Белки солюбилизация растворение

Влияние ионной силы на поведение белков обусловлено взаимодействием солей, воды и белков. Как правило, соли при относительно малой концентрации оказывают на белки действие, способствующее их растворению вследствие уменьшения электростатических взаимодействий между белками. Наоборот, при более высокой концентрации это явление имеет инверсный характер (высаливание), т. е. белки могут осаждаться при уменьшении количества воды, имеющейся для солюбилизации (перевода в растворимое состояние). [c.416]

Как и при интерпретации влияния солей на водные растворы, основное внимание следует обращать на изменение свободной энергии системы при добавлении неполярных веществ к водным растворам интерпретация этого явления непосредственно с точки зрения структурной модели может оказаться ошибочной. Так, структурная модель дает приемлемое объяснение солюбилизации гидрофобных соединений под действием спиртов алкилзамещенных аминов и мочевин. Если одно растворенное вещество увеличивает структурированность раствора, можно было бы ожидать, что оно должно облегчать введение молекул другого подобного вещества. С другой стороны, структурирующая способность вещества совершенно необязательна для того, чтобы оно было в состоянии солюбилизировать гидрофобные соединения в воде. Уже отмечалось, что один из возможных механизмов денатурации белков и нуклеиновых кислот под действием мочевины заключается в стабилизации гидрофобных боковых цепей аминокислот и оснований нуклеиновых кислот при увеличении их контакта с растворителем, что проявляется в увеличении растворимости и уменьшении коэффициента активности этих групп в присутствии мочевины [31, 32, 35]. Спирты, ацетон и подобные им вещества разрушают гидрофобные связи и способствуют денатурации аналогичным образом. Однако мочевина, вероятно, не обладает структурирующим действием, по крайней мере в том смысле, как это понимается для неполярных молекул мочевина очень слабо влияет на большинство свойств воды и либо практически не изменяет структуру воды, либо, из данных по поглощению ультразвука, несколько ее разрушает [85]. Данные по энтальпии и теплоемкости растворов веществ с гидрофобными группами, а также исследования спектра ультразвуковой релаксации полиэтиленгликоля в воде и растворах мочевины указывают на то, что энергетически более благоприятное взаимодействие гидрофобных групп с мочевиной, чем с водой, связано с уменьшением структурированности воды вокруг гидрофобных групп [85, 86]. Таким образом, разрушение гидрофобных связей под действием мочевины или спирта нельзя объяснить одним и тем же механизмом с точки зрения структуры растворителя, хотя по свободной энергии эффекты соединений этих двух типов одинаковы. Возможно, что мочевина создает более благоприятное окружение для гидрофобных групп, находящихся в пустотах струк- [c.328]

Когда подобраны подходящие солюбилизирующие агенты, исследуют условия солюбилизации. На конечный выход активного белка после его ренатурации могут влиять многие параметры реакции растворения [c.118]

Простейший способ солюбилизации — обработка препарата горячим концентрированным раствором щелочи, например 5 М КОН при 70° в течение 1—4 ч. После охлаждения и нейтрализации раствор вносят в толуол-тритоновый сцинтиллятор. Примесь радиоактивного К в КОН обычно не превышает 0,012% — это лишь незначительно увеличивает уровень фона. NaOH для этой цели использовать не рекомендуется, так как образующиеся радиоактивные натриевые соли гораздо хуже растворяются в сцинтилляторе, чем калиевые. Использование для гидролиза концентрированного аммиака дает очень хорошие результаты, но имеется риск образования летучих радиоактивных продуктов и соответствующих потерь радиоактивности с ними. Метод горячего щелочного гидролиза привлекает своей простотой и дешевизной, но растворение не всегда оказывается полным. Белки, нуклеиновые кислоты и полисахариды можно попробовать растворить в [c.210]

После солюбилизации эукариотических полипептидов осуществляется их ренатурация в буфере, не содержащем денатурирующих агентов или других солюбилизаторов. Чтобы достичь этого, можно использовать диализ или разбавление. Путем разбавления можно контролировать одновременно изменения концентрации растворителя и гетерологичного полипептида. Что касается растворения, то здесь имеется ряд параметров, влияющих на выход получаемого активного белка [c.119]

Из органических соединений, помимо давно применяемых водных растворов глицерина, широко используют (особенно для солюбилизации) слабые растворы сахарозы. На растворимость белков при экстракции большое влияние оказывает pH среды, поэтому в белковой химии применяют фосфатные, цитратные, боратные буферные смеси со значениями pH от кислых до слабощелочных, которые способствуют как растворению, так и стабилизации белков. Особенно широкое распространение получили трис-буферные системы, представляющие собой смеси 0,2 М раствора трис-(оксиметил)-аминометана (НОСН,)зСКН, (сокращенно обозначают трис ) с 0,1 М раствором хлороводородной кислоты в разных соотношениях. Для выделения белков сыворотки крови используют способы их осаждения этанолом (см. метод Кона), ацетоном, бутанолом и 1гх комбинации. Почти все органические растворители разрывают белок-липидные связи, способствуя лучшей экстракции белков. [c.24]

Солюбилизация ферментов в обращенные мицеллы поверхностно-активных веществ в органических растворителях. К 2 мл 0,1 М раствора Аэрозоля ОТ в октане добавляют 5—150 мкл 10—50 мМ водного буферного раствора, pH 3—11 (концентрация не должна превышать 50 мМ, при наличии высокой ионной силы следует использовать буферный раствор с более низкой концентрацией). Смесь интенсивно встряхивают до образования оптически прозрачного раствора. Для ускорения процесса образования прозрачного раствора, содержащего большие количества буферного раствора, добавляют буферный раствор порциями по 2—3% (40—60 мкл). Далее добавляют 5—20 мкл водного раствора фермента и опять интенсивно встряхивают до образования оптически прозрачного раствора. Фермент можно вносить и в виде навески сухого обессоленного порошка, однако время растворения фермента в этом случае в системе обращенных мицелл с низким содержанием воды (меньше 2%) существенно увеличивается (от нескольких десятков секунд при внесении водного раствора белка до десятков минут и даже часов при внесении сухого белка). Для солюбилизации белка и определения активности включенного фермента наиболее широко используются растворы Аэрозоля ОТ в октане в концентрациях от 30 до 300 мМ. [c.151]

Технологические процессы можно сгруппировать по способу растворения белков и методу регенерации изолята. В самом деле, поскольку чаще всего используют солюбилизацию в щелочной среде, некоторые авторы предложили переводить белки в растворимое состояние с помощью солей либо посредством нескольких последовательных приемов солюбилизации в случае природных растворимых белков воздействуют лишь условиями экстрагирования. Кроме того, регенерацию изолята можно осуществлять с применением техники изоэлектрического и термического осаждения, высаливания либо ультрафильтрации или связыванием на смолах. [c.459]

Пшеница. Пшеничная мука ввиду низкого содержания белков (10—15 %) и их специфических свойств малопригодна для изготовления изолята посредством солюбилизации. Действительно, в этом случае небольшое количество изолята приходится высушивать вместе с большим количеством попутного продукта. Кроме того, для перевода в растворимое состояние большой части белков пшеницы требуются повышенные pH, и если белки имеют тенденцию конгломерировать в нативном состоянии (клейковина), то после экстрагирования путем растворения они не обладают те ми же свойствами. Некоторые авторы преодолевают эти затруднения, беря за основу фракции, обогащенные белками (отруби, турбосепарированная мука), и предусматривают другие виды использования, такие, как пищевая клейковина (процесс получения которого описывается далее). В случае с отрубями такая технология дает возможность применить в питании человека те [c.464]

Томпсон с соавторами [115], отмечая, что тот же гексамета-фосфат натрия в нейтральной или щелочной среде благоприятствует растворению белков, предложили проводить солюбилизацию белков при pH 7 в его присутствии (2%), затем разбавлять экстракт перед подкислением до pH 2,5. Этот дорогостоящий процесс дает возможность получить изолят с высоким содержанием минеральных веществ (12,2%). Указанные работы были возобновлены позднее с уменьшенной дозой гексаметафосфата при том же pH солюбилизации. Этими авторами (1982 г.) был получен изолят с содержанием минеральных веществ 0,25 % (при добавлении метабисульфита натрия) и осаждение проводилось без разбавления при pH 4. Выход экстракта по этой технологии составляет 71 %, а осадка — 63% состав изолята несколько улучшается (табл. 9.31), как и его цвет. [c.470]

Для растворения органических материалов может использоваться также солюбилизация (коллоидное растворение). Так, неполярные углеводороды и жиры солюбилизируются водными растворами мыл и белков, вода — мицеллярными растворами олеорастворимых ПАВ в углеводородных растворителях и т. д. [c.871]

Когда определяют белок в клетках бактерий или анализируют белки, не растворимые в разбавленной щелочи, необходимо нагревать суспензию при 90°С в 1 н. NaOH в течение 10 мин для полной солюбилизации. Стандартный раствор обрабатывают подобным образом, так как в результате такой обработки снижается интенсивность окраски. В случае применения этой процедуры для растворения или экстракции белков реактив А заменяют реактивом, содержащим 20 г Na Os в 1 л воды. В остальном методика остается той же. [c.358]

Важно иметь в виду, что прогресс в биохимии зависит от разработки новых методов анализа, очистки и определения структуры. Например, в области биохимии липидов произошел настоящий переворот после введения в практику гяэо-жвдкостной и тонкослойной хроматографии. Анализ мембранных и многих других белков был крайне затруднен до тех пор, пока не появился метод электрофореза в полиакриламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия (ДСН-ПЭГ) применение додецилсульфата натрия приводит к солюбилизащш (растворению) ряда белков, которые ранее не удавалось перевести в растворимое состояние. После такой солюбилизации уже можно проводить электрофорез. Разработка методов клонирования и секвенирования (определения последовательности мономеров) ДНК произвела подлинную революцию в изучении нуклеиновых кислот и вообще в биологии. [c.16]