Донорные штаммы

Вводимая ДНК (из донорного штамма) имела свойства Зт С , и в результате трансформации получались рекомбинанты с двойной устойчивостью 8т С . ДНК, полученная из клеток акцепторного штамма через различные промежутки времени после инициирования трансформации, испытывалась на трансформацию дикого штамма со свойствами 8т С к двойной устойчивости к обоим антибиотикам. Предварительно было показано, что вероят- [c.356]

ДОНОРНЫЕ ШТАММЫ С ВЫСОКОЙ ЧАСТОТОЙ ПЕРЕНОСА, ИЛИ HFR-ШТАММЫ [c.222]

Ф и г. 114. Первая кольцевая карта хромосомы . соН, построенная на основании сравнительного изучения участков хромосомы, переносимых с высокой частотой разными донорными [штаммами Hfr. [c.230]

Перенос хромосомы донора происходит ориентированно, т. е. гены переносятся в той последовательности, в которой они расположены на хромосоме. Начало переноса связано с местом интеграции конъюгативной плазмиды в хромосому донорного штамма и ее ориентацией. [c.186]

Хромосомную карту Е.соИ можно получить, если смешать клетки Hfr и р- и дать возможность конъюгации происходить в течение опре-деленного интервала времени, а затем клетки интенсивно перемешать, например, в гомогенизаторе Уоринга. В результате этой процедуры все конъюгационные мостики разрушаются и процесс спаривания бактерий прерывается. Спаривание прерывают через разные промежутки времени и определяют наличие в бактериях-реципиентах генов, перенесенных иа Клеток донорного штамма. При помощи этого метода было показано,, что для полного переноса хромосомы при 37 °С требуется приблизительно 100 мин и что локализацию любого гена в хромосоме можно приблизительно установить по времени, необходимому для переноса этого гена в клетку-реципиент. В действительности, однако, все выглядит несколька сложнее. Поскольку полный перенос всей хромосомы осуществляется редко, в опытах обычно используются разные подштаммы Е. соИ К-12, У которых фактор F расположен в разных местах во всех случаях гены,, локализованные по часовой стрелке сразу же за точкой интеграции (рис. 15-1), переносятся быстро и с высокой частотой. [c.191]

Активность молекул ДНК в бактериальной трансформации (гл. VH) дает возможность исследовать денатурацию двойной спирали с помощью биологического метода. Для этого раствор трансформирующей ДНК, выделенной из генетически маркированного донорного штамма D. pneumoniae, медленно нагревают до все более высокой температуры. Из такого раствора время от времени берут образцы, которые быстро охлаждают в ледяной бане. Затем эти образцы добавляют к культуре рецнпиентного штамма пневмококка, отличающегося генетически от донорного штамма, и учитывают число трансформированных клеток, получивших аллели донора. С помощью такого опыта было показано, что трансформирующая активность пневмококков при достижении точки плавления ДНК (86 °С) резко падает. В ходе таких опытов по тепловой денатурации с использованием меченной трансформирующей ДНК было показано, что потеря трансформирующей активности, наблюдаемая при плавлении ДНК, объясняется неспособностью реципиента поглощать одноцепочечные полинуклеотиды. [c.180]

В 1959 г. у дельберг намеревался осуществить опыты по конъюгации с одним из штаммов Hfr, незадолго до этого выделенных Вольманом и Жакобом. Однако, к своей досаде, он обнаружил, что культура этого штамма частично ревертировала в Р+-состояние и поэтому утратила свою способность быть донорным штаммом с высокой частотой переноса. Однако, после того как Адельберг изучил свойства ревертанта , он сделал более важное открытие половой фактор F, содержащийся в ревертанте Р" , претерпел генетическую модификацию. Такая модификация, которую Адельберг обозначил символом F, проявлялась в значительном увеличе- [c.232]

Эту возможность использовали в 1959 г. Чарлз Яновский и Леннокс для построения генетической карты тонкой структуры области trp хромосомы Е. oli. Эта область, как видно из общей карты на фиг. 123, расположена на кольцевой хромосоме в точке, приблизительно соответствующей 24-й минуте, поблизости от генов ton и i/sB, контролирующих структуру рецепторов фага Т1 и синтез аминокислоты цистеина соответственно. Для построения карты тонкой структуры Яновский и Леннокс сосредоточили свое внимание на наборе ауксотрофов Тгр , полученных Яновским. Эти мутанты распадаются на пять четких классов (табл. 5), различающихся по потребностям в факторах роста и по характеру накапливающихся в клетке метаболитов, что в свою очередь зависит от того, какой именно из последних этапов биосинтеза триптофана (фиг. 37) у этих мутантов блокирован. Каждый из этих ауксотрофов Тгр может быть превращен в прототроф Тгр+ заражением лизатом трансдуцирующего фага Р1, выращенного на донорном штамме Е. соИ Тгр+ дикого типа. При отборе таких прототрофных трансдуктантов путем высева зараженных фагом [c.358]

Как видно из фиг. 178 А и В), использование в этом опыте в качестве донора дикого типа Тгр" должно привести к появлению значительно большего числа трансдуктантов Тгр , чем в том случае, когда донором будет взят любой из ауксотрофов Тгр". В этом последнем случае частота трансдуктантов Тгр будет тем меньше, чем теснее сцеплены мутантные локусы донора и реципиента. Однако трансдуцирующая способность различных препаратов фага Р1 сильно варьирует, и на основании абсолютных частот трудно установить точный характер сцепления. Поэтому для нормирования этих частот в соответствии с трансдуцирующей способностью различных препаратов фага Р1 в опыт была введена трансдукция по очень отдаленному гену his, который все донорные штаммы должны передавать с одинаковой эффективностью. Результаты такого опыта представлены в табл. 22, где частоты трансдукции маркера Тгр выражены в виде процентного отношения числа трансдуктантов Тгр и His , полученных в каждом данном заражении определенным препаратом фага Р1. Во-первых, видно, что эффективность донора дикого типа Trp Hi.s составляет 187%. (По не понятным до сих пор причинам фаг Р1 трансдуцирует гены trp несколько более эффективно, чем гены his.) Во-вторых, как и предполагалось, нормированная частота трансдуктантов Тгр значительно ниже в случае ауксотрофных доноров Тгр", чем в случае донора дикого типа, что свидетельствует об очень тесном генетическом сцеплении этих двух неидентичных мутантных участков внутри гена trpB. И в-третьих, как можно было предвидеть, трансдуктанты Тгр вообще не образуются, если и донорная и реципиентная бактерии содержат одну и ту же мутацию. И наконец, в-четвертых, на основании приведенных частот трансдуктантов можно заключить, что рассматриваемые мутации располагаются внутри гена trpB в следующем порядке В2—В1—ВЗ. Соответствующая генетическая карта изображена на фиг. 180. [c.364]

Оптимальный метод выделения высокомолекулярной ДНК из донорного штамма или трансфецирующей ДНК бактериального вируса часто зависит от особенностей соответствующих бактерий ил1/ вирусов. Общие принципы и методы разрушения клеток грамотрицательных и грамположительных бактерий с целью выделения ДНК приведены в гл. 22. Чаще других для выделения и очистки высокомолекулярной ДНК из микроорганизмов применяется метод, описанный Мармуром [29]. Он подробно изложен в разд. 22.2.1. Однако в большинстве случаев использование высокоочищенных препаратов ДНК, не содержащих РНК и другие примеси, необязательно поэтому можно обойтись без обработки рибонуклеазой. Специальные методы выделения ДНК плазмид описаны в гл. 15. [c.67]

ДНК донорного штамма trpA выделяют по Мармуру (разд. 22.2.1) или одним из простых способов, описанных ниже. [c.70]

Лизат трансдуцирующего фага легче всего приготовить следующим образом сначала лизогенизировать донорный штамм фагом X с1857, а затем вызвать его лизис. [c.84]

К 2 мл 3-часовой культуры реципиента добавляют 1 мл бульонной культуры донора. Посевы инкубируют при 37°С в течение 30 мин. Затем смесь разводят до 10 —10 и высевают по 0,1 мл на селективную агаровую среду в чашки Петри, на которой вырастут только колонии рекомбинантов. В качестве контроля на ту же среду высевают донорный и реципиеитный штаммы, которые не будут расти на ней, так как первый штамм чувствителен к стрептомицину, а второй ауксотрофен по лейцину. Кроме того, культуру донорного штамма высевают на селективную среду без стрептомицина, а культуру рециш1ентного штамма — на полную среду (питательный агар) с антибиотиками для определения числа жизнеспособных клеток. Посевы инкубируют до следующего дня при 37°С. После подсчета числа выросших колоний определяют частоту рекомбинаций по отношению количества рекомбинантных клеток к реципиентным. Так, например, после посева 0,1 мл смеси донорных и реципиентных культур в разведении 10 выросло 150 колоний рекомбинантов, а после посева 0,1 мл Культуры реципиента из разведения 10 —75 колоний. Таким образом, частота рекомбинации будет равна [c.73]

Рис 4 3 Зиготная индукция При конъюгации бактерий гены донорной клетки входят в рецициентную клетку в определенном порядке Различные донорные штаммы начинают перенос кольцевой хромосомы Е сок с разных ее участков Белки, в том числе репрессор "к, не переносятся в реципиентную клетку при [c.88]

Кольцевая генетическая карта oli, на которой указано положение отдельных генов. Порядок генов в хромосоме соответствует указанному на рис. 11.2. Точками отмечены области инициации переноса в донорных штаммах, представленных на рис. 11.2. [c.198]

Смотреть страницы где упоминается термин Донорные штаммы: [c.357] [c.219] [c.219] [c.234] [c.237] [c.347] [c.356] [c.358] [c.361] [c.364] [c.442] [c.322] [c.68] [c.70] [c.90] [c.91] [c.538] [c.16] [c.187] [c.190] [c.538] [c.198]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология