Осаждение белков трихлороуксусной кислотой

Окисление надмуравьиной кислотой. Для получения надмуравьиной кислоты смешивают 99%-пую муравьиную кислоту и 30%-ный пероксид водорода в соотношении 95 5 и оставляют стоять в закрытом сосуде при комнатной температуре в течение 2 ч. К этому времени содержание надмуравьино кислоты в реакционной смеси достигает максимального, а затем постепенно снижается. Навеску белка растворяют в 99%-пой муравьиной кислоте, добавляют метанол (до 20%-ной концентрации), охлаждают до —5 С и добавляют надмуравьи-ную кислоту (1 мл на 5 мг белка) в соотношении 2 1, Окончательная концентрация белка в реакционной смеси составляет --0,5%. Инкубируют при —5 --10Х в течение 2—3 ч, разбавляют водой и высушивают лиофильно. Белок можно выделить из раствора осаждением трихлороуксусной кислотой или оога ническим растворителем. Реакционную смесь можно разбавить вдвое охлажденной водой и диализовать на холоду против воды (дважды) и 1 мМ 2-меркаптоэтанола, а затем высушить лиофильно. См. также разд, 1.5.1.1. [c.91]

Образцы белков, предназначенные для пептидного картирования, часто находятся в больших объемах. Для их концентрирования и одновременного удаления нежелательных компонентов буферов белок осаждают обработкой 50%-ной (масс./об.) трихлороуксусной кислотой (для осаждения большинства белков достаточно 2 ч при 4 °С) и отделяют центрифугированием. При работе с очень небольшими количествами радиоактивно меченных белков для затравки и полноты осаждения добавляют немеченный ( холодный ) белок-носитель (например, иммуноглобулин). Поскольку ни белок-носитель, ни протеаза не [c.232]

Для концентрирования белков из разбавленных растворов применяется осаждение солями, кислотами и органическими растворителями (ацетон, метанол), ультрафильтрация, диализ, выпаривание, лиофилизация. Осуществлять эти операции тем сложнее, чем меньшее количество белка находится в растворе, например трихлороуксусная кислота не осаждает белок при его содержании 1—25 мкг [17]. [c.246]

Приливают 10 мл холодной трихлороуксусной кислоты (24 7о, масс./об.) до конечной концентрации 6%- Оставляют стоять во льду в течение 1 ч до полного осаждения комплекса белок — детергент. [c.249]

Присутствие ДСН не оказывает влияния на реакцию [216], а меркаптоэтанол должен быть удален полностью перед добавлением реагента (обычно это делается тщательной сушкой образца в вакууме) [238]. От таких соединений, как катехоламины, также дающие окрашивание, белок должен быть предварительно освобожден осаждением трихлороуксусной кислотой [165, 279, 421]. Описана модифицированная процедура с использованием хлорами-на-Т для растворов белков, содержащих пурины и/или сульфгидрильные соединения [157—159]. [c.293]

Белки в концентрации менее 2 мкг/мл определялись с помощью кумасси R (фирма Sigma). Белок осаждали на стеклянно-фибровый диск, промывали трихлороуксусной кислотой, обрабатывали реагентом кумасси и образовавшийся окрашенный комплекс растворяли в метанольном растворе NaOH для колориметрического определения при 590 нм [249]. Применение щелочи, рекомендуемое для снятия осажденного белка с подложки, улучшает последующее колориметрическое или радиометрическое измерение [101]. [c.298]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология