Гемоцитометр

Подсчет жизнеспособных клеток дрожжей можно проводить с помощью гемоцитометра и метиленового синего. Этот метод более детально описан в следующем разделе. [c.54]

Отберите часть окрашенной суспензии пастеровской пипеткой и заполните счетную камеру гемоцитометра, используя капиллярное всасывание (разд. 8.2.2). Старайтесь не переполнять каналы камер. Сосчитайте клетки под объективом хЮ. [c.56]

Счет клеток проводите в четырех наборах из шестнадцати маленьких квадратов (в каждом углу центральной заштрихованной области разд. 8.2.1). Считайте только неокрашенные клетки. Разделив полученное число на 4, получите среднее число клеток на 1 мм . Поскольку высота камеры составляет 0,1 мм, то пересчетный коэффициент для гемоцитометра равен 10 . Предположим, что полученное значение составляет 20 клеток на 1 мм2. Тогда 20-10 равно числу клеток в 1 мл окрашенной трипсиновым синим суспензии, а 2-20-10 равно числу клеток в 1 мл исходной суспензии, т. е. концентрация живых клеток в исходной суспензии составляет 4-10 клеток в 1 мл. [c.57]

Известны два метода оценки количества клеток в суспензии. С помощью гемоцитометра можно определить число клеток в заданном объеме путем прямого микроскопического наблюдения. При использовании электронного счетчика клеток, например счетчика Коултера, заданный объем клеточной суспензии протекает через специальную диафрагму, обеспечивающую электронную регистрацию клеток. [c.93]

Гемоцитометр (конструкции Фукса — Розенталя). [c.205]

Подсчитывают число выживших протопластов ) с помощью гемоцитометра ). [c.206]

Методы определения общего количества клеток (путем подсчета в гемоцитометре целых клеток или окрашенных ядер) и общей клеточной массы (путем определения сухого веса или количества белка) нетрудны. Сложнее получить правильное представление о жизнеспособности клеток, поскольку принятые методы либо повреждают клетки, либо используют специфические, но не обязательно типичные параметры физиологии клетки (см. гл. 8). Дополнительные трудности создаются тем, что во многих системах культивирования нельзя осуществить отбор проб (большинство культур клеток, зависящих от субстрата) или визуальное наблюдение, так что приходится прибегать к непрямым измерениям. [c.57]

Убедившись в том, что получена гомогенная суспензия, с помощью гемоцитометра определяют концентрацию клеток. Для этого подсчитывают клетки в четырех больших угловых квадратах (каждый из которых состоит из 16 маленьких квадратов). Число клеток в 1 мл подсчитывают, умножая среднее число клеток в одном большом квадрате на 10 . Обычно результаты получаются наиболее точными, если в одном большом квадрате содержится 100—200 клеток. С таким расчетом и следует готовить разведение клеток. [c.74]

С помощью гемоцитометра определяют концентрацию клеток и доводят ее культуральной средой до 2-10 кл/мл. [c.78]

Пытаясь стандартизировать микробиологические препараты, приготовленные в лаборатории или собранные в поле, для использования в полевых опытах, дозировки часто устанавливали, исходя из инфекционного содержимого определенного числа больных насекомых на единицу опытной площади. Этот метод дает грубое представление о количестве распределяемого инфекционного материала и особенно пригоден для первоначального испытания чрезвычайно патогенных микроорганизмов. Однако лучший метод, который широко применялся при оценке концентраций, связан с использованием гемоцитометра для определения приблизительного числа устойчйвых форм (спор спорообразующих микроорганизмов и полиэдров вирусов) возбудителя болезней насекомых, которые содержатся в единице веса или объема. О подобном методе оценки концентрации капсул вируса гранулеза в инфекционном материале сообщали Мартиньони и Ауэр [1293], которые проводили точные определения с помощью специальной счетной камеры и фазового микроскопа. [c.464]

Прецизионное шлифованное покровное стекло помещают на предметное стекло гемоцитометра (рис. 8.1) так, чтобы покрыть заштрихованные области, и слегка прижимают до появления колец Ньютона. Это приводит к образованию камеры с фикси-рованым объемом, поскольку края предметного стекла подняты над заштрихованной поверхностью ровно на 0,1 мм. Каждая заштрихованная область состоит из 9 больших квадратов размером 1X1, т. е. объем, ограниченный каждым большим квадратом, оказывается равным 1 мм 1 мм-0,1 мм=0,1 мм . 4 квадрата в углах разделены на 16 меньших квадратов центральный квадрат разделен на 25 меньших квадратов и остальные квадраты на 20 меньших квадратов, но для подсчета числа клеток это несущественно. [c.93]

Прямое наблюдение клеток при использовании гемоцитометра позволяет оценивать качество клеточной суспензии, т. е. выявлять наличие клеточных комков и разрушенных клеток. При разведении клеточной суспензии растворами витальных красителей, например трипаиового синего до конечной концентрации [c.97]

Ресуспендируют протопласты в 5 мл (или другом подходящем объеме) среды М5Р1 9М и подсчитывают число жизнеспособных протопластов с помощью гемоцитометра ). Мезо-фильные протопласты листьев табака показаны на рис. 2.14, Л. Обратите внимание на фенотип жизнеспособных протопластов (рис. 2.14, Бу [c.147]

Ресуспендируют осадок в 10 мл MSP1 9М и измеряют количество протопластов с помощью гемоцитометра. [c.232]

Весьма приблизительная оценка жизнеспособности клеток в суспензии может быть получена с помош.ью теста на исключение красителя, ВТ суспензию клеток добавляется водный раствор красителя, и на гемоцитометре (камера Горяева) подсчитывается относительное количество неокрашиваемых клеток. Для этой цели наиболее часто применяются трипановый синий или эритрозин в. Известно, что первый краситель обладает высоким сродством к растворенным белкам (например, к белкам сыворотки). Это может снизить точность оценки, если концентрация сыворотки в суспензии превышает 1%. Раствор эритрози-на В прозрачен, что позволяет легко обнаружить рост микробов в концентрированном растворе или образование осадка. При использовании концентрированного раствора трипанового синего это оказывается не так просто. Рекомендуется следуюш.ая процедура оценки жизнеспособности клеток по исключению красителя. [c.116]

Рис. 25-7. Подсчет лейкоцитов в крови. А. Нулевой момент времени. Б. Через 4 мин. Преломляющие свет, окруженные ореолом клетки можно подсчитывать как лейкоциты, используя гемоцитометр Нойбауэра. В. Эритроциты.

Для оценки состояния клеток из взвеси систематически отбирали пробы, в которых производилось определение pH, подсчет клеток в гемоцитометре с окраской растворами кристалвиолета и с витальным окрашиванием трипановой синью, высев клеток в пробирки и матрасы для получения стационарных однослойных культур с последующим цитологическим анализом окрашенных препаратов. [c.94]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология