Плазмиды грамположительных бактерий

Приводимая ниже методика успешно применяется для получения плазмид из грамположительных бактерий, а также из тех грамотрицательных бактерий, которые не лизируются тритоном Х-100 и ДСН. [c.134]

Для выявления и предварительной характеристики ДНК плазмид, присутствующих в клиническом материале или лабораторных штаммах грамотрицательных и грамположительных бактерий, подходят обычные методы электрофореза в геле с незначительными модификациями [10, 23]. Метод выделения плазмид с ДСН (разд. 15.1.3) широко применяется в сочетании с анализом ДНК гель-электрофорезом [26]. При этом, однако, в частично очищенных клеточных лизатах могут быть выявлены лишь те плазмиды, молекулярная масса которых лежит в пределах от 0,6-10 до 100-10 . Мы же используем метод, описанный в разд. 15.2, который позволяет выявлять плазмиды с мол. массой от 0,6-10 до 350-10 . [c.139]

Плазмиды, по-видимому, вездесущи, поскольку они выявлены в клетках десятков видов грамположительных и грамотрицательных, аэробных и анаэробных бактерий, а также актиномицетов, цианобактерий и архебактерий. Аналогичные образования существуют и в эукариотических клетках. Вместе с тем они не являются обязательным компонентом генома и многие природные штаммы не содержат плазмид. [c.87]

В настоящее время имеется достаточный набор векторных молекул для проведения широкого спектра генно-инженерных экспериментов в клетках бацилл. Недостаток этих векторов состоит в том, что они не способны в мономерной форме трансформировать компетентные клетки В. subtilis. Качественно новые векторы для бацилл удалось создать на основе некоторых плазмид грамположительных бактерий рода Strepto o us. [c.246]

У некоторых бактерий, в особенности грамположительных, существует процесс естественной трансформации (см. раздел 4 этой главы). Находясь в особом, ко.мпетентно.м, состоянии, эти бактерии способны получать ДНК, оказавшуюся в среде (напри.мер, ДНК из погибших клеток), в частности плазмидную ДНК. Это еще один путь перемещения плазмид из клетки в клетку. При трансформации грамположительных бактерий в клетку проникает лишь одна линейная цепь ДНК. Поэтому для восстановления кольцевого плаз- [c.111]

Оптимальный метод выделения высокомолекулярной ДНК из донорного штамма или трансфецирующей ДНК бактериального вируса часто зависит от особенностей соответствующих бактерий ил1/ вирусов. Общие принципы и методы разрушения клеток грамотрицательных и грамположительных бактерий с целью выделения ДНК приведены в гл. 22. Чаще других для выделения и очистки высокомолекулярной ДНК из микроорганизмов применяется метод, описанный Мармуром [29]. Он подробно изложен в разд. 22.2.1. Однако в большинстве случаев использование высокоочищенных препаратов ДНК, не содержащих РНК и другие примеси, необязательно поэтому можно обойтись без обработки рибонуклеазой. Специальные методы выделения ДНК плазмид описаны в гл. 15. [c.67]

Как уже отмечалось, грамотрицательные бактерии имеют дополнительный барьер проницаемости в виде внешней мембраны, через которую не проникают белковые молекулы. Поэтому некоторые ферменты, например фосфатазы, которые обычно секретируются грамположительными бактериями, задерживаются у них в периплазме. Однако и среди грамотрицательных бактерий есть виды и штаммы, способные продуцировать внеклеточные белки. Так, штаммы Е. соН, несущие плазмиду, детерминирующую синтез гемолизина, приобретают способность и к его секреции. Первоначально гомолизин, по-видимому, поступает в периплазматическое пространство. Для выведения его из клетки необходим синтез двух белков, кодируемых той же плазмидой. Эти белки встраиваются во внешнюю мембрану и обеспечивают энергозависимое перемещение гомолизина наружу (W. Goebel et al., 1984). [c.67]

Транспозоны ТпЗ-семейства встречаются в грамот-рицательных и грамположительных бактериях, но, очевидно, имеют общее происхождение. Все они ограничены высоко гомологичными инвертированными концевыми повторами, состоящими из 35—48 П.Н., и образуют повторы реципиентной ДНК из 5 п.н. Центральные области этих транспозонов, содержащие информацию об их транспозиции, в разной степени гомологичны друг другу. В большинстве из них локализованы также гены, придающие клеткам устойчивость к антибиотикам и (или) солям ртути. Только ген Hg содержит, например, транспозон Тп5041, найденный в клетках Pseudomoms (Kholodii et al., 1997). Некоторые из транспозонов являются криптическими, т. е. не сообщают клеткам дополнительный фенотипический признак. К ним, в частности, относится транспозон ТпЮОО, содержащийся в F-плазмиде. К ТпЗ-семейству [c.45]

Таким образом, с точки зрения введения плазмид в клетки протопласты бацилл, как и других грамположительных бактерий, имеют ряд несомненных преимуществ перед компетентными клетками. Протопласты с высокой эффективностью трансформируются мономерной формой плазмидных ДНК, что очень важно при конструировании гибридных молекул ДНК in vitro. Кроме того, используя протопласты, часто удается вводить плазмиды в штаммы грамположительных клеток, не обладающих физиологической компетентностью. Недостатками данного методического приема являются его относительная сложность, многоэтапность и, как следствие, слабая воспроизводимость по параметру эффективности трансформации. [c.239]

Таким образом, разработанный подход позволяет достаточно легко переносить гибридные плазмиды из Е. oli в разные грамположительные бактерии, которые не обладают физиологической компетентностью. Более того, в процессе конъюгационной передачи в клетку-реципиент переносится одна цепь донорной плазмиды, на которой синтезируется затем комплементарная цепь ДНК. Это приводит к тому, что конъюгационно передаваемая плазмида не подвергается атаке рестриктаз — эндонуклеаз, специфично воздействующих на немодифициро-ванные двухцепочечные молекулы ДНК. [c.239]

Разработка методологии клонирования генов в клетках В. subtilis вывела на качественно новый уровень молекулярно-генетические исследования данной грамположительной бактерии. В клетках В. subtilis в составе фаговых или плазмидных ДНК клонирован широкий спектр хромосомных генов бацилл, в том числе spo-гены, участвующие в регуляции спорообразования, гены а-амилаз, пенициллиназ, протеаз. При этом, как уже отмечалось, за счет повышенной дозы гена в клетках, содержащих гибридные плазмиды, обычно наблюдается сверхсинтез соответствующих продуктов. [c.267]

Антибиотики-аминогликозиды [23] включают ряд противоми-кробных веществ, в химической структуре которых имеются гликозид-ные связи стрентомицины, неомицины, канамицины, гентамицины, гигромицин, сизомицин, амикацин и др. Аминогликозиды — антибиотики широкого спектра действия в отношении чувствительных грамположительных и грамотрицательных бактерий. Все они тормозят белковый синтез благодаря взаимодействию с 30S субчастицами бактериальных рибосом и в результате нарушения их функций. Названные антибиотики более активны в щелочной среде. Устойчивые к аминогликозидам бактерии инактивируют антибиотики с помощью ферментов, образующихся при наличии в клетках R-плазмид. [c.188]

Рассмотрим свойства конъюгативной плазмиды RK2 и не-конъюгативной RSF1010 — представителей групп несовместимости In Pl и In Q, соответственно. Каков механизм, который позволяет им стабильно поддерживаться почти во всех грамотрицательных бактериях, а плазмиде RK2, кроме того, еще и конъюгировать с грамположительными клетками и дрожжами [c.87]

Смотреть страницы где упоминается термин Плазмиды грамположительных бактерий: [c.215] [c.69] [c.92] [c.105] [c.112] [c.66] [c.136] [c.366] [c.237] [c.239] [c.239] [c.240] [c.256] [c.271] [c.277] [c.282] [c.137] [c.265] [c.273]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология