Константа диссоциации комплекса в белках

Аналогичным образом ведут себя белки —типичные амфотерные соединения. Молекула белка — очень сложный органический комплекс (условно обозначенный ниже через R), в состав которого входят ионогенные группы — NH3OH, — СООН, являющиеся носителями основных и кислотных свойств. В зависимости от pH среды преобладает кислотная или основная диссоциация с образованием в первом случае ионов NH зОН — R — СОО" и NH 3 — R — СООН во втором. Эти ионы, оставаясь на поверхности белковых молекул, образуют внутреннюю обкладку двойного слоя ионов, сообщают им в кислой среде положительный заряд и в щелочной — отрицательный. При некоторой определенной кислотности раствора число ионизированных кислотных и основных групп одинаково это соответствует изоэлектрической точке ( 78). Молекулу белка в таком состоянии можно условно изобразить NH 3 — R — СОО. В целом она не несет заряда. Кислотная и основная константы диссоциации белков не равны, поэтому изоэлектрическая точка не соответствует нейтральному раствору. Так как обычно кислотная константа диссоциации выше, чем основная, то для уравнения диссоциации требуется некоторое количество кислоты, подавляющее избыточную ионизацию кислотных групп. Например, для желатины изоэлектрическая точка соответствует pH 4,7. [c.196]

ТОГО, если данный комплекс важен при катализе, то константы диссоциации, измеренные при изучении связывания, должны приближаться к константам, определенным при изучении начальной скорости реакции в целом, хотя различие в используемых концентрациях белка может вызвать в некоторых случаях трудности при интерпретации. Необходимые константы могут быть получены из изучения начальной скорости для иона металла Ка) и для лиганда, если он является ингибитором Кг). Однако константы диссоциации комплексов фермент — субстрат и фермент — продукт не так легко получить, пока не сделаны допущения относительно скоростьопределяющей стадии реакции и (или) порядка присоединения субстрата (или отщепления продукта). Следовательно, утверждение о кинетической важности таких комплексов, наиболее интересных с точки зрения изучения механизма действия металлоферментов, связано с большими сложностями. [c.450]

Теорию, изложенную в разд. 4.1, можно применить к адсорбционной хроматографии и сделать при этом некоторые интересные выводы. Поскольку константа диссоциации комплекса адсорбента с белком (Кр) должна быть близка к константе диссоциации комплекса белка с лигандом или каки.м-то образом связана с ней, можно легко рассчитать величину коэффициента распределения. Один из недостатков аффинных адсорбентов заключается в том, что, хотя степень модификации может быть достаточно высокой (1—10 мкмоль-см ), только незначительная часть иммобилизованного лиганда оказывается ориентированной должным образом даже при наличии удлиняющего мостика обычно только 1—2% общего числа центров связывают белок. Хорошей считается емкость в 1—2 мг-см что для белка с мол. массой 100000 соответствует величине /п/ от 0,01 до 0,02 мМ. Если допустить, что равно 0,02, а рг — 0,01 в уравнении (4.5), то можно вычислить величины а для различных значений Кр, данных в табл. 4.7. [c.153]

В этом разделе описываются этапы аффинной элюции. Образец уравновешивают в соответствующем буфере и наносят на ионообменную колонку, заполненную, например, КМ-целлюлозой. Нужный фермент полностью адсорбируется колонку с нанесенным образцом промывают небольшим количеством исходного буфера. Если эффект аффинной элюции значителен, то pH исходного буфера может быть тем же, что и pH буфера для элюции. Однако чаще pH в колонке повышают до соответствующего значения, при ротором нужный фермент только начинает двигаться, например когда а = 0,95—0,90 (рис. 4,23 и 4.24). Затем на колонку наносят раствор лиганда, концентрация которого должна превышать по величине константу диссоциации-комплекса фермент — лиганд, и если фермента много, то общее количество лиганда, выраженное в молях, должно быть больше количества (в молях) центров связывания. С другой стороны,, концентрация лиганда не должна существенно изменять ионную-силу буфера. Максимальное количество используемого лиганда часто определяется соображениями стоимости, но если константа диссоциации его комплекса с белком достаточно высока и требуемые концентрации лиганда приводят к повышению ион-ной силы буфера, то может потребоваться введение стадии вымывания подставным лигандом . В этом случае на этапе, предшествующем элюции, используют соединение, имеющее.л от же заряд, что -И лиганд, но не связывающееся с ферментом. Все-белки, которые выходят из колонки при повышении ионной си- [c.139]

Если константа диссоциации комплекса достаточно мала, можно определить число эквивалентов лиганда, которое вызывает максимальное изменение в спектре это максимальное изменение имеет место в том случае, когда заняты все центры связывания. Например, к раствору белка, концентрация которого по крайней мере в 10 раз больше константы диссоциации, добавляются возрастающие количества субстрата. Для установления стехиометрии строят график, представленный па рис. 6.8. [c.207]

Исследование кинетики диссоциации комплексов В1 и Вг позволяет из выражений (12.30) — (12.31) определить кинетические константы диссоциации. Помимо этого изучение кинетики диссоциации комплексов В] и Вг дает возможности сделать вывод о принадлежности исследуемых комплексов к комплексам белка с одним лигандом (кинетическая кривая диссоциации комплекса 61 описывается суммой двух экспоненциальных членов (уравнение (12.30))) или двумя лигандами (кинетическая кривая диссоциации комплекса описывается одной экспонентой (уравнение (12.26))). [c.306]

Каждое равновесие характеризуется соответствующими константами равновесия Къ Ks, Kis и Ksi- Образование комплекса EIS связано с присоединением ингибитора и субстрата к разным частям молекулы белка, поэтому двойные комплексы EIS и ESI одинаковы. Константы диссоциации Kis и Ksi численно различны, так как при диссоциации образуются разные продукты EI и S в первом случае и ES и I во втором. Коэффициент характеризует изменение константы скорости распада комплекса ES в присутствии ингибитора. [c.515]

Минимальный фермент сам по себе имеет сродство к ДНК в основе этого сродства лежит электростатическое взаимодействие между положительно заряженным белком и отрицательно заряженной нуклеиновой кислотой. Возможно, что способность к связыванию любой ДНК независимо от ее нуклеотидной последовательности-характерная особенность всех белков, имеющих специфические участки узнавания на ДНК (гл. 14). Случайная последовательность ДНК, которая связывается РНК-полимеразой, называется слабым участком связывания, а комплекс ДНК фермент закрытым, поскольку ДНК в этом комплексе находится в двухцепочечной форме. Константа связывания при формировании закрытого комплекса в участке слабого связывания составляет 2-10 М а полупериод диссоциации комплекса на фермент и ДНК-около 60 мин. [c.133]

Влияние соли на константу диссоциации фермент-субстратного комплекса, по крайней мере, в случае химотрипсина, можно объяснить так называемым высаливающим эффектом, т.е., влиянием на активность субстрата (7g) при постоянстве активностей фермента (7 ,) и фермент-субстратного комплекса (7j.g) [2416]. Это справедливо при относительно больших концентрациях соли. При переходе от низких ее концентраций к высоким (больше 0,5 М) происходит, по-видимому, изменение конформации фермента [2416,2417], что проявляется в параллельном с изменением активности изменении поглощения белка при 282 нм [2416]. [c.224]

Существует, по-видимому, и еще одна проблема, связанная с репрессором двойного размера. Величина константы диссоциации Kqp = 10 ° М означает, что, однажды связавшись с оператором, белок остается на нем практически до бесконечности. Никакой механизм индукции или любой другой клеточный процесс, для которого необходимо, чтобы комплекс репрессора с оператором спонтанно диссоциировал, не сработает в течение сколько-нибудь разумного промежутка времени. Поскольку энергия связывания так велика, для удаления репрессора с оператора необходима радикальная перестройка конформации белка. [c.138]

Несколько неожиданным результатом является то, что для хорошей адсорбции (а>0,9) величина Кр должна быть ниже 0,001 мМ или 10 М, т. е. меньше, чем обычные константы диссоциации для комплексов белок—лиганд. Если учесть, что специфическое взаимодействие белка с иммобилизованным в колонке лигандом, вероятно, слабее, чем его взаимодействие со свободным лигандом, то естественно возникает вопрос, каким же образом осуществляется аффинная адсорбционная хроматография. [c.153]

Принцип аффинного электрофореза может быть использован не только для определения /констант диссоциации комплексов белков со связанными лигандами, но также и для определения констант диссоциации комплексов со свободными лигандами. Подвижность белковой зоны при электрофорезе на аффинном носителе иовышается в зависимости от концентрации свободного специфического лиганда. Таким образом были определены константы диссоциации комплексов лектин —сахар [64]. [c.168]

В качестве аффинных лигандов можно использовать любые соединения, прочно, специфично и обратимо связывающиеся с выделяемым веществом. Химическое строение аффинных лигандов может быть самым различным. Поскольку в настоящее время метод аффинной хроматографии применяется главным образом для выделения ферментов и их ингибиторов [89J, мы рассмотрим примеры, взятые из этой области. Как уже упоминалось, при выделении фермента аффинными лигандам1И могут служить его ингибитор, аналогичный субстрату, а также эффектор, кофактор и в отдельных случаях даже субстрат. Это справедливо и для фермента, требующего длл реакции два субстрата, но способного достаточно сильно связываться только с одним из них. Субстрат также можно использовать для адсорбции фермента в таких условиях, когда фермент связывается, но сам не способен катализировать реакцию (например, в отсутствие ионов металлов, необходимых для реакции), а также когда константа Михаэлиса зависит от pH или температуры. Аффинный адсорбент для выделения белков обычно трудно получить из аффинного лиганда, если константа диссоциации его комплекса с белком превышает (0,5—1,0)-Ю [16]. Однако Стире и сотр. [84] показали, что очень эффективный адсорбент для р-галактозидазы можно получить даже из такого относительно слабого ингибитора, как н-аминофенил-р-о-тиогалактопирано-зид (/i , 5-10 ). Этого удается достигнуть, повышая концентрацию нерастворимого аффинного лиганда и увеличивая расстояние между аффинным лигандом и матрицей носителя, что приводит к максимальной доступности аффинного лиганда, для белка в растворе. [c.9]

В этой связи особый интерес представляет работа Фрица, Траучолда и Верле [69] по исследованию различных ингибиторов протеаз. Сначала на сефадексе Q-50 определяли молекулярный вес нескольких новых ингибиторов. При хроматографировании на сефадексе G-75 комплекс (1 1) трипсина (мол. вес 24 000) и его ингибитора (мол. вес 6500) элюируется в объеме, соответствующем молекулярному весу 26 ООО (вместо предполагаемого 30 500). Авторы объясняют это тем, что комплекс имеет, вероятно, очень компактную структуру (полагая при этом, что ингибитор частично внедряется в молекулу трипсина). Не связанный ингибитор отделяют от смеси комплекса и протеазы на колонке с сефадексом G-50. Авторы определили отдельные компоненты и таким путем нашли константу диссоциации комплекса в различных условиях. Размывания зон, вызываемого сопутствующей диссоциацией, в данном случае не наблюдалось. Аналогичным образом Ауричио [106] доказал образование комплекса фермент — субстрат. Например, трипсин в присутствии казеина элюируется на G-100 гораздо раньше ( мол. вес 100 000), чем в отсутствие субстрата. В то же время казеин не влияет на движение по колонке других белков. [c.178]

Взаимодействие антител с их антигенами сравнимо по специфичности со связыванием субстратов с ферментами. Константы диссоциации комплексов, как правило, находятся в инт ервале 10 5—10 8 моль/л [39]. Для выделения антител используются антигены или гаптены (химически модифицированные группы, выступающие в роли иммуноагентов после их присоединения к белкам или синтетическим полипептидам), против которых эти антитела. получены. В табл. 11.1 даны многочисленные примеры. [c.114]

Подобно аффинной хроматографии, аффинный электрофорез в геле можно применять для определения констант диссоциации комплексов белок — лиганд. Принцип метода заключается в изучении зависимости подвижности данного белка от концентрации связанного лиганда в геле. Этот лиганд может быть либо ковалентно связан с гелем, либо только включен в гель (последнее обусловлено высокомолекулярными свойствами лиганда). Впервые такое использование электрофореза описано Такео и Накамурой [50], (хотя в этой работе еще не введен термин аффинный электрофорез ) константы диссоциации комплексов фосфорилаза— полисахарид определены с помощью электрофореза в полиакриламидном геле, содержащем различные концентрации ковалентно связанного полисахарида. Бег-Хансен [9] применил электрофорез на сефарозе с ковалентно связанным конканавалином А для определения констант диссоциации комплексов конканавалина А с сывороточными гликоиротеинами. [c.168]

Взаимодействия моноанионов с ферментами и другими белками часто происходят с намного большими энергиями связывания [4—8]. Ингибирующая способность анионов по отношению к ацетоацетатдекарбоксилазе убывает в следующем ряду ЗСМ >СЮ >1 > N0 >-СЮ > Вг > С1 > ВгОз > >Р 10з (ионы НЗОд и С1дСС00 , по-видимому, оказывают специфическое влияние на этот фермент и поэтому исключены из списка). Значения констант диссоциации комплексов с этими попало лен ат в пределах 1,1 10 ... 0,1 мольЛл, что соответствует свободным энергиям связывания от —1 до —5 [c.275]

Водородные связи играют важнейшую роль в поддержании определенной вторичной структуры не только белков, но и нуклеиновых кислот. Одновременное образование большого числа слабых, в частности, водородных связей в макромолекулах лежит в основе явления комп-лементарности, т. е. строго структурного соответствия и специфичности связывания больших участков молекул. Например, Г—Ц-пары обладают энергией связи всего лишь 5 кДж/моль, и константа диссоциации комплекса Г —Ц, рассчитанная по уравнению Больцмана (уравнение 1.10), равна примерно 1/7. Иначе говоря, на каждые семь пар оснований в 1 М растворе приходится одна пара свободных оснований. Для динуклеотидов Цг и Гг общая энергия связи цепей в комплексе увеличится вдвое, а константа диссоциации комплекса Цг—Гг, согласно уравнению Больцмана, станет равной (1/7) = 1/49. Таким образом, концентрация спаренной формы будет превышать концентрацию свободных динуклеотидов в 49 раз. [c.72]

Пептидным аптамерам присущи некоторые черты антител пептидная часть гибридного белка является аналогом вариабельного участка полипептидных цепей иммуноглобулинов, кроме того, похожей является и функциональная нагрузка на эти два класса макромолекул - и те и другие обладают свойствами высокоспецифических белков-рецепторов с константами диссоциации комплексов с лигандами (K ) в пределах Ю- -Ю- М. Пептидные [c.433]

Против уравнений, выведенных Данном и Чейкеном [6], Николь и др. [12] высказали возражения. Данн и Чейкен [7] ограничились случаями, когда [Е]//Сь мало, т. е. используется очень низкая концентрация фермента. Другое ограничение касается взаимодействий со слишком низкими Кь- Например, если константа связывания равна 10 моль/л, то рассчитанная константа скорости диссоциации комплекса ЕЬ должна быть очень мала ( 0,042 С ) [7]. Следовательно, элюирование белка должно зависеть от кинетических факторов и не может быть проведено за реальное время опыта. Добавление растворимого лиганда к раствору элюента не должно оказывать влияния на элюирование белка, поскольку диссоциация — мономолекулярный процесс. Такими кинетическими эффектами объясняются наблюдаемые иногда неудачи при элюировании некоторых ферментов с аффинных сорбентов буферными растворами, содержащими сильные ингибиторы. В некоторых случаях белковый ник настолько уширяется, что его нельзя обнаружить. Метод пригоден главным образом для случаев, когда доступны сорбенты, содержащие лиганды со средней силой связывания. В таких случаях система полностью обратима в пределах времени проведения хроматографического опыта. [c.49]

Возможность получения количественных данных по связыванию для взаимодействия белков с иммобилизованным пептидом впервые исследована Гавронским и Уолдом [8]. Определена константа диссоциации, равная (2,5 1,0) 10 моль/л, путем прямого титрования 5-белка рибонуклеазы, связанного с 5-пептидом, иммобилизованным на агарозе. Хорошие кривые титрования получены при концентрации 8-белка 10 —моль/л. Когда концентрация связанного белка равна концентрации белок-пептидного комплекса, взаимодействие может быть описано соотношением [c.58]

Ограниченные запасы витаминов и гормонов в- животных привели к развитию механизмов адсорбции, транспорта и консервации этих веществ в следовых количествах. В таких процессах важную роль играют специфические транспортные или связывающие белки, предотвращающие быстрое выведение витаминов и гормонов с мочой, которое происходило бы, если витамины и гормоны не были бы связаны в плазме в соответствующих комплексах. Связывающие белки присутствуют в очень низких концентрациях. Например, белки, прочно связывающие витамин В12, траноко баламины I и И, находятся в плазме крови человека в концентрациях соответственно 80 и 20 мг на 1000 л. Однако они обычно имеют высокое сродство к комплементарным витаминам и гормонам. Константы диссоциации этих комплексов находятся в интервале от 10 до 10 моль/л [35]. Из-за низких концентраций эти белки нельзя выделить классическими методами очистки наличие специфических взаимодействий с высоким сродством позволяет использовать аффинную хроматографию, которая допускает работу с большими объемами исходного материала. Как и для взаимодействий антитело — антиген, трудности заключаются в последующем выделении белка из комплекса с аффинными сорбентами. [c.124]

Трансферрин, связанный с Ре + или Сг +, обладает большим сродством к рецепторам ретикулоцитов, чем апотрансферрин [94, 95]. Этот эффект частично зависит от природы закомплексованного иона металла и, по-видимому, обусловлен более высокой константой скорости реакции диссоциации комплекса ретикулоцит — трансферрин в том случае, когда белок не содержит металла. Таким образом, молекулы трансферрина, содержащие Сг + или Ре +, имеют более продолжительное время жизни на поверхности ретикулоцита, при этом среднее время жизни молекулы белка на поверхности клетки, вероятно, составляет 5—10 мин [4]. Трансферрины, содержащие марганец, медь или цинк, ведут себя подобно апотрансферрину [93]. Яндл и Катц, [96] и Корнфельд [94] рассчитали, что на поверхности ретикулоцита имеется около 50 ООО рецепторных центров, так что в условиях насыщения около 2% площади поверхности клетки занято трансферрином. Бейкер и Морган [97] подсчитали, что с ретикулоцитом может быть связано 500 ООО молекул белка. [c.355]

Атом ртути ацетоксимеркурсульфаниламида находится на значительно большем расстоянии от цинка, т. е. бензольная часть сульфамида лежит в щели, ведущей к иону цинка [22]. Низкие константы диссоциации сульфамидных комплексов карбоангидразы в растворах (10- —10 М) [111—114] свидетельствуют о том, что кроме координационных имеются и другие типы связей между белком и циклической частью молекулы сульфамида. Изменения в спектрах поглощения и флуоресценции связанных сульфамидов свидетельствуют о гидрофобном характере связывающей полости [30, 103, 105]. Однако основание этой полости, расположенное вокруг атома цинка, может быть достаточно гидрофильным. [c.610]

Рис. 6.8. Спектрофотометрическое титрование метгемоглобина (Ме1НЬ) инози-толгексафосфатом (1НР). При 512 и 649 нм поглощение комплекса увеличивается, а при 640, 618, 588 и 559 нм остается постоянным. Концентрация метгемоглобина в расчете на тетрамер (20 мкМ) примерно в 14 раз превышает константу диссоциации (1,4 мкМ) этого комплекса. Точка пересечения касательной к начальному участку кривой с плато дает стехиометрию связывания (в данном случае 1). Заметим, что этот простой метод нельзя использовать, если начальная концентрация белка не очень сильно превышает константу диссоциации, поскольку предполагается, что весь лигаид связы вается белком сразу после добавления.

Кальций — единственный универсальный вторичный мессенджер клеток животных и растений. Другие вторичные мессенджеры— цАМФ, инозиттрисфосфат и диацилглицерин — функционируют, по всей видимости, преимущественно в клетках животных. Наиболее распространенным рецептором для Са + в большинстве клеток является низкомолекулярный белок кальмодулин Км). Этот белок не претерпел существенных изменений в ходе эволюции, поэтому физико-химические свойства Км, выделенного из разных источников, практически идентичны. Кальмодулин содержит четыре Са-связывающих участка с константами диссоциации Кс1) от 4 до 20 мкМ. В результате связывания Са + происходит изменение конформации белка (см. разд. 2.2) и его активация. После этого комплекс Км— Са + связывается с белками-мишенями, в том числе мембранными, стимулируя (аденилатциклаза, (2а-АТФазы плазматической мембраны, киназа фосфорилазы, фосфолипаза Аг, цАМФ-фосфодиэстераза) или ингибируя (15-оксипростагландиндегнд-рогеназа, гликогенсинтетаза) их активность. [c.10]

Использование поверхности живых клеток в качестве дисплея для белков, подвергаемых отбору в ходе направленной эволюции, обладает рядом преимуществ перед применением для тех же целей классического фагового дисплея [109,110]. Прежде всего, клеточный дисплей дает возможность анализировать белки значительно большего размера. Введение флуоресцентной метки в лиганды к рецепторам, экспрессирующимся на поверхности клеток, позволяет эффективно использовать проточную цитометрию для отбора соответствующих рецепторов. С помощью современных цитометров можно анализировать и сортировать до 50 ООО клеток/сек и, следовательно, проводить быстрый скрининг больших комбинаторных клонотек белков и пептидов. При этом, В отличие от фагового дисплея, на поверхности клеток может экспрессироваться множество (до 10 ) молекул анализируемого белка, что понижает отношение интенсивности сигнала к шуму и Дает возможность более эффективно исключать ложноположительные результаты. Такие параметры систем на основе клеточного дисплея позволяют ш situ количественно определять константы связывания и скорости диссоциации комплексов, формирующихся на поверхности клеток. [c.349]

Три экспериментально обоснованных факта служат основной предпосылкой нашей гипотезы. Во-первых, в присутствии второго субстрата окислительного фосфорилирования — неорганического фосфата — величина константы диссоциации медленного Fi-АДФ-комплекса соизмерима с величиной Кт для АДф в процессе окислительного фосфорилирования. Во-вторых, преинкубация субмитохондриальных частиц с АДФ блокирует АТФ-гидролазную реакцию и не влияет на кинетику окислительного фосфорилирования. В-третьих, АТФ-зависимая активация АДФ-блокированной АТФазы (последовательность реакций 5—7 малого цикла на схеме рис. 1) сама по себе должна представлять АТФазную реакцию с числом оборотов 2 мин-1 (см. обсуждение механизма АТФ-зависимой активации выше). Такое число оборотов этой АТФазной реакции в пересчете на величины активности составляет 0,8 нмоль/мин на 1 мг белка (содержание Fi, определяемое по титру олигомицина в наших препаратах, составляет 0,4 нмоль/мин на 1 мг белка), или 0,01% от скорости АТФазной реакции, протекающей в соответствии с последовательностью 1—3 большого цикла схемы рис. 1. Можно представить, что обращение малого цикла и является последовательностью реакций, происходящих при окислительном фосфорилировании, где обнаруженный нами медленный комплекс Е-АДФ служит фермент-субстратным комплексом нормального каталитического цикла Сказанное может быть [c.46]

Белки—ингибиторы ферментов. Вещества белковой природы составляют самую многочисленную группу ингибиторов ферментов, причем наиболее изучены из ее состава белки, ингибирующие активность протеаз. Белковые ингибиторы образуют с протеолитическими ферментами стойкие при физиологических условиях комплексы, в составе которых фермент полностью или частично теряет свою активность. Так как константы диссоциации этих комплексов лежат в пределах 10 —10 моль, они действительно отличаются высокой прочностью, а ингибиторы, входяпще в их состав,— большой мощностью действия. [c.93]

Оказалось, что из клеток грамотрицательных бактерий, подвергнутых на холоду осмотическому шоку (быстрому переносу из гипертонической среды в гипотоническую в присутствии ЭДТА), освобождается ряд периплазматических ферментов и наряду с ними белки, способные активно связывать некоторые субстраты, образуя с ними прочные комплексы с константами диссоциации, близкими к величинам Кт, для соответствующих транспортных систем. Одновременно с освобождением периплазматических белков нарушается транспорт этих субстратов в клетки бактерий, а добавление шоковой жидкости или очищенных связывающих белков в некоторых случаях восстанавливает нормальный транспортный процесс. Синтез связывающих белков индуцируется параллельно с индукцией транспортной системы, а у мутантов, дефектных по транспорту, соответствующие связываюпдие белки отсутствуют. Таким образом, участие связывающих белков в транспорте не вызывает сомнений. [c.55]

С помошью этого метода были измерены константы скорости реакций с ОН, с анионами, присоединения Н+ и ОН к различным основаниям и кислотам, ферментативных реакций, реакций белков, антител, образования и диссоциации ряда ион-молекулярных и катион-анионных комплексов и др. [c.64]

Существование этих четырех совершенно различных групп белков дает прекрасный пример того, как природа решает некоторые проблемы координационной химии (в данном случае обратимой координации кислорода) не одним, а несколькими способами. Даже механизм, связывающий константу равновесия со степенью оксигенации всего белка, был создан природой не только для гемоглобина, но и для гемоцианина. Однако полученные недавно функционально активные кобальтсодержащие аналоги гемоглобина и миоглобина показывают, что природа перепробовала не все возможные решения этой проблемы даже в пределах комплексов из тех металлов, аминокислот и других лигандов, которые имеются в ее распоряжении. Кобальтовые аналоги характеризуются меньшим сродством к кислороду, чем нативные белки [207], но pH и дифосфоглицерат влияют на них примерно так же, как и в случае гелюглобинов. Гем-гемовые или гомотропные взаимодействия в кобальтовых аналогах выражены слабее, чем в исходных белках [108]. Кобальтовые аналоги получены путем диссоциации гемоглобина или миоглобина на белок и железопорфирин (разд. 7.4) и последующей рекомбинацией белка с кобальтовым аналогом железопорфирина. [c.145]

Обратим внимание на то, что в уравнениях (12.3) — (12.6) ряд членов содержит коэффициент 2. Это связано с тем, что белок О имеет два центра связывания и, следовательно, концентрация центров, по которым может идти процесс комплексообразования в свободном белке, вдвое больше самой концентрации белка. То же самое можно отнести и к комплексу Вг, только в этом случае концентрация связанного лиганда вдвое выще концентрации самого комплекса Вг. При этом заметим, что кинетические константы и к-2 относятся к ассоциации лиганда с одним центром связывания или к диссоциации одного связанного с лигандом центра ком-плексообразованяя. Понятно, что в этом случае вероятность связывания первой молекулы лиганда с каким-либо из двух центров связывания или диссоциации одной молекулы из двух связанных молекул лигандов вдвое выше,-что и задается соответствующим коэффициентом 2. Иногда этот коэффициент включают соответственно, в константы к и А г. [c.301]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология