Коэффициенты распределения белков

Если в наносимой на колонку смеси имеются сильно связываемые белки, то белок с величиной а, равной 0,90, будет перемещаться еще быстрее, поскольку после вытеснения из первоначальных центров связывания в верхней части колонки он окажется в области, где большая часть центров связывания будет необратимо занята другими белками. Белок будет двигаться с буфером дальше вниз по колонке в область, которую еще не достигли другие белки. Ясно, что в этих условиях объем наносимого буфера не должен значительно превышать объем колонки, и не следует слишком сильно промывать колонку исходным буфером перед началом элюции. При работе со сложными смесями окрашенных белков в верхней части колонки обычно можно наблюдать появление окрашенных зон по ме ре того, как отдельные компоненты смеси вытесняют друг друга в соответствии с их коэффициентами распределения. Эти зоны [c.124]

Теорию, изложенную в разд. 4.1, можно применить к адсорбционной хроматографии и сделать при этом некоторые интересные выводы. Поскольку константа диссоциации комплекса адсорбента с белком (Кр) должна быть близка к константе диссоциации комплекса белка с лигандом или каки.м-то образом связана с ней, можно легко рассчитать величину коэффициента распределения. Один из недостатков аффинных адсорбентов заключается в том, что, хотя степень модификации может быть достаточно высокой (1—10 мкмоль-см ), только незначительная часть иммобилизованного лиганда оказывается ориентированной должным образом даже при наличии удлиняющего мостика обычно только 1—2% общего числа центров связывают белок. Хорошей считается емкость в 1—2 мг-см что для белка с мол. массой 100000 соответствует величине /п/ от 0,01 до 0,02 мМ. Если допустить, что равно 0,02, а рг — 0,01 в уравнении (4.5), то можно вычислить величины а для различных значений Кр, данных в табл. 4.7. [c.153]

Белок j Начальная концентрация норм ального электролита g Коэффициент распределения С.—х X j С2 Прошло КС1, % [c.65]

Другой областью применения гель-хроматографии в биохимии является отделение белков от низкомолекулярных мешающих анализу примесей, например аминокислот, сахаров, стероидов или реагентов, используемых для химической модификации белка. Методом гель-хроматографии чаще всего удаляют реагенты, предназначенные для введения в белок радиоактивной и флуоресцентной меток. Гель-хроматография позволяет также быстрее и эффективнее, чем диализ, осуществить обессолива-ние или смену буфера, требуемые в определенных схемах фракционирования, а также удаление кофакторов и ингибиторов, используемых при изучении кинетики ферментативных реакций. Кроме того, с помощью этого метода можно изучать связывание белков с низкомолекулярными соединениями, например лекарственными веществами, ионами металлов и красителями [10]. Коэффициент распределения Ка некоего стандартного белка с из- [c.106]

Предполагается, что сушествуют две формы взаимодействия белков с ионообменниками в процессе адсорбции. Одна из них называется необратимым , а другая обратимным связыванием. Как отметил Петерсон [39], термин необратимое связывание неудачен, так как он подразумевает, что адсорбированный белок уже не выходит из колонки связывание такого типа нельзя было бы использовать. Переходы от так называемой необратимой адсорбции к обратимой вследствие непрерывного изменения состава буфера должен быть постепенным. Вероятность того, что диссоциация молекулы белка происходит за 1 с при обратимой адсорбции, может составлять 99%, а при необратимой — 0,001 % (эта величина никогда не бывает равной нулю) однако положение границы между этими двумя типами адсорбции — поистине весьма спорный вопрос. Указанную вероятность можно рассчитать из кривых зависимости адсорбции от pH, показанных на рис. 4.4, но часто используют другой способ выражения распределения адсорбированного на ионообменнике и неадсорбированного белка. Серия недавно проведенных экспериментов, аналогичных тем, результаты которых изображены на рис. 4.4, показала возможность перехода адсорбированной формы белка (коэффициент распределения близок к 1) в неадсорбированную (коэффициент распределения равен 0) [c.103]

Определение дифракционной картины для разностной ртутной решетки представляется непростым делом. Нельзя обойтись простым вычитанием интенсивностей пятен комбинированной рентгенограммы белок—ртуть и рентгенограммы чистого белка. Складываются не интенсивности F а сами амплитудные коэффициенты. Последние определяются модулем и фазой. Это, как говорилось выше, комплексные числа они складываются как векторы на плоскости F j., = Г д к F — амплитудный коэффициент, создаваемый решеткой ртутного деривата,, — амплитудный коэффициент, создаваемый решеткой белка, f — амплитудный коэффициент, создаваемый решеткой атомов ртути. Так как фазы Г и нам неизвестны, то для решения задачи нахождения, не достает данных. Здесь выход из затруднения дает совместное решение векторных уравнений, полученных для нескольких различных соединений тяжелого атома с белком, в частности большую помощь оказывают двойные дериваты, содержащие два разных тяжелых атома в двух точках макромолекулы. Большое облегчение в структурном анализе оказывает наличие оси симметрии кристалла 2-го порядка. Если рассматривать плоскости решетки h, к, I как нормальные к оси симметрии, то в них распределение материи будет иметь центр симметрии. Вращение вокруг оси симметрии на угол 7г, 2г., Зтг и т. д. приводит к повторению всех структурных коэффициентов Отсюда следует, что соответствующие амплитудные коэффициенты дифракционной картины, могут иметь фазы только О и ir. Для этих коэффициентов, разница фаз сводится к разнице знаков амплитудных коэффициентов, так как os 0=1, osn = —1. [c.98]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология