Полиэтиленгликоль хлоропластов

Полиэтиленгликоль представляет собой сильно гидрофильное вещество и способен связывать много свободной воды в растворе свободная вода — это молекулы, доступные для взаимодействия с заряженными молекулами (обычно ионами), растворенными в воде. Таким образом, при высоких концентрациях ПЭГ такие макромолекулы, как ДНК, больше не могут оставаться в растворе и осаждаются. Мембрана протопласта в норме отрицательно заряжена. Благодаря фосфатным группам ДНК тоже имеет отрицательный заряд, и, следовательно, взаимное отталкивание зарядов препятствует взаимодействию между ДНК и протопластами. При очень высоких концентрациях (30—40% вес на объем) ПЭГ также, по-видимому, минимизирует взаимное отталкивание зарядов таким образом, клеточные мембраны могут прийти в тесный контакт с возможным слиянием липидных бислоев и впоследствии после разведения со слиянием клеток. Было показано, что полиэтиленгликоль представляет собой и сильный стимулятор эндоцитоза у протопластов растений при добавлении ПЭГ они способны поглощать большие частицы, например целые хлоропласты, липосомы или [c.203]

Гомогенат свежесорванных листьев картофеля (25 г в 70 мл 0,5 М раствора ацетата натрия, содержащего 0,004 М хлорид магния) наносят на колонку и выдерживают в течение 30 мин для образования слоя хлоропластов. Затем слой хлоропластов перемешивают с песком так, чтобы скорость элюирования составляла 2 мл/мин. Первые порции элюата, имеющего коричневую окраску, анализируют колориметрически. Далее промывают колонку 250 мл исходного буферного раствора и 150 мл модифицированного буфера, отличающегося от исходного отсутствием полиэтиленгликоля или хлорида натрия. К элюату добавляют полиэтиленгликоль и хлорид натрия до нужной концентрации и обе порции фильтруют через вторую колонку, аналогичную первой. При этом вирус вновь сорбируется на целлюлозе. Элюиро- [c.312]

Введение рекомбинантных ДНК в составе векторных молекул в хлоропласты высших растений в основном осуществляют биолистическими (biolisti ) методами путем бомбардировки клеток микрочастицами с сорбированными на них молекулами ДНК [199]. Принцип таких методов будет кратко рассмотрен в разделе 3.8.3. По-прежнему весьма популярным остается метод трансформации хлоропластов с использованием полиэтиленгликоля [200]. [c.142]

Для этого выделение хлоропластов производят в забу-ференных водных средах (рН=6,9—8,0), содержащих в качестве изотонического элемента 0,3—0,35 М раствор хлорида натрия или растворы 0,3—0,5 М сахарозы. В среду выделения обычно вводят также некоторые неорганические ионы, необходимые для сохранения функциональной активности хлоропластов (магний, фосфат), а также восстановители (аскорбат), сульфгидрильные соединения (цистеин, глутатион), стабилизирующие факторы (альбумин, фиколл, декстран, полиэтиленгликоль). [c.167]

Протопласты, которые всплывают хуже, можно очистить в водной двухфазной системе, приготовленной после смешивания двух полимеров декстрана и полиэтиленгликоля. Такая смесь состоит из,5 5%-ного (вес/объем) полиэтиленгликоля6000, 10%-ио-го (вес/объем) декстрана Тао, ЮмМ натрий-фосфатного буфера (.pH 7,5) и 0,46 мМ сорбитола. Если тщательно смешать 0,6 мл препарата неочищенных протопластов и 5,4 мл двухфазной смеси и затем отцентрифугировать в течение 5 мии при 300 g и 4°С, протопласты перейдут на границу раздела фаз, а хлоропласты соберутся в нижней фазе. Отобранные из промежуточной фазы протопласты можно снова ресуспендировать и затем промыть соответствующей средой. [c.552]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология