Моноклональные антитела маркеры

Иммуноферментный анализ, возникший более пятнадцати лет назад на пересечении иммунохимии и инженерной энзимо-логии, стал в настоящее время одним из распространенных методов исследования. Явные преимущества нового метода, к которым относится простота выполнения, доступность и стабильность реагентов, экспрессность и возможность автоматизации для проведения массовых анализов, обеспечили его прочное положение в клинической биохимии, при диагностике заболеваний растений и животных, в научных исследованиях. Благодаря успехам биотехнологии иммуноферментный анализ далее интенсивно развивался, поскольку с помощью генной инженерии были получены в высокоочищенном виде малодоступные антигены, а также ферменты-маркеры и их конъюгаты с антигенами, а с помощью клеточной инженерии — моноклональные антитела с заданной специфичностью и аффинностью. Новые направления развития иммуноферментного анализа связаны с использованием различных методов регуляции ферментативной активности при детектировании комплексов антиген — антитело. Именно этим вопросам и посвящена предлагаемая книга. [c.5]

Маркер СА125 был обнаружен с помощью моноклональных антител, полученных от мыши, иммунизированной клетками линии карциномы яичников. Было обнаружено, что соответствующий антиген экспрессируется в большинстве случаев карциномы немуцинового эпителия яичников и его определение может быть использовано для диагностики рака яичников. Маркер СА19-9 обнаруживается при гастроинтестинальной аденокарциноме. Антитела к этому маркеру были получены при иммунизации клетками линии карциномы толстой кишки. В на- [c.397]

Липополисахарид (ЛПС). Компонент клеточной стенки грамотрицательных бактерий, который может действовать как В-клеточный митоген. Литический путь активации комплемента. Осуществляется компонентами С5-С9 и ведет к лизису плазматической мембраны клеток. D-Маркеры. Поверхностные молекулы клеточной мембраны лейкоцитов и тромбоцитов, определяемые при помощи моноклональных антител. Могут служить маркерами различных клеточных популяций. [c.560]

Следует отметить наличие антигенов (своеобразных маркеров), характерных для самих Т-клеток. Антигены Т-лимфоцитов идентифицируются при помощи моноклональных антител. В настоящее время установлено несколько десятков такого рода антигенов. Рассмотрим два из них D4, характерный для хелперных клеток, и D8, локализованный в цитотоксических клет-ках-киллерах. Вместе с тем около 5% зрелых Т-клеток несут как D4, так и D8 антигены. [c.477]

С помощью моноклональных антител, специфичных к рецептору для ИЛ-2, антигенам МНС класса II и другим маркерам активации, можно установить также степень активации клеток. Однако пока не выявлены выраженные ассоциации между определенными субпопуляциями лимфоидных клеток и прогнозом развития злокачественной опухоли. Это может быть обусловлено тем, что в действительности лищь небольшая часть инфильтрирующих клеток специфична к опухоли. Предпринят ряд исследований для выяснения функций инфильтрирующих опухоли лимфоцитов in vitro они рассмотрены в следующем разделе. [c.383]

В принципе механизм нейронной специфичности мог бы иметь универсальное значение и повсюду в нервной системе определять, какне клетки должны связаться друг с другом. На практике же (хотя для многих частей нервной системы уже получены убедительные данные в пользу нейронной специфичности) очень трудно точно установить, насколько велика роль такой специфичности в организации всей системы. Недавно, однако, был сделан важный шаг на пути к выяснению молекулярного механизма нейронной специфичности. С помощью моноклональных антител на поверхности клеток сетчатки куриного эмбриона был идентифицирован гликопротеин, который, подобно гипотетической метке нейронной специфичности, позволял определить принадлежность клетки к той или иной области сетчатки. Концентрация этого маркера в сетчатке плавно изменяется-на одном ее полюсе его в 35 раз больше, чем на другом, и он присутствует почти на всех клетках сетчатки. Градиент концентрации маркера можно обнаружить уже на четвертый день эмбрионального развития, и он сохраняется в течение всего периода роста сетчатки. Возможно, что это и есть проявление позиционной метки, которую клетки приобретают уже на ранней стадии развития эмбриона и которая служит впоследствии направляющим фактором при образовании нервных связей. [c.148]

Б. Генетические маркеры и моноклональные антитела [c.424]

Еще одна область применения моноклональных антител связана с диагностикой рака. С использованием гибридомной технологии удалось обнаружить ряд уникальных раковых маркеров, в частности маркеры СА125 и СА19-9 (Корго зк1 е1 а ., [c.397]

Один из подходов получил название метода гибридных антител . Ферментативным гидролизом получают РаЬ-фрагменты молекул антител против определяемого антигена и используемого фермента. Затем смесь продуктов гидролиза подвергают восстановлению меркаптоэтанолом при этом РаЬ-фрагменты обратимо диссоциируют на симметричные части. После удаления восстанавливающего агента молекулы снова ассоциируют, образуя гибридные молекулы антител, специфичные к определяемому антигену и ферменту. При добавлении фермента образуется комплекс антитело—фермент (рис. 19, а). Гибридомная технология открывает принципиально новый путь получения гибридных антител, который заключается в том, что сливаются моноклональные клеткн, специфичные против данного антигена и фермента-маркера, в результате чего образуются гибридомы второго поколения, синтезирующие антитела, с двумя специфичностями (рис. 19. б). [c.112]

Помимо того что моноклональные антитела применяются как специфические реагенты в стандартных тестах, они могут использоваться и для идентификации новых, более специфических маркеров опухолей. Так, Ритсу и его сотр. (Ritz et al., il980) удалось получить моноклональные антитела к антигену клеток при остром лимфолейкозе человека. Были также выде- [c.332]

Иммунометрическне. Вторая группа методов — иммунометрические, основана на принципе сэндвич -анализа. Особенность этих методов заключается в том, что на твердой фазе иммобилизован избыток антител, с которыми проводят инкубацию антигена. После удаления несвязавшихся компонентов в систему добавляют избыток меченых антител, которые взаимодействуют с антигеном. Очевидно, этот метод применим только к поливалентным антигенам (рис. 24, а). Чувствительность и точность иммунометри-ческих методов принципиально существенно выше конкурентных, так как используя избыток антител на твердой фазе, можно адсорбировать из раствора сколь угодно малое количество антигена, а затем избытком меченых антител определить его содержание. Кроме того, в этом случае гораздо менее строгие требования к количеству добавляемых компонентов. Чувствительность иммунометрических методов в большей степени зависит от нижнего предела детекции маркера. Однако на практике предельной чувствительности достигнуть трудно в силу того, что при большом избытке первичных и вторичных антител наблюдается значительная иеспецифическая сорбция, которая фактически и лимитирует чувствительность этих методов. Использование моноклональных антител в иммунометрическом анализе очень эффективно, так как, сорбируя на твердой фазе антитела одной специфичности, а проявляя связавшийся с ними антиген мечеными антителами другой специфичности, удается не только повысить избирательность детекции антигена, но и сократить время анализа (рис. 24,6). [c.118]

Первые опыты по переносу генетического материала осуществляли с помощью слияния целых клеток [1]. Такая техника нашла применение при изучении процессов дифференци-ровки и канцерогенеза, однако наиболее успешно ее использовали при картировании генов человека [2] и получении моноклональных антител [3]. Известно, что сформировавшийся при слиянии клеток грызуна и человека межвидовой гибрид спонтанно теряет человеческие хромосомы [4]. Как правило, утрата хромосом происходит случайным образом, и это позволяет конструировать гибридные линии клеток, в которых содержатся разные хромосомы человека. Корреляция между присутствием конкретной хромосомы человека и экспрессией генетического маркера является основой для отнесения соответствующего гена к определенной группе сцепления. Из 1300 генов человека, картированных на сегодняшний день, примерно треть локализована на конкретных хромосомах с помощью методов генетики соматических клеток [5]. Процесс утраты хромосом у внутривидовых гибридов происходит не так быстро, как у гибридов межвидовых [6]. При слиянии клеток мышиной мие-ломы с клетками селезенки формируются стабильные линии гибридных клеток. Их характеризует иммортальность (способность к неограниченному делению), унаследованная от миелом- [c.8]

Авидин и стрептавидин в качестве меченых зондов. Принципиальная схша этого метода представлена на рис. 5.3. Исследуемый образец инкубировали с высокоаффинными моноклональными антителами, ковалентно связанными с полистирольными шариками диаметром 6,5 мм [19 ]. Затем в систему вводили биоти-нилированные антитела к другим эпитопам антигена. По завершении иммунологической реакции добавляли авидин, меченный ферментом, или содержащий хемилюминесцентную метку стрептавидин. В зависимости от используемого маркера измерение осуществляли спектрофотометрически или по интенсивности люминесценции. [c.68]

Чрезвычайно эффективной альтернативой седиментацион-ным методам разделения клеток является электронная сортировка клеток, меченных моноклональными антителами к поверхностным маркерам [гл. 6]. В качестве примера можно привести исследования Ватта с сотрудниками [И], описавших дифференциальное связывание двух моноклональных антител с кроветворными клетками. При последовательной обработке этими антителами удалось выделить с помощью проточной цитометрии популяцию клеток, на 60% обогащенную эритроид-ными предшественниками. Этот метод обеспечивает получение небольшого количества клетак за короткий промежуток времени по сравнению с методом элютриации. Аппаратура для сортировки клеток требует больших материальных затрат как при приобретении, так и при эксплуатации. [c.168]

Для иммунологических исследований на клеточном уровне важно уметь четко идентифицировать популяции Т- и В-лимфоцитов. Анатомическая и функциональная разобщенность тимуса и фабрициевой сумки у кур позволяет проводить уникальные экспериментальные манипуляции, которые могут быть использованы для получения Т/В-клеточных химер. Цель этих экспериментов состоит в том, чтобы получить животное, у которого иммунная система функционирует нормально, но Т- и В-клетки несут различные маркерные половые хромосомы, легко распознаваемые в препаратах делящихся клеток. Использование некоторых инбредных линий позволяет ввести в эту систему дополнительные маркеры, так как В-клетки донора можно отличить от клеток хозяина по аллоантигенам клеточной поверхности лимфоцитов либо с помощью аллоантисывороток, либо с помощью моноклональных антител. Совершенно очевидно, что использование недавно полученных моноклональных антител к субпопуляциям Т-клеток (Traill et al., 1984) и к клеткам гемопоэтической системы ( hen et al., 1984) в сочетании с упомянутыми химерами может еще более расширить возможности этой и без того весьма ценной модели для изучения онтогенеза и функционирования лимфоидной и гемопоэтической систем птиц. [c.411]

Описанные исследования проводились в течение последних двадцати лет. Разработка гибридомной технологии получения моноклональных антител к поверхностным маркерам лимфоцитов овец позволяет в настоящее время более полно охарактеризовать субпопуляции их лимфоцитов (Miyasaka et al., 1983). Дальнейшие исследования субпопуляций лимфоцитов in vivo [c.444]

Клетка Лангерганса. 1. Эти дендритные клетки составляют 3 % всех клеток эпидермиса. Они экспрессируют ряд поверхностных маркеров, по которым их можно визуализировать. В данном случае срез нормальной кожи окрашен моноклональными антителами к СОТ (второй краситель - гемалум Майера). [c.474]

Особый интерес представляет развитие ГМК у человека. Рассмотрим гистогенез гладкой мышечной ткани сосудов и миометрия, а также сопоставим этот процесс с изменениями лейомиоцитов матки во время беременности, родов и в послеродовом периоде. Анализ экспрессии цитоскелетных и сократительных белков выявил гетерогенность ГМК в сосудах на всех этапах эмбриогенеза человека [Нанаев А.К., 1997]. У эмбрионов в ГМК аорты экспрессируется как мышечный (5М), так и немышечный (NM) типы миозина. В самой незрелой популяции лейомиоцитов преобладают КМ-изоформы, выявляемые моноклональными антителами ЫМ-Р6. Эти данные свидетельствуют, что миозин может быть использован как маркер различных стадий дифференцировки ГМК и характеризовать динамику изменений популяции ГМК сосудов в различных возрастных периодах, а также в условиях патологии. [c.124]

Смотреть страницы где упоминается термин Моноклональные антитела маркеры: [c.120] [c.48] [c.71] [c.14] [c.234] [c.267] [c.412] [c.422] [c.424] [c.367] [c.22] [c.27] [c.288] [c.298] [c.300] [c.354] [c.390] [c.516] [c.147] [c.111]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология