Гемолиз локальный

В 60-х годах были достигнуты важные успехи, открывшие новые пути изучения В-клеток. Первым из ннх была разработка метода локального гемолиза, который позволил идентифицировать и подсчитывать индивидуальные В-клетки, вырабатывающие антитела к определенному антигену. В простейшем варианте этого метода берут лимфоциты (обычно из селезенки) у животного, иммунизированного бараньими эритроцитами (БЭ). Их помещают затем в агар вместе с избытком Ю. В результате на чашке получается газон из иммобилизованных БЭ с вкраплением лимфоцитов. В этих условиях клетки не могут передвигаться, но любые выделяемые В-клеткой антитела будут диффундировать и покрывать поверхность всех БЭ, находящихся поблизости. Такие покрытые антителами эритроциты можно лизировать, добавив комплемент (разд. 17.5). Таким образом, присутствие каждой выделяющей антитела клетки обнаруживается по прозрачному пятну ( бляшке ) в темном слое БЭ. Аналогичный метод можно использовать для подсчета клеток, вырабатывающих антитела к другим антигенам, таким как белки или полисахариды, если присоединить эти антигены к поверхности бараньих эритроцитов. [c.20]

В 60-х годах были достигнуты успехи, открывшие новые пути изучения В-клеток. Первым из них была разработка метода локального гемолиза, [c.229]

Связывание комплемента иммунным комплексом, содержащим эритроциты, нашло широкое применение для обнаружения клеток, синтезирующих антитела. Метод локального гемолиза в геле, предложенный [c.260]

Имеется в виду метод обратного пассивного локального гемолиза эритроцитов, нагруженных белком А. — Прим. ред. [c.261]

Обратный пассивный локальный гемолиз 217 [c.217]

Обратный пассивный локальный гемолиз 219 [c.219]

IV ЛОКАЛЬНЫЙ ГЕМОЛИЗ В ГЕЛЕ [c.222]

Обратный пассивный локальный гемолиз 223- [c.223]

Обратный пассивный локальный гемолиз 225 [c.225]

МЕТОДОМ ЛОКАЛЬНОГО ГЕМОЛИЗА [c.238]

Сравнительное определение числа клеток, образующих антитела (ло данным локального гемолиза) в костномозговой ткани различной локализации у мышей при первичном ответе на липополисахарид и при вторичном ответе на бараньи эритроциты [c.281]

Благодаря специфичности антител к определенному аллотипу иммуноглобулинов метод обратного локального гемолиза позволяет обнаруживать только В-клетки, возникающие из клеток-предшественников мышей BALB/ . Несмотря на это, мы все же исследовали вопрос о том, может ли популяция прикрепившихся клеток костного мозга .AL20 вносить свой вклад в возникновение В-лимфоцитов. В эксперименте, проиллюстрированном на рис. 14-2, клетки-предшественники мышей [c.252]

Клетки из культур или из селезенок иммунизированных лягушек осаждают в течение 30 с при 10 000 g в центрифуге фирмы Eppendorf. Супернатанты сохраняют для анализа на содержание антител. (За 24 ч до проведения анализа методом локального гемолиза культуральную среду в лунках панелей заменяют свежей, чтобы в день определения клетки находились в свежей среде, не содержащей антигена.) Клетки суспендируют в 80 мкл раствора ЗФР, изотонического в отношении клеток. [c.502]

Лизис нагруженных белком А эритроцитов можно использовать при анализе у Xenopus клеток, образующих иммуноглобулины, по описанным в литературе методикам. Для такого анализа, так же как и для обратного локального гемолиза, необходимо определение оптимальных разведений (титрованием) кроличьих антител против иммуноглобулинов Xenopus. Например, нашу антисыворотку для использования в тесте с нагруженными белком А эритроцитами нужно разводить 1 80, а для обратного гемолиза 1 256. Вероятно, антисыворотка обеспечивает более прочное связывание антител низкой аффинности с клетками-мишенями. Ни одни из известных моноклональных антител против IgY не дают присущего кроличьим антисывороткам усиливающего эффекта. [c.503]

Тематика восемнадцати глав настоящего тома в известной мере отражает основные тенденции развития современной иммунологии. В семи главах в центре внимания находятся моноклональные антитела и антигены клеточной поверхности три главы посвящены использованию новейших достижений техники разделения биологических макромолекул и изучения поверхностных явлений в иммунологических взаимодействиях далее описаны новые, усовершенствованные варианты ряда известных экспериментальных подходов (методика гаптенизирова шых антител, выделение и клонирование Т-хелперов, определение хелперных факторов, обратный пассивный локальный гемолиз, метод лимитирующих разведений) в трех главах представлены новые методы клинической иммунологии (типирование HLA DR-антигенов, выявление антител к ДНК, оценка первичного иммунного ответа лимфоцитов человека in vitro). [c.5]

СЕКРЕТИРУЮЩИХ ИММУНОГЛОБУЛИНЫ, МЕТОДОМ ОБРАТНОГО ПАССИВНОГО ЛОКАЛЬНОГО ГЕМОЛИЗА ЭРИТРОЦИТОВ, НАГРУЖЕННЫХ БЕЛКОМ А Staphylo o us aureus [c.214]

Антиглобулнновые сыворотки (кроликов нли других животных, IgG которых связывается с СБА) перед использованием титруют, Чтобы определить оптимальные условия для выявле ния клеток, образующих зоны гемолиза, и проверяют на специфичность в опытах с миеломными или гибридомными Ig-секре-тирующими линиями клеток. Так как эти сыворотки обычно используют для выявления АОК определенного изотипа в реакции непрямого локального гемолиза, простое определение тит- [c.216]

Локальный гемолиз. Нужны камеры Каннингема, состоя щие из двух предметных стекол, соединенных проложенными между ними полосками двухсторонней адгезивной леиты бараньи эритроциты 2,4,6-триинтробензолсульфокислота (ТНСБ) какодилатный буфер с pH 6,8 глицилглицин комплемент морской свиики. [c.228]

В лунки панели ostar вносят по 2,5 мл среды, а затем паиель накрывают стерильной пластинкой со вставками и в каждую вставку вносят по 200 мкл взвеси, содержащей 1,5 10 живых спленоцитов в 1 мл, нужное количество антигена и исследуемый хелперный фактор. Панель накрывают крышкой и культуры помешают на 4 дия в термостат при 37 X во влажную атмосферу с СОд. В конце культивирования содержимое вставок исследуют методом пассивного локального гемолиза по Канинигему и определяют число АОК. [c.237]

Хелперную активность культуральной жидкости можно определить также в Ьмнллилитровых приборах Марбрука. В этом случае во внутреннюю камеру вносят 10 живых клеток селезенки и соответствующее количество аитнгеиа и хелперного фактора. Культуру инкубируют 4 дня и методом пассивного локального гемолиза определяют число АОК- Следует отметить, что число АОК иа культуру в малых (200 мкл) и средних (1 мл) приборах Марбрука получается примерно одинаковым, т. е. помимо явной экономности, малый прибор обеспечивает в 3—5 раз большую эффективность при индукции образования антител. Причины этого пока неясны. [c.237]

ЖИВЫХ снленоцитов в 1 мл, 0,3 мкг/мл ДНФ-KLH и соответствующие разведения хелперного фактора в среде RPMI 1640 с СПК. Панели герметически закрывают в пластиковых коробках, заполненных воздухом с 5% СОг, и помещают на 4 дия в термостат на качающуюся платформу при 37 С. После этого извлекают клетки и определяют число АОК методом пассивного локального гемолиза. [c.238]

Для определения числа клеток, секретирующих 1 М-антите-ла к дииитрофеинльному гаптену, пользуются методом локального гемолиза по Каннингему. [c.238]

В-клеточиый ответ, количественно оцениваемый методом локального гемолиза, необходимо исследовать неоднократно, день за днем, так как только полный кинетический профиль позволяет определить, сколько отвечающих клеток содержится в культуре и возрастает ли их число. [c.247]

Эритроциты осаждают, центрифугируя 10 мнн при 2500 об/мин, дважды отмывают, удаляя лейкоцитарную пленку. Если БЭ используются в качестве индикаторных клеток в локальном гемолизе для отмывания обычно применяют 0,15 М Na I (ФР). Если БЭ предназначены для иммунизации in vitro, то для от.мывдння применяют стерильный раствор Хэнкса. [c.272]

Рис. 4. Число клеток, синтезирующих IgM, IgG, и IgA, в се,1езенке (белые кружочки) и в костном мозгу (черные кружочки) мышей ( 57BLX BA) Fi после внутривенных инъекций бараньих эритроцитов. Мышей прнмировали, вводя 10 БЭ, и повторно иммунизировали через три месяца (4-10 БЭ). Треугольники означают, что превышение числа клеток, образующих IgA, над числом клеток, образующих IgM (выявляемое непрямым методам локального гемолиза), было недостоверным.

Справочник химика 21

Химия и химическая технология