Энхансеры транскрипционные

Энхансер Р-глобина курицы расположен позади транскрипционной единицы Р-глобина. В последовательных поколениях эритроцитов (и только в них), он образует гиперчувствительный к нуклеазе сайт. Этот факт свидетельствует о том, что в эритроцитах с энхансером связаны белки-регуляторы. Для того чтобы ггдентифицировать их, следует определить, какая именно последовательность нуклеотидов необходима для проявления активности энхансера. Для этого мутантные последовательности энхансера объединяли с маркерным геном. Продукт такого гена легко определить это дает возможность судить о влиянии любой мутации энхансера на транскрипцию каждую рекомбинантную конструкцию вводили в эритроциты курицы и регистрировали эффективность экспрессии гена-маркера (рис 10-20). Те нуклеотиды, которые при таком тестировании оказываются необходимыми для активности энхансера, можно считать участками связывания специфических белков. С помогцью данной методики было установлено, что тагсих белков-три (рис. 10-21). Содержание каждого из них в клетке очень мало, но благодаря гому, что сайты их связывания известны, можно клонировать кодируюгпие последовательности ДНК и, следовательно, получать эти регуляторные белки в неограниченном количестве (см. разд. 9.1.7). [c.193]

Рис. 10-22. Транскрипционная активность гена определяется совместным действием белков-регуляторов, связанных с элементом, расположенным перед промотором, и белков, связанных с энхансером. А. Типичное расположение двух типов регуляторных элементов относительно кодирующей последовательности. Б. Примеры совместного действия белков, связанных с этими двумя элементами. В зависимости от того, какие белки связались, каждый отдельный элемент в данном примере обладает либо слабым положительным ( + ), либо сильным положительным (+ +). либо слабым отрицательным (—), либо сильным отринательным (--) действием, как это показано на рисунке.

Как связывание гормон-рецепторпого комплекса с геном активирует его транскрипцию Было показано, что узнаваемые гормоном участки ДНК могут стимулировать транскрипцию даже гогда, когда они удалены на тысячи оснований от промотора, где начинается синтез РНК. Механизм действия таких участков ДНК, называемых транскрипционными энхансерами, обсуждается в гл. 10 (разд. 10.2.11). [c.351]

Самоинактивирующиеся векторы, или векторы- самоубийцы ,, разработаны для того, чтобы исключить влияние вирусных промоторов и энхансеров на экспрессию гена, поставленного под контроль внутреннего промотора [29]. Эти векторы сконструированы таким образом, что в процессе обратной транскрипции и интеграции те участки вирусного генома, которые содержат промоторные и энхансерные элементы, подвергаются делец ш. Провирусные LTR в инфицированных клетках становятся транскрипционно неактивными. Это способствует нормальной экспрессии генов, транскрибируемых с внутреннего промотора и исключает возможность нежелательных последствий включения (инсерции) провируса, в частности транскрипционной активации соседних генов [13]. Несмотря на то что титр вирусных препаратов, полученных на основе подобных векторов, был достаточно низок (10 к. о. е./мл [29]), самоинактивирующиеся векторы можно рассматривать как наиболее перспективные кандидаты для применения в генотерапии человека [3]. [c.285]

Регуляция. Особенностью транскрипционного аппарата эукариотических клеток является наличие в ДНК специфических локусов — энхансеров (enhan er — усилитель). Они участвуют в регуляции активности генов, увеличивая эффективность транскрипции ближайшего гена в десятки и сотни раз. При этом энхансер может находиться в любой ориентации по отношению к гену, располагаться с любой его стороны, внутри его (в инт-роне) и даже на расстоянии в несколько тысяч пар нуклеотидов. По многим своим свойствам, в частности по мозаичности строения, энхансеры напоминают дополнительные части промоторов, но только расположенные в стороне. Сходство усиливается и тем, что некоторые элементы (боксы) мозаики промоторов и энхансеров одинаковы, а также тем, что специфика регуляции экспрессии генов определяется элементами и/или промоторов, и/или энхансеров. [c.31]

По способу регуляции экспрессии генов различают два типа энхансеров. Индуцибельные энхансеры реагируют на изменения в окружающей среде (тепловой шок, вирусная инфекция, появление тяжелых металлов, ростовых факторов, стероидов и т. п.). Такие энхансеры есть у генов белков теплового шока, металлотионина, -интерферона, некоторых онкогенов и др. Т к а -неспецифичные и временные энхансеры активны только в определенных клетках или в определенное время развития организма (например, энхансеры генов иммуноглобулинов). Механизм работы энхансеров заключается в посадке на них специфичных белков, которые за счет образования петель в ДНК взаимодействуют с транскрипционными факторами, связанными с промотором ближайшего гена, увеличивая тем самым число посадок на него РНК-полимеразы П. По-видимому, так же работают и локусы с противоположным эффектом действия — сай-ленсеры (silen er — успокоитель), в присутствии которых транскрипционная активность РНК-полимеразы II уменьшается. У дрожжей аналогами энхансеров и сайленсеров являются последовательности URS и UAS (см. рис. 1.8,6). [c.31]

Сперматогенез, т.е. процесс образования спермы из герминальных стволовых клеток, протекает в семенниках у млекопитающих и у дрозофилы сходным образом. Важным этапом этого процесса является активация транскрипции массы семенник-специфичных генов перед двумя делениями мейоза, механизмы которой остаются непонятными. В ходе наших исследований у дрозофилы был обнаружен район хромосомы, содержащий пять генов, экспрессирующихся только в семенниках. При этом гены, составляющие этот район, оказались неродственными между собой, что является новым типом кластерной организации генов. Предполагается, что в описываемом районе генома находятся функционирующие в генеративной ткани самцов дальнодействующие регуляторы транскрипции - активатор транскрипции (энхансер) и элементы, препятствующие распространению влияния активатора на соседние гены (инсуля-торы). На этой модельной системе мы исследуем механизмы транскрипционной активации семенник-специфичных генов. С этой целью изучаются промоторные области генов, входящих в кластер, дальнодействующие транскрипционные регуляторы (энхансеры и инсуляторы), вероятно, присутствующие в кластере, а также состояние хроматина в кластере. [c.40]

В ходе наших исследований у дрозофилы был обнаружен кластер генов, экспрессирующихся в ходе сперматогенеза. На этой модельной системе мы исследуем механизмы транскрипционной регуляции семенник-специфичных генов. Изучаются как промоторные области генов, входящих в кластер, с целью выявления в них участков, необходимых для транскрипции в семенниках, так и дальнодействующие транскрипционные регуляторы (энхансеры и инсуляторы), вероятно, присутствующие в кластере. Предполагается также исследование состояния хроматина в кластере на разных стадиях сперматогенеза. Мы надеемся, что раскрытие системы активации транскрипции в первичных сперматоцитах у самцов дрозофилы позволит в дальнейшем легче понять механизм транскрипционной регуляции, действующий в ходе образования спермы у млекопитающих и человека. [c.43]

Суммрфуя вышеприведенные данные и наблюдения, которые в настоящее время носят разрозненный характер, можно признать сложный характер взаиморегуляции репликации и транскрипции. Очевидным является тот факт, что стимулирующее действие некоторых транскрипционных факторов может увеличивать частоту инициации репликации в определенных участках хромосом. Элементы, усиливающие репликацию, - энхансеры репликации, такие как октамерные мотивы и другие элементы - могут, по-види-мому, играть важную роль в регуляции репликации генома и клеточного цикла у высших эукариот. [c.241]

Перед инициацией синтеза РНК необходимо, чтобы фактор, играющий важную роль в транскрипции (ТАТА-фактор, TFIID), образовал стабильный транскрипционный комплекс. Последовательности, примыкающие к ТАТА-боксу, формируют нужный для транскрипции элемент (элемент, расположенный перед промотором). И энхансер, и предпромоторный элемент содержат серию коротких нуклеотидных последовательностей, связывающихся с соответствующими регуляторными белками. Эти белки взаимодействуют друг с другом в результате этого взаимодействия происходит включение или выключение генов. С помощью методов рекомбинантной ДНК показано, что регуляторные белки часто состоят из нескольких доменов, каждый из которых обладает своей функцией. [c.199]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология