Белок определение по содержанию общего азота

Для количественного определения белка используют колориметрические и спектрофотометрические методы, в некоторых случаях пользуются определением белка по содержанию общего азота в препарате. [c.29]

Содержание сырого протеина (общего белка) в дрожжах во всех странах определяют по методу Кьельдаля или по одной из многих его модификаций. Наиболее распространенная пропись метода Кьельдаля приводится ниже. Метод основан на определении количества азота, содержащегося в белке дрожжей. Дрожжи обрабатывают серной кислотой при нагревании в присутствии сернокислой меди в качестве катализатора и сернокислого натрия как водоотнимающего вещества. Органические вещества окисляются до углекислого газа и воды. Азот, освобождающийся при разрушении органических веществ, восстанавливается до аммиака, который связывается серной кислотой в сернокислый аммоний. Реакции продолжаются более 16 ч. Образовавшийся сернокислый аммоний разлагают щелочью, выделяется аммиак, который отгоняют в титрованный раствор серной кислоты (или в раствор борной кислоты), и ее избыток оттитровывают раствором щелочи. Содержание сырого протеина в дрожжах находят как произведение количества азота, найденного в аммиаке, умноженное на эмпирический коэффициент 6,25. [c.227]

Определение белка по содержанию общего азота основано на том, что содержание азота в большинстве белков практически одинаково и может быть принято равным 16 %. В том случае, если лекарственный препарат, кроме белка, содержит другие вещества, в состав которых входит азот, белок предварительно осаждают трихлоруксусной или хлорной кислотой. При нагревании органического соединения с концентрированной серной кислотой происходит его минерализация, азот превращается в аммония сульфат, и его можно определить количественно. [c.33]

Определение общего количества белков в молоке сводится к определению в точно взятой навеске молока азота по Кьельдалю (стр. 167). Полученную цифру общего азота умножают на коэфициент 6,45 (принимая содержание азота в белках молока равным 15,5% и считая весь азот принадлежащим белку) и в итоге получают количество белков [c.319]

Анализ белков.— Белки обычно гидролизуют кипячением с 20%-ной соляной кислотой или 35%-иой серной кислотой. Щелочной гидролиз сопровождается глубокой рацемизацией и применяется только при определении триптофана и тирозина, чувствительных к минеральным кислотам. Ферментативный гидролиз протекает медленно и, вероятно, не полностью, однако он не осложняется деструкцией лабильных продуктов, образующихся при гидролизе. Если аспарагиновая и глутаминовая кислоты присутствуют в белке в виде амидов, то кислотный гидролиз превращает амидный азот в соответствующие аммонийные соли. Методом Кьельдаля определяют количество общего азота содержание амидного азота устанавливают подщелачиванием аликвотной порции и отгонкой аммиака в отмеренный объем титрованной кислоты. В этом случае количество аммиака соответствует количеству присутствующих в белке амидов дикарбоновых аминокислот. [c.640]

Сердечная мышца по содержанию ряда химических соединений занимает промежуточное положение между скелетной мускулатурой и гладкими мышцами. Так, общее содержание белкового азота в скелетных мышцах кролика составляет 30—31 мг/г, а в гладкой мускулатуре (миометрий)—до 20,3 мг/г. В сердечной мышце и особенно в гладких мышцах значительно меньше миофибриллярных белков, чем в скелетной мышце. Общее содержание миофибриллярных белков в гладкой мышечной ткани желудка примерно в 2 раза ниже, чем в скелетных мышцах. Концентрация белков стромы в гладких мышцах и миокарде выше, чем в скелетной мускулатуре. Известно, что миозин, тропомиозин и тропонин сердечной мышцы и гладкой мускулатуры заметно отличаются по своим физико-химическим свойствам от соответствующих белков скелетной мускулатуры. Отмечены определенные особенности и во фракциях саркоплазматических белков. Саркоплазма гладкой мускулатуры и миокарда в процентном отношении содержит больше миоальбумина, чем саркоплазма скелетной мускулатуры. [c.652]

Таким образом получают 6 белковых фракций 1) альбумины 2) легкорастворимые глобулины, которые экстрагируются водой и осаждаются при диализе 3) глобулины, экстрагируемые водой 4) проламины 5) глютелины и 6) нерастворимый азот. Фракции 1—5 были собраны в мерные колбы. Для определения содержания белков в каждой фракции из всех колб берут по 20— 50 мл раствора, переносят эти растворы в колбы Кьельдаля, сжигают с серной кислотой и определяют количество азота. Одновременно в исходном образце определяют содержание общего, белкового и небелкового азота, а также влажность материала. [c.52]

III. Определение белка по содержанию общего азота [c.33]

Образцы муки весом 10—20 г (в зависимости от содержания белков) насыпают в коническую колбу, заливают 100—200 мл боратного буфера (pH 10,0), в который добавляют 0,2% бисульфита натрия, колбу взбалтывают на механической мешалке в течение 1 часа и затем выдерживают 15—18 часов в холодильнике при 0°. Далее содержимое колбы центрифугируют в течение 5— 10 минут при 3—4 тыс. об/мин, жидкость над осадком сливают в мерную колбу емкостью 500 мл, осадок из пробирок переносят в коническую колбу, пробирки смывают буферным раствором, содержащим бисульфит, и в колбу добавляют этот же раствор до объема 100— 120 мл. Колбу взбалтывают в течение 30—40 минут и снова центрифугируют. Раствор белков сливают в ту же мерную колбу. Такую экстракцию повторяют 4—5 раз до исчезновения реакции на белок с реактивом Фолина. Раствор в колбе доводят до 500 мл и из нее берут 20 мл для определения содержания общего азота. При анализах семян злаков в экстракт должно переходить не менее 85%) азота муки, а при анализах семян бобовых и масличных культур — не менее 90—95%. [c.48]

Очень часто при изучении белков не ограничиваются определением лишь общего содержания азота в каждой белковой фракции, а получают препараты соответствующих белков и затем используют их для определения аминокислотного состава. [c.52]

В химии аминокислот используется много других аналитических способов. Определение азота по Къелъдалю дает содержание всего азота в белке или белковом гидролизате. При. этом определении органическое соединение разлагается путем, нагревания со смесью концентрированной серной кислоты и катализаторов, таких, как двуокись селена. Образующиеся аммонийные соли превращаются в аммиак, который отгоняют и титруют. Общее содержание азота заметно меняется в зависимости от характера аминокислот в белке. Количество азота, присутствующего в виде первичных аминогрупп, определяется по методу Ван-Слайка. Неизвестное вещество обрабатывают азотистой кислотой и измеряют объем выделяющегося азота. [c.539]

Между содержанием белкового, общего азота и углеводами существует определенная зависимость. Начиная с фазы трех пар листьев до фазы цветения содержание углеводов резко возрастает, а количество белкового азота снижается. Однако по некоторым формам азотных удобрений такой зависимости между белками и углеводами не наблюдается. [c.152]

Аминокислотный состав белковых фракций семян злаков к настоящему времени довольно хорошо изучен. В таблице 10, составленной по данным Е. Иемма (1958), приведены резз льтаты определений содержания аминокислот в некоторых белках, выделенных из семян. Эти данные показывают, что содержание почти всех аминокислот в отдельных белковых фракциях сильно различается. По своему аминокислотному составу особенно отличаются от других белковых фракций проламины. Эта группа белков характеризуется очень высоким содержанием глутаминовой кислоты и амидного азота. В глиадине пшеницы и гордеине ячменя, например, почти половина от общего содержания азота в белках приходится на долю глутаминовой кислоты и амидов. Амидные группы в белках связаны с глутаминовой кислотой, и, таким образом, в проламинах до половины общего количества азота содержится в виде этих комплексов. Проламины характеризуются также высоким содержанием пролина (до 15% в гордеине ячменя) и очень малым количеством серусодержащих аминокислот и основных аминокислот, особенно лизина. [c.355]

ПРОТЕИНЫ. В биохимии и органической химии под этим термином понимают простые белки. В науке о кормлении с.-х. животных под термином П. (сырой протеин) понимают общее количество азотистых соединений, входящих в органическую часть сухого вещества корма. Его находят путем умножения определенного химическим анализом количества азота на 6,25, допуская при этом, что в сыром П. содержится в среднем 16% азота. Этот пересчет условен, так как содержание азота в разных белках колеблется от 15 до 19%. В сыром П. содержатся белки и азотистые соединения небелкового характера (амиды), питательные достоинства которых ниже белка. [c.248]

Для своих исследований мы брали растения из специально заложенных вегетационных опытов. Растения выращивались на соответствующей питательной смеси в условиях песчаных культур. На той или иной стадии развития под растения вносилась азотная подкормка в виде сульфата аммония, обогащенного тяжелым изотопом азота N . Затем через определенные промежутки времени после внесения азотной подкормки растения убирались, тщательно измельчались (до пастообразного состояния) в фарфоровой ступке к измельченной массе растений добавлялась дистиллированная вода, и полученная суспензия отжималась через чистую, предварительно промытую в горячей воде, марлю. К отжатой массе измельченных растений вновь добавлялась дистиллированная вода, и полученная взвесь вновь отжималась через марлю. Эта операция повторялась 5—6 раз, до тех пор, пока отжимаемый от взвеси раствор не стал совершенно прозрачным и бесцветным. Полученный коллоидальный раствор нагревался на водяной бане при температуре 80—81°. При этих условиях содержащиеся в растворе белки выпадали в хлопьевидный осадок. Коагулированные белки отфильтровывались через взвешенный безводный фильтр, и после сушки в них определялось содержание азота по Кьельдалю. Общее содержание азота в выделенных таким образом белках колебалось в отдельных пробах в пределах И—13%N. Несколько пониженное содержание азота в этих белках, по-видимому, обусловлено наличием в них примесей других веществ, осаждающихся вместе с белками. В освобожденной от белков вытяжке из растений (фильтрат) определялись водорастворимые небелковые органические соединения азота, аммиачный азот, а в отдельных опытах-—и сахара. [c.158]

Определение общего количества белка, альбумина и глобулина в сыворотке крови [7]. Прежде всего определяется общее содержание белка, так как для определения альбумина и глобулина используется определенным образом разбавленный раствор. Осаждение общего белка производится смесью насыщенного раствора сульфата калия и натрия и раствора таннина, содержащего уксусную кислоту. В осадке определяют азот по Кьельдалю. Глобулин осаждают в отдельной пробе сульфатом аммония, а в фильтрате от осадка глобулина—альбумин смесью сульфата калия-натрия и таннина. Последний осадок взвешивают и количество глобулина вычисляют по разности между весом общего белка и альбумина. [c.357]

Определение азота трудоемко и требует особого оборудования, поэтому для количественного определения белка был разработан ряд колориметрических методов. В тех случаях, когда необходимо определить общее содержание белка во многих образцах, обычно применяют методы, в основу которых положены биуретовая и нингидриновая реакции. [c.323]

Определение проводят в водном растворе гидролизата белка. При титровании в 96°-м спирте получают сумму полипептидов и аминокислот, при титровании в 50°-м спирте находят содержание полипептидов. Количество аминокислот определяют по разности первого и второго титрования. Таким образом, можно дифференцировать, до известной степени азот аминокислот и азот полипептидов. Следует учитывать, что в 50°-м спирте при титровании аминокислоты связывают только 28%-й щелочи от общего количества, необходимого для их полной нейтрализации, поэтому при расчете содержания вводится коэффициент [c.381]

В связи с переводом на тетраплоидный уровень многих форм гороха небезынтересно было выяснить наличие возможности и перспектив для селекции тетраплоидов на повышенное содержание белка. Определение содержания общего азота у 22 форм, относящихся к трем хозяйственно-ценным видам, показало, что во всех без исключения случаях у полиплоидов наблюдается возрастание процентного содержания общего белка от незначительного (0,57) до существенного (4,47) (табл. 4). Причем во всех случаях наблюдается достаточно высокая и достоверная степень различий между диплоидами и тетраплоидами по содержанию сырого протеина. Эти различия еще бопее существенны при ont>-ставлении диплоидного и тетраплоидного линейного материала. Некого рые линии тетраплоидов превосходили лучшие дшхлоидные тех же исходных форм на 5,0-5,5 и даже 6,1% сырого белка. [c.205]

Задача определения азота, входящего в состав амидов, содержащихся в физиологических жидкостях (и тканях), отличается от задачи определения содержания амидного азота в молекуле белка. В физиологических жидкостях, вследствие присутствия мочевины, а также других соединений, содержащих азот, метод полного гидролиза исследуемых соединений использован быть не может. Поэтому анализируемый образец подвергают гидролизу в мягких условиях, в результате которого только амиды, входящие в состав образца, превращаются в аммиак. При анализе некоторых жидкостей, например мочи, серьезной помехой является аммиак, поскольку он присутствует в количествах, значительно превосходящих количество амидов, и определяется с помощью любого метода, который может быть использован для определения аммиака, образующегося в результате гидролиза амидов. Борсук и Дубноф [5] в общих чертах описали ультрамикрометод определения амидов. Однако они не привели никаких данных относительно пределов применения этого метода, его надежности, а также воспроизводимости получаемых с его помощью результатов. Исследования этого метода в лаборатории автора показали, что при анализе таких веществ, как аспарагин, глутамин и ацетамид, он дает несколько заниженные и плохо воспроизводимые результаты. [c.209]

Прямые методы. 1. Сырую биомассу определяют после осаждения клеток центрифугированием. После центрифугирования отмытых клеток можно определить сухую массу. Оба метода не свободны от довольно больших систематических ошибок. 2. Гораздо большую точность обеспечивает определение общего азота (метод микро-Кьельдаля и микродиффузионный метод определения аммиака), а также определение общего содержания углерода (по ван Слай-ку-Фолчу). 3. В повседневной практике часто определяют содержание бактериального белка. Хорошие результаты дают модификации биуретового метода и другж колориметрические методы. Микрометоды основаны на измерении количества характерных компонентов белка тирозина, триптофана (по Лоури или Фолину). [c.192]

Методы, основанные на анализе составных частей молекул белка, включают определение элементов азота и углерода, некоторых аминокислот, например тирозина, биуретовой и фор1-мольной группировок. Отдельные белки могут быть иногда определены по специальным группам, например по железу в гемоглобине [2, 3] или иоду в тиро-глобулине. Все эти методы требуют, чтобы определяемая составная часть находилась в испытуемом образце исключительно в белковой части. Поэтому белок должен быть отделен от всех других органических веществ и карбонатов, если он определяется по углеродному составу, и от всех других азотсодержащих составных частей, если основой анализа является метод Кьельдаля. Обычная практика анализа кормов и овощей на белки на основании определения общего азота в этом отношении всегда внушает сомнения. Наличие алкалоидов, аминокислот или других азотсодержащих веществ в таких веществах достаточно вероятно, хотя, как правило, их количества малы по сравнению с содержанием белка. Вследствие изменчивости свойств различных белков нет общих методов их выделения из сложных смесей. В хорошо изученных системах могут применяться специальные методы выделения. [c.15]

Точное вычисление результатов анализа и их выражение в подходящих единицах не менее важны, чем тщательный выбор и выполнение самого экспериментального метода. Контроль полноты возврата общего азота, исходя из известного содержания азота в разных компонентах (см. стр. 133), как описано в классической работе Чибнелла [115], все еще остается лучшей гарантией правильности выполнения анализа белка в целом [6]. Несмотря на это, результаты определения отдельных аминокислот, выраженные в единицах азота, весьма неудобны и могут вводить в заблуждение в случае основных аминокислот. [c.150]

Общее количество азота гликопротеина представляет собой несколько более определенный способ оценки содержания в нем белка, чем реакция с нингидрином. Неопределенность, связанная с количеством общего азота самого белка, несколько меньше, чем в нингидриновом методе. Для белков часто принимают значение 16% азота, что соответствует коэффициенту пересчета азота в белок, равному 6,25. Хотя содержание азота в белках, не связанных с углеводами и липидами, существенно отклоняется от этой средней величины как в одну, так и в другую сторону, крайними значениями, вероятно, являются 15,0 и 18,6% (см. также [118]). Хашимото и Пигман [122] для белковых частей гликопротеинов подчелюстной и нодъязыч- [c.151]

Точные данные о содержании амидного азота в белках необходимы при определении в них общего азота и при изучении вопроса о том, не являются ли различия в содержании амидного азота причиной электрофоретической гетерогенности белков, как это показано для желатина [1] и предполагается для у-глобулина [2]. Для установления тонкой структуры гликопротеинов [3] очень существенно точное онределение амидного азота, но при выполнении такого анализа в этой группе веществ встречаются значительные трудности. Во-первых, при действии кислот, применяемых для освобождения амидного азота в виде аммиака из остатков аспарагиновой и глутаминовой кислот белковой части, будут образовываться, по крайней мере частично, 2-ацетамидо-2-дезоксигексозы. Свободные гексозамины, образующиеся при деацетилпровапии, являются потенциальным источником аммиака в условиях его отгонки из щелочного раствора. Во-вторых, известно, что сиаловые кислоты, обычные компоненты гетеросахаридов гликонротеинов, даже в мягких кислотных условиях расщепляются с выделением части их азота в виде аммиака [4]. [c.159]

Второй метод определения азота разработан в 1883 г. Кьельдалем-, Навеску вещества нагревают с концентрированной серной кислотоГ , обычно с добавкой какого-либо окислителя (КМПО4, НСЮ4), в результате чего вещество разлагается, а содержащийся в нем азот превращается в аммиак и образует сульфат аммония. Раствор разбавляют п после прибавления избытка ш,елочи аммиак отгоняют с водяным паром, пропуская его в титрованный раствор серной кислоты. Титрованием непрореагировавшей кислоты можно определить количество образовавшегося аммиака. Метод Кьельдаля, будучи менее общим, чем метод Дюма, применяется для быстрого анализа веществ с низким содержанием азота, например белков. [c.22]

Количественное определение белков. Для колич. онределения Б. устанавливают общее содержание азота по методу Кьельдаля (см. Ааота определение). Кроме того, используют колориметрич. методы, основанные на различных цветных реакциях Б., напр, биуретовой, а также реакции Лаури, представляющей сочетание биуретовой реакции и реакции Фолина на ароматич. аминокислоты. Концентрации Б. в р-рах можно установить по поглощению в УФ-области спектра, измерением плотности и показателей преломления р-ров. Количественно аминокислотный состав Б. определяют гидролизом Б. и после- [c.193]

НОЙ желез и цервикального гликонротеина вычислили значения от 16,1 до 17,5%. Необходимо вводить большие поправки на азот, содержащийся в других компонентах гликопротеинов, таких, как гексозамины и сиаловые кислоты, и ошибки в определении этих веществ будут понижать точность рассчитанных значений для белка. Общее содержание азота легче всего определять по методу Кьельдаля. Автор нашел, что очень точные результаты дает методика Чибнелла и сотр. [125]. Время разложения можно уменьшить с 8 до 2 час без снижения точности, если заменить сульфат меди в катализирующей смеси на то же (по весу) количество сульфата ртути [118]. При этом необходимо ввести 5% (вес/объем) тиосульфата натрия в 30%-ный (вес/объем) раствор едкого натра, прибавляемый для нейтрализации серной кислоты перед отгонкой аммиака. [c.152]

Сера. Определение так назьшаемой общей серы в пищевых продуктах проводится очень редко (за исключением, конечно, тех случаев, когда соединения серы вводятся в продукт специально). Это объясняется тем, что сера в значительной степени связана с белком и в определенной степени характеризует его содержание. Для многих продуктов отношение белок сера настолько постоянно, что по содержанию серы можно судить о количестве белка, и наоборот. Но исследователи предпочитают судить о содержании белка по азоту, определяемому по Кьельдалю, а не по содержанию серы, которая определяется труднее. Аналитические методы определения серы подробно описаны в, руководстве Кархмера [14]. [c.340]