности, которые, как предполагается, ответственны за узнавание субстрата [74,361]. Методами сайт-специфического мутагенеза показано, что в мультиспецифических фаговых метилазах эти последовательности являются непрерывными участками длиной 40—50 аминокислот, расположенными тандемно [72, 74, 153, 395]. Таким образом, вариабельность специфичности метилаз обеспечивается комбинациями узнающих участков в главном остове, в котором сосредоточены узлы связывания Адо-мет и введения СНз-группы в 5-ое положение цитозина. [c.115]

Рестриктазы класса III сходны с рестриктазами класса I в том, что они действуют в одном комплексе с метилазами и узнают несимметричные последовательности нуклеотидов. Комплекс состоит из двух субъединиц. Способность к специфическому связыванию с ДНК присуща только метилазе, поэтому ее называют MS-субъединицей. Расщепление ДНК R-субъединицами происходит на определенном расстоянии от сайтов узнавания. Например, рестриктаза E oPl характеризуется сайтом AGA (27/25). [c.169]

Механизм специфической или общей элимина-Щ1И теС неизвестен, предложены только разные его модели. Одна из них предполагает прямую замену метилированных остатков С неметилированными. Эту гипотезу подтверждает тот факт, что дифференцировка in vitro некоторых лейкозных клеток, индуцированная химическими реагентами, сопровождается массовым деметилированием теС. При этом в клеточную ДНК включается меченый дезоксицитидин, но не дезоксиаденозин (рис. 8.110). Согласно второй модели, связывание белков, специфичных для определенных тканей или стадий развития, с последовательностью, содержащей сайт метилирования, блокирует работу метилазы, поддерживающей метилированное состояние, и после цикла репликации этот сайт становится полностью неметилированным. Согласно третьей модели, ме- [c.141]

Эндонуклеазы типов I и II. Ферменты, относящиеся к фуппе эндонуклеаз типов I и II,— это сложные белки, обладающие активностями рестриктирующей эндонуклеазы и метилазы. Эти интересные ферменты не используются, однако, при конструировании рекомбинантных молекул ДНК. Ферменты типа I связываются с ДНК в специфических участках и затем производят двух цеп очечные разрезы на разном расстоянии от сайтов узнавания, варьирующем от 400 п.н. до 7 т.п.н. Для осуществления ферментативного гидролиза ДНК необходимы АТР и 8-аденозилметионин. Последний активирует фермент. Разрезание сопровождается гидролизом АТР, при этом фермент утрачивает эндонуклеолитическую активность, но сохраняет АТРаз-ную. Таким образом, эндонуклеазы типа I являются ДНК-зависимыми АТРазами. Кроме того, они [c.214]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология