Количество специфического преципитата

Количество специфического преципитата [c.30]

Иногда при постановке реакции используют бентонит [236], на котором адсорбируется глобулииовая фракция антисыворотки или антигеи. Адсорбция на бентоните позволяет наблюдать образование очепь небольшого количества специфического преципитата. Бозикевич и др. [236] считают данный метод быстрым, чувствительным и специфичным его применяют для выявления пекоторых вирусов в клубнях картофеля, находящихся в состоянии покоя [909, 1579]. [c.366]

В настоящее время известно, что избыток антигена обычно препятствует образованию специфического преципитата или резко уменьшает его количество. Очевидно, это обусловлено соединением антигена с антителом, так как добавление гетерологич-ного антигена не сопровождается подобным подавляющим эффектом. На этом основании Ландштейнер сделал вывод, что избыток гаптена, который должен соединяться со специфическими антителами, также должен подавлять преципитацию антитела к гаптену комплексом гаптен — белок. [c.25]

Количество вируса в специфических преципитатах можно измерить несколькими способами путем определения общего азота, выделепия х-г определения нуклеотидов из вирусной рибонуклеиновой кислоты и, наконец, измерения радиоактивности. С помощью этих методов молчно точно оценить концентрацию вируса, на которую при исследовании палочкообразных вирусов степень их агрегации не влияет вовсе или влияет весьма незначительно. [c.30]

Установлено, что полисахариды являются детерминантами, определяющими иммунологическую специфичность многих видов микроорганизмов. Специфическое взаимодействие зависит от ассоциации реакционноспособных групп полисахаридного антигена и белкового антитела, и потому метод, основанный на этом типе взаимодействий, обычно специфичен к строению полисахарида Если получить антисыворотку, специфичную к полисахаридам из вестного строения, ее можно использовать для установления сте пени структурного сходства неизвестных полисахаридов и полиса харидов, к которым специфична данная антисыворотка. Таким пу тем была обнаружена гетерогенность галактана из легких быка Преципитат, образуемый с антисывороткой, специфичной к Pneu mo o us типа XIV, содержал D-галактозу и D-глюкуроновую кис лоту в количествах, отличных от исходного препарата [62]. [c.227]

Образование антител можно исследовать количественно с помощью реакции преципитации. Животное, которое служит реципиентом-обычно это кролик,-иммунизируют каким-либо специфическим чужеродным белком, например яичным альбумином из куриньк яиц. Затем сыворотку крови иммунизированного животного антисыворотку), содержащую антитела, смешивают с небольшим количеством антигена, т.е. яичньш альбумином. При этом происходит помутнение, так как образуется осадок (преципитат), содержащий комплекс антиген-антитело. Если же с антигеном смешивается сыворотка неиммунизирован-ного животного, никакого осадка не образуется. [c.157]

Включившие метку иммуноглобулины можно удалить из диализованного лизата следующим образом. Для усиления преципитации меченых иммуноглобулинов к лизату прибавляют нормальную сыворотку того вида, клетки которого взяты в опыт. Количество этой сыворотки (обычно 25 мкл на 10 клеток) должно быть равным объему прибавляемой позже специфической антисыворотки (см. ниже) или немного большим. Затем добавляют анти-глобулиновый реагент в наименьшем количестве, достаточном для полной преципитации иммуноглобулинов. [Это количество определяют в предварительном титровании, в котором 25 мкл нормальной сыворотки смешивают с возрастающими объемами (например, 100, 200... 1000 мкл) антиглобулииового реагента, доводят общий объем до 1 мл, добавляя сыворотку с ЗФР, и оставляют для образования преципитата на ночь находят то минимальное количество реагента, после добавления которого в надосадочной жидкости больше не остается иммуноглобулинов (т. е. новое добавление 100 мкл реагента уже не вызывает преципитации).] Реакцию преципитации в основном опыте проводят в течение 4—16 ч при 4°С, после чего преципитат удаляют центрифугированием при 2000g в течение 15 мин. После удаления меченых иммуноглобулинов к двум пробам лизата прибавляют соответственно специфическую и контрольную сыворотки и инкубируют 1—2 ч при 37°С. Обычно на 10 клеток прибавляют 20 мкл антисыворотки. Если, предположим, сыворотка содержит 50 мкг/мл антител к антигену, представленному в количестве 5-10 молекул на 1 клетку, то каждая молекула антигена будет в среднем иметь по два участка, связывающих антитело. Целесообразно в предварительных опытах (используя разные объемы, например 5, 20 и 50 мкл на 10 клеток) определить то количество сыворотки, которое дает наибольшее соотношение между радиоактивностью преципитатов в опыте и в контроле. Наконец, ко всем пробам прибавляют соответствующее количество антиглобу-линового реагента и инкубируют 4—16 ч при 4°С. [c.190]

Обладая способностью связываться со специфическими молекулами антител, гаптены ие образуют преципитатов, так как имеют только один центр связываиия. Поэтому для выявления такой специфической реакции приходится использовать тот или иной косвенный метод. Иногда с этой целью можпо использовать торможение гаптеном преципитации с гомологичным полным антигеном. В следуюш ем разделе обсуждаются опыты с мечеными пептидами, полученными из структурного белка ВТМ. После реакции Таких меченых пептидов с аптисывороткой осаждали глобулиновую фракцию 50%-иым раствором сульфата аммония. Измеряя радиоактивность преципитата, можно определить количество определеиного пептида, связанного с белком аптител [1970]. [c.369]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология