Комплексы антитело гаптен

Комплекс Антитело- Гаптен [c.26]

Выполнение работы включало три основных этапа I) направленный синтез высокоспецифических реагентов, являющихся основой получения коньюгатов антигенов, и последующая наработка иммуноспецифических субстанций антител к наркотикам и монодисперсных полимерных суспензий с заданными свойствами реакционно-способных комплексов гаптенов либо их специфических антител с ферментом или их макромолекулярным носителем (белок, полимер) 2) разработка иммунохимического метода анализа для определения опиатов, каннабиноидов и гидазепама на основе полученных реагентов с использованием латексной агглютинации 3) разработка экспериментально-технологического регламента и пакета нормативно-технической документации для выпуска опытно-промышленной серии иммунодиагностикумов для быстрого определения наркотиков в биологической жидкости человека. Создание и испытание опытных серий наборов тест-систем для получения необходимых рекомендаций для внедрения в клиническую практику. [c.200]

Иммуноглобулины из-за своей поразительной специфичности стали исключительно важным инструментом биохимического анализа. Методы, основанные на образовании комплексов антител с антигенами или гаптенами, называют иммуноанализом. Иммуноанализ используется либо для определения определенных антигенов с помощью специфических к этим антигенам антител, либо, наоборот, для детекции антител определенной специфичности с помощью соответствующих антигенов. И та, и другая задача имеет широкий спектр применений в фундаментальных биохимических исследованиях, в биотехнологии, в медицинской практике и для оценки состояния окружающей среды. [c.256]

При анализе содержания в образце антител определенной специфичности можно использовать так называемый белок А из стафилококка, который обладает специфическим сродством к константной части антител в комплексе с их антигенами или гаптенами. Образование комплекса антиген — антитело регистрируется после удаления избытка антитела по взаимодействию конъюгата белка А с детектируемой меткой, например пероксидазой. [c.258]

Антигенная специфичность гаптенов зависит не только от их химической структуры, но и от способа пришивки к белку-носителю, в частности от того, какая функциональная группа гаптена была использована для конъюгирования. Часто, при получении конъюгатов для иммунизации гаптены пришивают не непосредственно к молекуле белка-носителя, а через пространственную ножку , содержащую обычно 4—6 углеродных атомов. В этом случае сама ножка в комплексе с гаптеном выступает в качестве составной антигенной детерминанты и образующиеся антитела могут обладать меньшей эффективностью связывания с нативным гаптеном, чем с таким связанным через ножку гаптеном. [c.16]

Для определения положения равновесия между свободными антителом и антигеном и их комплексом или между антителом и гаптеном и их комплексом использовали различные методы. Среди них — метод равновесного диализа (I), прямой анализ преципитатов и надосадочной жидкости (II), электрофорез и ультрацентрифугирование (III) и метод рассеяния света (IV). Эти эксперименты подробно описаны в цитированных работах. Здесь мы можем только сказать, что все это методы определения или расчета концентраций свободных антител, свободных антигенов, свободных гаптенов и их комплексов в состоянии равновесия. На основе таких измерений можно вычислить константу равновесия К и AF°. Если эти измерения произвести при нескольких значениях температур, можно определить также величины ДЯ° и А5°. [c.166]

Образование комплексов гаптен — антитело [c.393]

Аллергическая реакция (сенсибилизация) несомненно носит защитный характер. Гуморальные антитела связывают аллерген, а агломерированные иммунные комплексы подвергаются фагоцитозу, перевариванию (белковый носитель), расщеплению (химический гаптен) и затем выведению через выделительные органы. Эффекторные Т-лимфоциты уничтожают летки, помеченные аллергеном. [c.250]

В водном растворе молекула IgG имеет Y-образную форму. Угловое расстояние между РаЬ-участками может колебаться от 5—10 до 180°. Крайние значения эта величина принимает, согласно данным электронной микроскопии, когда антитела находятся в комплексе с антигеном или бивалентным гаптеном. Расстояние между РаЬ-участками молекулы антитела зависит от молекулярного состава комплекса. В точке эквивалентности системы (см. [c.74]

Для полного подавления реакции между антителами к гаптену и комплексом гаптен — антиген [c.26]

Другой путь решения проблемы разделения меченых и немеченых компонентов основан на принципе модуляции активности ферментов антителами. Действительно, в ряде работ было показано, что при взаимодействии антител с гаптеном, пришитым вблизи активного центра фермента, происходит полное ингибирование его активности. При добавлении к такой системе свободного гаптена происходит диссоциация комплекса, в результате чего активность фермента восстанавливается (рис. 22, а, уравнения 4,5) [c.114]

Подобного рода проблемы очень часто возникают, например, при разработке методов иммуноферментного анализа лекарственных препаратов, стероидных и белковых гормонов. В зависимости от способа получения антисыворотки антитела могут быть специфичны либо только к одному лекарственному препарату (гап-тену), либо к целой группе близких по структуре химических соединений. В этих случаях распространен способ оценки специфичности, основанный на сравнении связывания антител в данной концентрации (или в определенном разведении иммунной сыворотки) одного и того же количества гомологичного и гетерологичного гаптена. При этом концентрация образовавшегося иммунного комплекса для гомологичного гаптена принимается равной единице, а связывание всех гетерологичных гаптенов оценивается как доля от соответствующего связывания гомологичного гаптена. [c.37]

Получение экспериментальных данных, необходимых для вычисления основных параметров реакции антитела со специфическим лигандом, возможно с достаточной точностью лишь в том случае, когда лиганд одновалентен и как всякий одновалентный гаптен не Ведет к образованию больших по размеру и сложных по составу агрегатов. В случае образования комплексов, состоящих из нескольких молекул антигена и антитела, система настолько усложняется, что реакция не может быть описана простыми уравнениями. [c.104]

В качестве ферментов в гомогенном нммуноферментном анализе выступают дегидрогеназы, а субстратов — кофакторы. По-видимому, при образовании комплекса фермент—гаптен с антителом последнее так изменяет конформацию белковой глобулы, что кофактор не может продуктивно связаться с активным центром фермента, в результате чего его активность исчезает. Гомогенные методы обладают высокой экспрессностью (не более 15 мин), так как в них отсутствуют диффузионные затруднения иммунохимической реакции, характерные для твердофазных вариантов анализа. [c.115]

Рис. 15.17. Схематическое изображение растворимого комплекса двухвалентного антитела с двумя гаптенами и структуры предипитата, образованного антителом и дига1птеновы1М веществом.

В ферментативной иммунохроматографии также используются конъюгат фермента с определяемым веществом и специфические антитела против последнего. Однако в отличие от EMIT здесь определение не связано с изменением активности конъюгата в комплексе с антителом. Принцип метода ферментативной иммунохроматографии представлен на рис. 6.4. Определенный объем пробы смешивают с раствором, содержащим конъюгат фермент -гаптен и соответствующий ферментный реагент. В рассматриваемом примере сопряженным ферментом является пероксидаза из корней хрена, а ферментным реагентом - глюкозооксидаза. Глюко- [c.84]

Константа скорости такой важнейшей в биологическом отношении реакции, как фермент-субстрат, достигает значений порядка 10 —10 м с . Аналогичные значения константы скорости характерны для реакции антител с антигенами или гаптенами. Но между сравниваемыми реакциями существуют очень важные различия. В случае ферментативного катализа за счет изменения химического строения субстрата сродство образующегося продукта к активному центру фермента крайне мало по сравнению с субстратом. В силу этого активный центр становится доступным для реакции с новой молекулой субстрата. Напротив, комплекс антиген (гаптен)-антите-ло не подвергается внутренним превращениям, которые могли бы привести к освобождению активного центра антитела. Аналогично протекает реакция антигена с поверхностными рецепторами клеток иммунрюй системы. Вследствие этого судьба антител (рецепторов) — это их распад в процессе катаболизма комплекса. Следовательно, протекающие в иммунной системе химические реакции, определяющие ее роль в гомеостазе, по существу необратимы. Это отличает их как от реакции фермент-субстрат, так, видимо, и от других менее изученных в кинетическом плане реакций, регулирующих гомеостаз специфической рецепции клетками субстратов, разнообразных медиаторов и другими реакциями. [c.6]

Пиетт и сотрудники (Piette е. а., 1972) исследовали комплексы отрицательно заряженного спин-меченого бензоата и комплексы положительно заряженного спин-меченого триметилфениламмония с соответствуюнщми кроличьими антителами. Судя по спектрам ЭПР, комплексы антител с отрицательно заряженными спин-мечеными гаптенами являются более жесткими, чем комплексы антител с положительно заряженными спин-мечеными гаптенами. Кроме того, было обнаружено, что степень иммобилизации N—О-группы спин-меченого бензоата в активных центрах антител варьировала индивидуально у разных кроликов. [c.22]

Антигенами обычно являются высокомолекулярные соединения — белки и полисахариды, однако и многие низкомолекулярные соединения ( г а н т е н ы ), присоединенные к белкам, становятся антигенами. Классич. исследования К. Ландштейнера таких конъюгированных антигенов показали, что антигенные свойства гаптенов в сильной мере определяются природой и положением полярных радикалов в их структуре. Например, в исследовании, приведенном в таблице, для реакции была взята сыворотка, в к-рой присутствуют антитела, образовавшиеся при введении животным комплекса, содержащего j№-H2N jH4 OOH и ж-Н.21ЧСбН480зН. При добавлении к этой сыворотке различных аминов были получены след, результаты [c.111]

Гуморальная форма иммунного ответа на аллерген может вызвать, согласно классификации Кумбса и Гелла [82], три типа аллергических реакций, которые в клинической аллергологии обычно объединяют под общим названием аллергические реакции быстрого (немедленного) типа . При тине I (анафилактическом, или реаги-новом) свободно циркулирующий антиген образует иммунный комплекс с тканями, пассивно сенсибилизированными атителами, а клиническая картина реализуется действием биогенных аминов. Типичным примером реакции типа I считают бронхиальную астму, при которой реагины фиксируются клетками слизистых оболочек органов дыхания и кожи. Тип И (цитотоксический), при котором гуморальные антитела при участии комплемента реагируют с аутоантигенами или гаптенами, фиксированными на тканях, имеет место при аллергодерматозах химической этиологии, а в аутоаллергическом варианте — при любой нозологической форме химического аллергоза. Тип П1 обусловлен токсическим действием иммунного комплекса, растворенного в избытке антител, что характерно для сывороточной болезни. [c.20]

Весьма характерно, что молекулы антител, содержащихся в антисыворотках, не отличаются абсолютным подобием. Они различны по силе реакции с данным гаптеном и по специфичности. Это легко показать в нашем случае, если вначале добавлять к ан-тиметаниловой сыворотке белок, к которому присоединен один из перекрестно реагирующих гаптенов, до тех пор, пока не прекратится реа1 ,ия, а затем прибавить к обработанной сыворотке гомологичный или другой родственный гаптен. Для того чтобы в смеси не осталось растворимых комплексов антиген — антитело, сыворотку можно обработать гаптенами, присоединенными к нерастворимым структурам (строме), остающимся после лизиса эритроцитов и удаления гемоглобина. Сыворотка, обработанная с целью удаления всех антител, способных реагировать с данным антигеном, называется адсорбированной (истощенной). Вот результаты таких опытов [23] (схема IV) [c.22]

В настоящее время известно, что избыток антигена обычно препятствует образованию специфического преципитата или резко уменьшает его количество. Очевидно, это обусловлено соединением антигена с антителом, так как добавление гетерологич-ного антигена не сопровождается подобным подавляющим эффектом. На этом основании Ландштейнер сделал вывод, что избыток гаптена, который должен соединяться со специфическими антителами, также должен подавлять преципитацию антитела к гаптену комплексом гаптен — белок. [c.25]

Схема постановки отштов, разработанная Ландштейнером, включала иммунизацию кроликов гаптенбелковым комплексом и последующий анализ антисывороток от иммунизированных животных с тем же самым или иным гаптеном, но конъюгированным с другим неродственным белком. Подобный прием позволял работать только с антителами к гаптену и исключал те антитела, которые образовывались к эпитопам белка, взятого для иммунизации (рис. 1.3). В результате удалось показать решающую роль тонкой конфигурации Гаптена в определении специфичности. Другой пример, иллюстрирующий это основное положение, представлен в табл. 1.4. [c.40]

Наиболее характерно эффект иммунодоминантной группы выявляется при модификации отдельных аминокислотных остатков химическими соединениями, например динитрофенильной группой. Антитела, образующиеся в такой модифицированной антигенной детерминанте, способны реагировать не только с ней, но и с другими аминокислотными остатками, к которым будет пришита динитрофенильная группа. Более того, если в раствор, содержащий модифицированный белок и антитела, добавить свободный динитрофенол, то он будет ингибировать образование комплекса антиген — антитело. Это явление, которое впервые былГо описано и детально изучено К. Ландштейнером, послужило основой для получения антител против различных гаптенов. [c.13]

Процесс образования комплекса антиген — антитело состава 1 1, в котором реализуются поливалентные взаимодействия, также является обратимым и может быть охарактеризован константой комплексообразования. С энергетической точки зрения образование поливалентного комплекса намного выгоднее, чем моновалентного. Например, было показано, что 1дО-антитела с внутренней аффинностью к 2,4-динитрофенольному (ДНФ) гаптену 10 л/моль имеют функциональную аффинность по отношению к комплексу ДНФ — фаг 4-174—л/моль, т. е. бивалентные взаимодействия являются в 1000 раз более прочными, чем моновалентные. [c.38]

На практике данный подход был реализован на примере многих низкомолекулярных антигенов и других ферментов — малатдегидрогеназы печени свиньи и глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы, и также известен под названием EMIT . Используют конъюгаты ферментов с гаптенами, которые незначительно отличаются по активности от нативного фермента. При взаимодействии с антителами против гаптена в молекуле фермента происходят конформационные изменения, затрагивающие структуру активного центра, в результате чего ферментативная активность сильно падает. Введение в реакционную систему свободного антигена приводит к уменьшению концентрации комплексов конъюгат—антитело, а сдедовательно, измеряемая активность при увеличении концентрации анализируемого соединения также возрастает. [c.117]

В методах типа EMIT гаптен и конъюгат гахгген - фермент конкурируют между собой за ограниченное количество антител против определяемого соединения. Связывание конъюгата с антителом приводит к изменению ферментативной активности. В общем случае свободный конъюгат активен, а в комплексе с антителом неактивен. Таким образом, чем больше определяемого соединения находится в образце, тем большая доля конъюгата останется несвязанной и тем более высокой будет ферментативная активность. [c.84]

КОВ, гаптенов, антител и иммунных комплексов, определяема этим методом. В настоящее время тринадцать наборов реагентов для вьтолнения таких анализов производятся в промышленном маштабе и поступают в продажу. [c.229]

В свете рассматриваемых положений можно объяснить ряд установленных ранее данных о регуляторной роли естественных антител. Впечатляющее по своим результатам исследование было выполнено J. Murray еще в 1967 г. Он проанализировал значение естественных антител против эритроцитов барана, содержащихся в сыворотке крыс, на продукцию этими животными антител против того же антигена (эритроцитов барана). Следует напомнить, что у человека и различных экспериментальных животных, не подвергавшихся иммунизации, в сыворотке крови содержатся в низких концентрациях естественные антитела как против эритроцитов барана, так и против ряда других антигенов и гаптенов. Эти естественные антитела, в том числе естественные антитела против эритроцитов барана, представляют собой комплексы / -белков определенной специфичности с циркулирующими иммуноглобулинами, причем последние выполняют только функцию носителя (см. гл. 5) [c.92]

Активным центром антитела называют участок молекулы, пространственно комплементарный детерминантной группе антпгена (гаптена). Комплемен-тарность (пространственное соответствие) активного центра антигенной детерминанте обеспечивает большое число нековалентных связей, возникающих между лигандом и образующими активный центр отрезками пептидных цепей антитела. Эти нековалентные связи стабилизируют комплекс. Хотя между детерминантной группой (гаптеном) и аминокислотными остатками в активном центре не возникают ковалентные связи, однако за счет большого числа слабых связей образуется относительно мало диссоциирующий комплекс. В силу этого равновесие в системе антиген-антитело сильно смещено вправо [c.91]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология