Белки диализом

Для выделения и очистки белков используются специфические методы химии белка диализ (отделение неорганических солей и низкомолекулярных органических соединений от белков благодаря тому, что белки не проходят через полупроницаемые мембраны из коллодия, целлофана и т. д.), электрофорез, хроматографирование на ионнообменных смолах и молекулярных ситах, лиофильная вакуумная сушка (испарение замерзшей воды в высоком вакууме) и т. д. [c.500]

Работа 93. Очистка белков диализом [c.152]

Доказательством обратимости этого процесса является тот факт, что формальдегид можно удалить из белка диализом или разбавлением, если взаимодействие было кратковременным и происходило при комнатной температуре. [c.70]

Однако в случае глицина >и других аминокислот постулировались также многочисленные другие реакции. Необходимо ясно представлять себе, что приведенные выше реакции в значительной степени обратимы. Об этом свидетельствует тот факт, что формальдегид можно удалить из белков диализом или разбавлением, если взаимодействие с белком было кратковременным и происходило при комнатной температуре. Несвязанный и обратимо связанный формальдегид можно также определить осаждением с помощью димедона (5,5-диметил-1,3-циклогександиона) и последующим взвешиванием осадка. [c.311]

Ионообменная хроматография. Колонку (40x2,5 см), заполненную КМ-целлюлозой (с. 109), уравновешивают 30 мМ К-фосфатным буфером, pH 6,0, содержащим 10 мМ 2-меркаптоэтанол. Пер1 д нанесением на колонку раствор белка диализуют против уравновешивающего буфера до полного удаления сульфата аммония. На колонку можно нанести до 500 мг белка. После нанесения белка колонку промывают уравновешивающим буфером (примерно 75 мл). Для элюции фермента используют линейный градиент концентрации КС1 от О до [c.272]

Очистка белков диализом. Диализом называется освобождение коллоидного раствора, в данном случае белка, от примесей низкомолекулярных соединений (солей) при помощи диффузии и чере непроницаемые для коллоидов мембраны. Для диализа применяют животные и растительные мембраны. Обычно диализ проводят в коллЬ-диевых мешочках или в цилиндре 1 (рис. 12), в котором вместо дна натянут пергамент или целлофан 2, промытый в дистиллированной воде Диализ проводят при температуре О—2° С при более высокой темпе ратуре белковые растворы подвергаются различным изменениям Цилиндр подвешивают на нитках 3 в сосуд 4 с дистиллированной во дой. Кроме того, готовят 10%-ный раствор ВаС12- [c.42]

Приготовление растворов белка. Белки инкубируют при 37 °С в течение двух часов в 0,01 М фосфатном буфере, pH 7 с 1%-ным натрийдодецилсульфатом и с 1%-ным р-меркаптоэтанолом. В случае тропомиозина, парамиозина и миозина белки растворяли в этом буфере в присутствии 8 М мочевины. Концентрация белка выбирается между 0,2 и 0,6 мг/мл. После инкубации растворы белка диализуют несколько часов при комнатной температуре против 500 мл 0,01 М фосфатного буфера pH 7, содержащего 0,1%-ный натрийдодецилсульфат и О, %-ный р-меркапто-этанол. В большинстве случаев этап диализа опускается и белок непосредственно растворяют в диализном буфере. [c.422]

Электрофорез в полиакриламидном геле с ДСН по методу Вебера и Осборна [1379]. Белки инкубируют в течение 2 ч при 37 °С в растворе, содержащем 0,01 М натрий-фосфатный буфер (pH 7,0), 1,% ДСН и 1% 2-меркаптоэтанола если белки проявляют склонность к образованию агрегатов, то к ним добавляют 8 М мочевину. После инкубации белки диализуют в течение нескольких часов при комнатной температуре против 0,01М нат-рий-фосфатного буфера (pH 7,0), содержащего 0,1% ДСН и 0,1% 2-меркаптоэтанола. Электродный буфер 0,1 М натрий-фосфатный буфер (pH 7,0), содержащий 0,1% ДСН. Состав геля 10 /о Т, 2,65% С 0,1 М натрий-фосфатный буфер (pH 7,0) 0,1% ДСН 92 мг /о персульфата аммония, 0,15 мл ТЕМЭД на 100 мл раствора. К каждой пробе добавляют 3 мкл 0,05%-ного раствора бромфенолового синего, 1 каплю глицерина и 5 мкл 2-меркаптоэтанола. [c.226]

Для выделения и очистки белков используются специфические мето-1Ы химии белка диализ (отделение неорганических солей и низкомоле-сулярных органических соединений от белков благодаря тому, что 5елки не проходят через полупроницаемые мембраны из коллодия. [c.381]

В ферменте имеется один или более участков, в которых происходит катализ за счет тесного контакта фермента с субстратом. Молекулярный вес субстрата обычно много меньше, чем молекулярный вес фермента. Активный центр состоит из немногочисленных реактивных групп — боковые цепи некоторых -аминокислот, амидные группы, остовы полипептидной цепи. В состав активных центров некоторых ферментов входят простетиче-ские группы — прочно связанные с белком группы неаминокислотной природы, принимающие непосредственное участие в акте каталитического превращения. Такие группы в целом ряде случаев не могут быть отделены от белка диализом. В состав белков — переносчиков кислорода (цитохрома С, миоглобина и [c.502]

Баррон считает специфичность n-хлормеркурибензоата по отношению к белковым сульфгидрильным группам доказанной, несмотря на (появившееся сообщение о том, что Hg b может реагировать с карбоксильными и аминогруппами белков [7la]. Были получены кристаллические производные нативного яичного альбумина и п-хлормеркурибензоата, содержащие Приблизительно 3 моля ртути на -моль белка. Диализ против избытка цистеина восстанавливает исходный белок [716]. [c.292]

В клетках Е. oli была осуществлена также экспрессия белков, содержащих большое число субъединиц, и осуществлено их выделение из нерастворимых комплексов. Для получения мутантных гемоглобинов осуществляли синтез в клетках Е. соИ Р-глобина в виде гибридного белка р-галактозидаза — р-глобин и выделяли этот белок методом, описанным в разд. 4.3.2.2 [23] (табл. 4.10). После расщепления гибридного белка, диализа и лиофилизации конформацию гемоглобина восстанавливают, используя следующую методику [23]. [c.125]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология