Метод диагонального электрофореза

Пептиды, содержащие метионин, можно выделить методом диагонального электрофореза. В основе метода лежит специфическая реакция метионина с иодацетамидом в кислой среде в результате образуется карбамоилметилсульфониевая соль метионина (КМ-метионин). [c.109]

Весьма ценной разновидностью обычной тонкослойной или бумажной хроматографии является диагональная хроматография. Сначала нанесенный материал хроматографируют в одном направлении, затем в тонком слое на пластинке или бумаге проводят определенную химическую реакцию, после чего осуществляют разделение в другом направлении. Немодифицированные соединения располагаются по диагонали пластинки, тогда как продукты реакции оказываются смещенными по отношению к ней. Этим методом исследовали фотохимические [149] и другие [147] реакции флавинов. Аналогичный диагональный электрофорез применялся для идентификации пар —8Н-групп, образующих в белках дисульфидные мостики [150]. Пептидные фрагменты, содержащие 8—8-мостики, разделяли с помощью электрофореза на бумаге, затем обрабатывали бумагу парами надмуравьиной кислоты, разрывающей мостики [уравнение (2-20)], и после электрофореза в перпендикулярном направлении опрыскивали бумагу нингидрином. Пятна, расположенные вне диагонали, соответствовали фрагментам, которые участвовали в образовании 8—8-мостиков. По положению пятен подбирали [c.180]

Б. МЕТОД ДИАГОНАЛЬНОГО ЭЛЕКТРОФОРЕЗА [c.106]

Перенос материала с помощью пришивания, а также использование специфических химических реакций с некоторыми боковыми группами аминокислотных остатков позволили разработать особый метод электрофореза, так называемый диагональный электрофорез. С его помощью можно довольно легко выделять пептиды, имеющие в своем составе цистеин, цистин, метионин, гистидин или лизин. [c.96]

Рис. 28. выделение цистинсодержащих пептидов методом диагонального электрофореза. [c.76]

Расщепить пептиды по остатку метионина можно с помон ью агентов, алкилирующих тиоэфирную группу по механизму реакции, аналогичному расщеплению бромоцианом. Наиболее эффективным реагентом оказался иодоацетамид [109, ПО]. При обработке апокаталазы этиленимином идет реакция присоединения по тиоэфирной группе метионина с образованием амино-этилсульфониевой соли с последующим расщеплением пептидной связи [166]. В сочетании с методом диагонального электрофореза эту реакцию применяли для идентификации и выделения пептидов, содержащих остатки метионина [187, 188]. [c.101]

Из всех использованных методов пептидного картирования наиболее элегантным является метод диагонального электрофореза (ЭФ), основанный на отсутствии свободной карбоксиль-ной группы в амидированных белках. Перед ферментативным расщеплением амидируют карбоксильные группы боковых цепей и С-концевой аминокислоты. После гидролиза С-концевой фрагмент оказывается единственным, не имеющим свободного карбоксила. Его можно селективно идентифицировать, так как его ионный заряд, а следовательно, и электрофоретическая подвижность почти одинаковы при изменении pH в любую сто рону от pH 3,5 (р/С а-карбоксильной группы). Подвижности пептидов, содержащих свободную карбоксильную группу, увеличатся при подкислении раствора (рН<3,5). После двумерного ЭФ на диагонали электрофореграммы обнаруживается только С-концевой пептид. [c.485]

Gla полностью декарбоксилируется в условиях кислотного (1 М НС1, 100 °С, 16 ч, вакуум) и щелочного гидролиза, используемого для белков [205]. Пептиды, содержащие остатки Gla, могут быть обнаружены с помощью так называемого теплового диагонального метода. Пептидная смесь подвергается электрофорезу на бумаге при pH 6,5. Бумагу высушивают нагреванием до 80 в течение 1 ч и затем проводят электрофорез при pH 6,5 во втором направлении. Декарбоксилированные пептиды сдвигаются при этом с диагонали [235] (а также Я. Marris, частное сообщение). [c.264]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология