Иммуноанализ больших молекул

Деполяризация флуоресценции. Альтернативой методу переноса энергии является метод деполяризации флуоресценции, предложенный авторами [4]. В основе последнего лежит различие скоростей вращательной диффузии свободного и связанного с рецептором аналога определяемого вещества. Когда аналог связан с высокомолекулярным рецептором, скорость его вращения замедляется, что приводит к уменьшению деполяризации испускаемого света. Таким образом, увеличение степени поляризации флуоресценции непосредственно связано с количеством связанного аналога. В наборах для иммуноанализа, основанного на этом принципе, можно использовать низкомолекулярные аналоги определяемых веществ, поскольку сохранение реагентов не составляет проблемы. В случае биосенсоров желательно, чтобы молекулы аналога были достаточно велики и удерживались диализной трубкой, так что молекулярная масса аналога должна быть порядка нескольких тысяч. Это, однако, приведет к снижению чувствительности метода, так как для больших молекул аналога различие скоростей вращательной диффузии в свободном и связанном состоянии уменьшается. [c.512]

Предложены два способа исключения помех со стороны сыворотки при иммуноанализе ферритина. Во-первых, конъюгат [фермент—ферритин] будет защищен от антифермента, если связать фермент с большим числом молекул альбумина. Инте- [c.111]

Метод гетерогенного вольтамперометрического иммуноанализа больших молекул разработан Дойлом и др. [3]. В качестве модели авторы использовали сывороточный альбумин человека, модифицированный диэтилентриаминпентауксусной кислотой (ДТПУ) и меченный индием Применение индия как металла-метки может [c.61]

В литературе описано большое количество модификаций иммуноанализа с маркерами, детектируемыми в хемилюминесцентных реакциях. Классификация их, как правило, осуществляется в соответствии с типом метки. Маркером в методах хемилюминес-центного иммуноферментного анализа (ХИФА) является катализатор-фермент, в методах хемилюминесцеИтного иммуносубстрат-ного анализа (ХИСА) — молекулы субстратов. [c.133]

Поликлональная антисыворотка может содержать до 10 ООО различных типов молекул IgG. Напротив, все молекулы моноклональных антител должны быть идентичными. Моноклональные антитела предпочтительнее в методах конкурентного иммуноанализа, поскольку в этом случае можно утверждать, что меченый или связанный с твердой фазой антиген и определяемое вещество конкурируют за один и тот же центр связывания. Моноклональные антитела очень хорошо работают в сандвич -анализе, поскольку, как правило, хорошо известна специфичность их эпитопов. Такие антитела легко получать в больших количествах и с высокой степенью чистоты. Большинство нативных антител бивалентны, и все они моноспецифичны. Недавно с помощью гибридных гибридсяк и методов генной инженерии получены новые типы антител. Антитела MOiyT быть мечены или связанными с твердой фазой с помощью пассивной адсорбции или за счет ковалентных связей. [c.10]

Чувствительность иммуноанализа зависит от констант связывания специфических антител. Чем больше константа связывания, тем чувствительнее система (Yalow, 1980). Помимо антител с высокой константой связывания для создания удобнога метода анализа необходима чувствительная метка, облегчающая детектирование. Фермент-зависимые метки, как правило, очень чувствительны, так как они усиливают слабые сигналы благодаря катализу. Удалось, например, определить даже отдельную молекулу фермента -галактозидазы (Rotman, 1961). [c.31]

В иммуноанализе на основе ферментных каналов используют два фермента, катализирующих последовательные реакции, причем продукт реакции с участием первого фермента служит субстратом для второго (рис. 10-1). Эффективность катализа сопряженных реакций максимальна, когда молекулы обоих ферментов находятся в непосредственной близости на поверхности твердых частиц или в составе молекулярных агрегатов (Mosba h, Mattiason, 1970). В этом случае благодаря высокой локальной концентрации промежуточного продукта второй фермент работает с большим числом оборотов. Мы использовали пару ферментов, составленную из глюкозооксидазы и пероксидазы. [c.131]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология