Нуклеотиды определение после гидролиза

Определение иммобилизованных белков, пептидов, аминокислот, нуклеотидов, углеводов и других веществ после их освобождения с помощью кислотного, щелочного или ферментативного гидролиза [c.247]

ДНК не содержит оснований, достаточно реакционноспособных по отношению к гидроксиламину (при pH 10), однако реакцию все же удается провести после дезаминирования ДНК, осуществляемого, например, азотистой кислотой, в результате чего цитозиновые остатки превращаются в урацильные. Это дает возможность специфического расщепления ДНК на олигонуклеотидные блоки по месту нахождения в исходной цепи дезоксицитидиновых звеньев, что особенно ценно, поскольку пока не известны ферменты, гидролизующие ДНК достаточно специфично по отношению к какому-либо определенному нуклеотиду. Такое сочетание двух методов химической модификации (обработки азотистой кислотой и гидроксиламином) с последующим кислотным гидролизом было применено для изучения распределения в ДНК тимидина [c.472]

Щелочной гидролиз РНК. Нуклеотидный состав РНК можно определять без предварительного извлечения НК из растений и после их извлечения. Если определение нуклеотидного состава ведется без извлечения НК из растительной ткани, то последняя должна быть быстро зафиксирована, отмыта от кислоторастворимых нуклеотидов, пигментов и жиров. С этой целью свежий растительный материал гомогенизируют с охла-ладенным до —10° 96%-ным этанолом (на 1 г сырого веса берут 10 мл этанола). Гомогенат центрифугируют и осадок последовательно обрабатывают 20-кратными объемами следующих реагентов 1) 96%-ного этанола при комнатной температуре, дважды 2) 50%-ного этацола, подкисленного ледяной уксусной кислотой до pH 4,5, дважды при комнатной температуре 3) охлажденной (до 4°) 0,2 н. НСЮ4, дважды суспензию центрифугируют в течение 10—15 минут при 2000—4000 д строго на холоду (продолжительность кислотной обработки не должна превышать одного часа) 4) 96%-ного этанола при комнатной температуре, дважды 5) смеси абсолютного этанола и эфира (3 1), дважды 6) эфира при комнатной температуре 1 раз. [c.95]

Полное количество иммобилизованного компонента может быть определено двумя путями. Первый заключается в непосредственном анализе твердого носителя. Для пептидов и белков использовали аминокислотный анализ после исчерпывающего кислотного гидролиза (6,0 М НС1, ПО С, 24 ч, вакуум) (см., например, работу [4]). Для матриц, содержащих иммобилизованные нуклеотиды, проводилось определение фосфата [14] после исчерпывающего гидролиза модифицированной матрицы [15]. Другой метод состоит в определении после реакции присоединения количества лиганда, не связавшегося с твердым носителем. Количество иммобилизованного лиганда определяется вычитанием количества лиганда, остающегося в растворе после реакции (включая промывные воды), от исходного количества лиганда. [c.227]

В тех случаях, когда продукты рестриктазной реакции имеют полностью спаренные концы, анализ 5 -концевой последовательности дает информацию лишь о структуре половины сайта. В отсутствии сведений об узнаваемом участке, полученных независимыми методами (например, косвенными), для большей достоверности анализ З -коицов является необходимым. Чаще всего для этой цели используется метод анализа ближайших соседей. В таких случаях применение ДНК полимеразы Т4, благодаря присущих ей полимеразной и 3 ->-5 экзонуклеазной активностей, позволяет в присутствии меченных нуклеозидтрифос-фатов ввести 2Р-меченый З -концевой нуклеотид. После гидролиза рестриктов соответствующими фосфодиэстеразами и анализа продуктов реакции определяется ближайший сосед включенного меченого предшественника [99, 166]. В результате такого анализа устанавливается структура З -концевого динуклеотида рестрикционного фрагмента. Обсуждаемый методический подход нашел применение в экспериментах по определению субстратной специфичности рестриктаз Xma I [92] и Hind III [195]. [c.176]

Влияние 7 поразительно он почти полностью подавляет синтез белкой. По-видимому, 7 задерживает образование комплекса рибонуклеиновых кислот и высокомолекулярных нуклеопротеидов, которое необходимо для синтеза белка 1321—328]. Если образования белков не происходит, деятельность клеточных процессов сводится к попыткам компенсировать это производством большего количества определенных типов рибонуклеиновых кислот, участвуюш их в синтезе белка. В результате, когда 7 тормозит синтез белка, в клетке наканливаются рибонуклеиновые кислоты. Аккумулирован-ная рибонуклеиновая кислота после удаления хлорамфеникола может быть вновь гидролизована до нуклеотидов [329]. Интересно, что способность 7 подавлять белковый синтез наблюдалась во внеклеточных экспериментальных системах, полученных из таких микроорганизмов, которые устойчивы к бактериостатическому действию 7 из-за непроницаемости их клеточп1.1х мембран [330]. Важно также, что ь-трео и ь-эритроизомеры 7 почти не влияют на белковый синтез [322]. Таким образом, биологическое влияние 7 сейчас хорошо объясняется на субклеточном уровне, и остается только более точно определить природу нуклеопротеинового рецептора в этом направлении достигнут некоторый прогресс [328]. [c.169]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология