Метод выявления антител

Серологическое исследование. В связи с тем что трахома является локальной инфекцией, серологические методы диагностики имеют второстепенное значение. Для выявления антител в сыворотках больных трахомой можно использовать РСК, РТГА, ИФА, непрямую РИФ. За титр сыворотки (непрямая РИФ) принимают то ее максимальное разведение, при котором видно свечение антигена в элементарных тельцах. [c.247]

Метод выявления неполных антител (проба Кумбса). [c.107]

Отбор моноклональных антител, связывающихся с различными эпитопами на антигене. Для высокоспецифического выявления ряда антигенов наиболее удобной является сэндвич -модификация твердофазного иммуноферментного анализа. Использование в таком типе анализа двух моноклональных антител, взаимодействующих с разными эпитопами, позволяет сократить время анализа. Кроме того, такие пары моноклональных антител в ряде случаев обладают большей авидностью по сравнению с аффинностью каждого отдельного антитела. Для выявления антител, связывающихся с различными центрами на антигене, обычно используют три метода. [c.173]

Наиболее простым и чувствительным способом выявления антител, способных одновременно связываться с антигеном, является тест на аддитивность связывания. Предварительная очистка и введение метки в моноклональные тела в этом случае не нужны. В основе метода лежит оцеНка числа антигенных центров, одновременно доступных для пары антител. Определение осуществляется методом непрямого твердофазного иммуноферментного анализа. Основным условием при этом является полное насыщение антигена обоими типами антител. Поэтому на первой стадии Эксперимента необходимо получить кривые насыщения антигена аСцитиой или культуральной жидкостью, содержащей анализируемые антитела, и затем определить максимальную оптическую плотность в иммуноферментном тесте, достигаемую при насыщении. [c.174]

Люминесцентно-иммунохимические методы дают возможность определять локализацию в клетках и изучать динамику образования антител. Так как получение люминесцентно-меченых антигенов трудно осуществимо (антигены принадлежат к разнообразным классам химических веществ), были предложены непрямые методы выявления антител [4, 15, 16]. Одним из таких методов является следующий. Препарат, содержащий искомое антитело, обрабатывается соответствующим немеченым антигеном после того как произойдет образование комплекса антитело — антиген, этот же препарат обрабатывается люминесцирующим антителом, специфичным по отношению к данному антигену. Образующийся при этом тройной комплекс легко выявляется благодаря интенсивной люминесценции. [c.317]

Методы выявления антител, синтезируемых гибридомными клетками [c.111]

В то же время ясно, что освидетельствование доноров крови (и других тканей и органов) методом выявления антител к ВИЧ не может дать 100%-ной гарантии незараженности крови [c.350]

Серологическое исследование. Для выявления антител в сыворотке крови больных используют PH на мышах. РТГА, РСК, РИФ, ИФА. Указанные методы применяют также для определения уровня иммунитета людей и животных после вакцинации. [c.307]

Чтобы снизить вероятность получения ошибочных результатов, мы советуем исследовать лизат, содержащий гибридные белки, с помощью вестерн-блот-анализа с использованием антител к -галактозидазе (рис. 5.3) —это позволяет детектировать все минорные продукты. Кроме того, все получаемые результаты необходимо сопоставить с анализом нуклеотидной последовательности клонированный ДНК. Для идентификации продуктов клонированных генов можно также использовать вторые антитела, специфичные к антигенным детерминантам, которыми предположительно должен обладать гибридный белок. Поскольку уровень экспрессии гибридных белков высок, мы рекомендуем использовать иммуноферментный метод выявления антигенов с помощью вестерн-блот-анализа (табл. 5.2) ввиду надежности и быстроты этого метода. [c.149]

Высоко специфичным методом выявления грибов в тканях является применение прямой РИФ на основе моноклональных антител, меченных флюорохромом. [c.315]

Иммунологические исследования. Для выявления антител в сыворотке крови применяют серологические реакции — РП, РСК, ИФА и др. В качестве вспомогательных методов диагностики используют аллергические пробы с соответствующими антигенами. [c.324]

Для того чтобы узнать, заражен ли человек ВИЧ, необходимо сделать анализ крови. Известно, что иммунная система реагирует на внедрение патогенов выработкой антител. Образец проверяемой крови смешивают с производимыми сейчас в коммерческих масштабах белками ВИЧ. Если в крови присутствуют антитела против этого вируса, реакция оказывается положительной, а пациента, прошедшего тестирование, называют ВИЧ-положительным. Однако даже при отрицательном результате инфекция не исключена, поскольку достаточное для выявления стандартным методом количество антител иногда накапливается в крови только через три месяца после заражения, а то и позже. [c.216]

ИФА и метод твердофазного РИА — для выявления антител (1 М), которые появляются в сыворотке крови уже в конце инкубационного периода и сохраняются в течение 2—3 месяцев после выздоровления. С середины желтушного периода вырабатываются 1 0, которые сохраняются пожизненно [c.146]

Кроме того, для выявления рецепторов клеточной поверхности применяется метод гибридных антител. Принцип метода состоит в том, что клетки инкубируют с гибридным антителом (специфичным одновременно для антигена клеточной поверхности и для маркера), а затем с маркером благодаря гибридному антителу осуществляется связь маркера с определенным антигенным участком на наружной мембране клетки. Известен еще ряд методов выявления рецепторов клеточной поверхности. Кроме того, часто применяется различное их сочетание, что позволяет выявлять разные типы рецепторов на поверхности клетки. [c.99]

II. Титрование антисывороток с использованием контрольных реагентов (ОРИД). Данный метод наиболее удобен для количественного определения IgG, полученного путем хронической иммунизации лабораторных животных. Такие антитела должны образовывать с антигеном одно кольцо преципитации. Кроме того, метод можно использовать и для повседневного тестирования сывороток пациентов с целью выявления антител к инфекционным агентам. Правда, в ряде случаев чувствительность метода недостаточна. [c.209]

Рис, 4. Сравнение результатов иммуиоферментного и радиоиммунного методов выявления антител к антигенам вируса гепатита В в культуральной жидкости клеток гибридом. Надосадочные жидкости исследовали, кал описана в тексте (пример Б). Один квадрат таблицы содержит результаты анализа одной иадосадочиой жидкости. Цифра — радиоактивность (имп/мин) отражает количество связанных 1-антител кролика к иммуноглобулинам мыши. Плюсы и минусы — оценка реакции в ИФМ (—отрицательная реакция +, + +, -i -i -l- разные степени цветной положительной реакции). Первая колонка— контрольный опыт (без белкового антигена), вторая — негативный контроль (с одной лишь средой) в остальных квадратах — результаты испытания отдельных клонов иа синтез антител к антигенам вируса гепатита В. [c.336]

Для выявления антител применяют реакцию непрямой иммунофлюоресценции (РНИФ). Перспективным является метод вес-тернблота (иммуноблотинга), позволяющий выявить антитела к своеобразному белку наружной мембраны с мол. м. 39 кД. [c.234]

Высокоспецифичным для диагностики ВИЧ-инфекции является метод иммунноблотинга (см. подразд. 1.4.5). При этом проводится электрофоретическое разделение вирусных белков с последующим перенесением их на мембрану из нитроцеллюлозы. Затем мембрана обрабатывается исследуемой сывороткой. Заключительный этап исследования состоит в выявлении антител к различным белкам ВИЧ. Для этого в систему добавляют антивидовые меченые сыворотки. Индикацию образующихся иммунных комплексов проводят с использованием ИФА или РИА. Результаты иммуноблотинга считают положительными при обнаружении антител к определенным вирусным антигенам р24, рЪ1, а также к gpЛ или к gp]20. [c.308]

В наиболее широко используемых методах выявления бактериальных антигенов in situ применяются фракции антисывороток или антител, меченных флуоресцирующими красителями, такими, как флуоресцеин или родамин (разд. 1.4.). Связывание, которое происходит исключительно с поверхностными антигенами интактных бактерий, выявляется с помощью оптической темнопольной микроскопии с ультрафиолетовым светом, прошедшим через соответствующие светофильтры, чтобы вызвать характеристическую эмиссию флуорохрома в видимой области. Этот метод очень важен в диагностических и таксономических исследованиях, и поэтому промышленностью выпускается множество меченых антисывороток. По теории и практике этого вопроса опубликовано много трудов [83—85]. [c.125]

Основными методами скринирования культуральных жидкостей с целью выявления антител к иммунизирующему антигену [c.112]

Рис. I. Схема процедуры слияния клеток. Показаны три этапа, на которых используется иммунофермеитиый метод для выявления антител исследование первичных культур, исследование клонов к определение титра асцитной жидкости.

Известны и более простые методы выявления комплекса антиген— антитело. Например, можно пометить специфичные к антигену антитела, но для этого из соответствующей сыворотки необходимо выделить иммуноглобулины. Модифицируя метод сэндвича, можно использовать меченный или золотом белок А из Staphylo o us aureus, который специфически связывается с иммуноглобулинами. [c.358]

Существует несколько, хорошо зарекомендовавших себя методов выявления Рс-рецепторов. Антитела определенного класса можно использовать для сенсибилизации такого корпускулярного антпгена, как ксеногенные эритроциты. После смешивания избытка сенсибилизированных антителами эритроцитов с лимфоцитами образуются так называемые розетки лимфоциты, окруженные эритроцитами (рис. 50). Число лимфоцитов, образующих розетки, соответствует числу лимфоцитов с Рс-рецепторами к иммуноглобулинам того класса, которые использовали для сенсибилизации эритроцитов. Если пометить иммуноглобулины с помощью флуорохрома, то лимфоциты с Рс-рецепторами можно увидеть по краевому свече- [c.203]

Тематика восемнадцати глав настоящего тома в известной мере отражает основные тенденции развития современной иммунологии. В семи главах в центре внимания находятся моноклональные антитела и антигены клеточной поверхности три главы посвящены использованию новейших достижений техники разделения биологических макромолекул и изучения поверхностных явлений в иммунологических взаимодействиях далее описаны новые, усовершенствованные варианты ряда известных экспериментальных подходов (методика гаптенизирова шых антител, выделение и клонирование Т-хелперов, определение хелперных факторов, обратный пассивный локальный гемолиз, метод лимитирующих разведений) в трех главах представлены новые методы клинической иммунологии (типирование HLA DR-антигенов, выявление антител к ДНК, оценка первичного иммунного ответа лимфоцитов человека in vitro). [c.5]

Для выявления внутриклеточных антигенов клетки обрабатывают фиксаторами, которые до такой степени нарушают структуру поверхностной мембраны, что она становится проницаемой для флуоресцирующих антител. Ниже будет описан метод выявления интрацитоплазматических антигенов в отдельных клетках. [c.177]

Иммунофлуоресцентное окрашивание применяется также для быстрой диагностики вирусных инфекций. Это направление недавно рассмотрено в исчерпывающих обзорах [12, 13], а конкретные методы обнаружения РСВ в клиническом материале описаны в работе Гарднера и др. [14]. Икмунофлуоресценция — более точный метод выявления РСВ в организме больного, чем непосредственное выделение вируса, поскольку в период рекон-валесценции после вызванного РСВ заболевания зараженные клетки бывают покрыты противовирусными антителами. [c.139]

Известны две работы, в которых прямо сравнивают колориметрический и флуориметрический варианты ИФА с использованием одних и тех же методик и реагентов, за исключением субстратов и систем детектирования. В одной из них (Yolken, Stopa, 1979) показано, что при тестировании ротовируса человека в образцах кала флуориметрический метод оказывается в 100 раз более чувствительным, чем РИА или колориметрический ИФА. Во второй работе (АН, АН, 1983) сообщается о 16-кратном повышении чувствительности при переходе от колориметрического к флуориметрическому методу ИФА антител против ДНК, являющихся маркером системной красной волчанки. В обоих случаях выявленные преимущества применения флуориметрии позволили значительно повысить эффективность клинического тестирования. [c.292]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология