Электрофорез без восстановители

Шапиро и др. [1171] предложили сходную систему для разделения полипептидных цепей белков. В этой системе гель содержит 0,1 М фосфатный буфер (pH 7,1) и 0,1% ДСН. Буфер следует готовить из фосфатов натрия, так как ионы калия дают осадок с ДСН. Перед электрофорезом рекомендуется добавлять 2-меркаптоэтанол или другой восстановитель 5Н-групп. Описанная система с небольшими изменениями была использована многими авторами [119, 120, 456, 679, 1300] для определения молекулярных масс рибосомных белков. [c.311]

Для контроля за степенью очистки белков чаще применяют метод электрофореза. Большинство авторов в качестве носителя используют гомогенные гели или градиент концентрации акриламида. Основной способ при этом — электрофорез в диссоциирующей среде ДДС-Na соответственно процедуре, которую описал Лэммли [68]. В определенных случаях завершающим приемом при этом являются иммунодиффузия [29, 114] либо иммуноэлектрофорез [17, 80, 118]. При исследовании структуры некоторые авторы прибегают к двумерному электрофорезу. Тогда первая миграция молекул может происходить в гомогенном геле полиакриламида с ДДС-Na или без него во втором направлении молекулы мигрируют в полиакриламидном геле с ДДС-Na в присутствии восстановителей дисульфидных связей (р-меркапто-этанол) [10, 40, 61, 78]. Чтобы охарактеризовать субъединицы легуминов гороха и конских бобов, Матта и др. [77, 78] применяют сочетание ДДС-Na с р-меркаптоэнталом и электрофокусированием. Рестани и др. [92 пользуются этим же способом применительно к глобулинам люпина, а Ху и Еэзен [53] демонстрировали гетерогенность белков сои. Указанные методы с [c.155]

ЦИЯ при электрофорезе в присутствии ДДС-Ыа без восстановителей дисульфидных связей. Они легко переводятся в растворимое состояние разбавленной уксусной кислотой и упоминавшимися выше диссоциирующ,ими агентами. [c.217]

Натуральный каучук добывают из млечного сока (латекса) каучуконосных растений. Каучук находится в млечном соко в виде эмульсии. В латексе каучук заряжается отрицательно и при электрофорезе осаждается на аноде. Электрофоретическое выделение сырого каучука из латекса применяют в практике резинового производства. Однако присутствую1цие в ла тексе элек-тpoJПiты затрудняют этот процесс, главным образом, потому, что наряду с электрофорезом идет и электролиз. Вследствие этого на аноде вьщеляются газы, которые затрудняют равномерное осаждение каучука и, кроме того, делают осадок рыхлым. Во избежание этих осложнений прибегают к ряду приемов, например ведут электрофорез при малом анодном потенциале, что затрудняет разряд ионов, применяют в качестве анода растворимые металлы, добавляют в ванну восстановители, наконец окружают анод непроводящей диафрагмой из пергамента или асбеста, па которой и осаждается каучук. [c.174]

Следует опасаться возможности окисления легко окисляющихся соединений. Это особенно относится к белкам, содержащим 5Н-группу. Роль окислителя может играть кислород, образующийся на аноде, или персульфат, если он применялся в качестве катализатора при полимеризации геля, поскольку отмыть малые примеси этого соединения трудно. Попытки удалить персульфат путем предварительного электрофореза при pH 4,3 не дали положительных результатов [407, 408]. Влияние персульфата можно нейтрализовать, если добавить аскорбиновую кислоту в качестве восстановителя [410]. Окислители можно удалить также путем предварительного электрофореза с добавками дитионата [410], гидрохинона, цистеина или тиогликолята [408]. Возможность окисления можно уменьшить, если применить охлаждение геля. Авторы работы [394] показали, что охлаждение в щелочной области не только уменьшает вероятность окисления, но и улучшает разделение [394]. [c.175]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология