Иммунизация животных

В разделе изложены методы иммунизации животных и гибридизации клеток для получения поликлональных и моноклональных антител, методы получения препаративных количеств антител и их очистки, способы введения ферментных меток в антитела и антигены для использования в иммуноферментном анализе, способы введения радио-изотопных меток в антитела для радиоиммунного анализа, методы изучения антигенных свойств ферментов [c.307]

Для реакции преципитации необходимо иметь специфические антисыАоротки достаточно высокого титра. В лабораторных условиях кролик — наиболее удобный продуцент таких антисывороток. Существует два типа схем иммунизации животных-продуцентов 1) иммунизация без введения адъювантов (вещества, стимулирующие образование антител) и 2) иммунизация с адъювантами. [c.116]

Чрезвычайно широкий спектр применений имеет иммуноанализ для определения как самого факта присутствия, так и измерения количества антигенов, в том числе гаптенов, т.е. низкомолекулярных соединений, к которым можно получить антитела, как правило, путем иммунизации животных конъюгатом гаптена с высокомолекулярным носителем, способным вызывать иммунный ответ. Иммуноанализ нашел широкое применение для анализа содержания различных гормонов, что имеет огромное значение для оценки состояния эндокринной системы человека и животных. Важное значение для оценки состояния окружающей среды, в первую очередь качества питьевой воды и пищевых продуктов, приобретает иммуноанализ содержания пестицидов. В связи с интенсивным развитием гибри-домной техники для анализа определенных антигенов всё более широкое применение находят моноклональные антитела. [c.257]

Если курс иммунизации животного-продуцента не закончился тотальным кровопусканием, то через некоторое время ему можно сделать повторную напоминающую инъекцию антигена в той же дозе и тем же способом, а через 7—9 дней можно взять кровь и получить иммунную сыворотку. [c.119]

Уровень защитного иммунитета, созданного анатоксином, подвергнутым тиолированию, значительно ниже, чем после иммунизации животных невосстановленным токсином. [c.360]

В работах [99-101] для повышения специфичности антител против канцерогенов предложено при получении канцероген-поли-мерного антигена (КПА) использовать в качестве макромолекулярного носителя синтетический полиэлектролит, не имеющий общих детерминант с белками сыворотки крови человека. Иммунизация животных таким антигеном может привести к образованию высокоспецифических антител к канцерогену без появления [c.184]

На новую высшую ступень люминесцентная цитохимия была поднята Кунсом с сотрудниками [4], разработавшими метод люминесцентно-меченых антител. В основном он заключается в следующем. В результате иммунизации животного соответствующим антигеном получают специфическую сыворотку белковые их фракции, в которых преимущественно сосредоточены специфические антитела, обрабатывают флуорохромом и получают комплекс флуорохром — антитело, используемый для обнаружения соответствующего антигена. Наличие и локализация последнего в микроскопическом препарате выявляется в результате реакции антиген — антитело. Продукт этой реакции ярко люминесцирует и с помощью люминесцентного микроскопа может быть открыт даже в отдельных участках клеток [18, 14]. [c.317]

Для целей анализа подбирают такие условия иммунизации животных, при которых образовывались бы антитела с максимальной специфичностью и прочностью связи с антигеном. В зависимости от структуры антигена и поставленной задачи для получения антител используют различные виды животных от мелких лабораторных (мыши, морские свинки, кролики, куры) до крупных (овцы, козы, лошади). После нескольких инъекций антигена в присутствии стимуляторов иммунного ответа в сыворотке крови накапливаются специфические антитела. При иммунизации крупных животных можно получать большие количества антител для практических целей. В последнее время для иммунизации стали использовать кур, у которых антитела накапливаются в желтке яиц, что упрощает их получение и выделение. [c.103]

Высокая специфичность моноклональных антител позволяет создать иммуноферментные диагностику мы для определения антигенов, которые имеются в ограниченных количествах или же недоступны в очищенном состоянии. В таких случаях для иммунизации животных и получения гибридом может быть использован препарат, содержащий около 1 % антигена. Высокоочищенный антиген необходим на стадии тестирования гибридом однако при наличии высокочувствительного метода определения нужные количества антигена исчисляются несколькими микрограммами. После получения гибридомы антиген может быть выделен методом аффинной хроматографии на моноклональных антителах. Полученный в вы-сокоочищенном состоянии в значительных количествах антиген в дальнейшем может быть использован в составе иммуноферментных диагностикумов. [c.170]

Методы экспериментального заражения и иммунизации животных. [c.96]

При иммунизации животных иммунный ответ вырабатывается на все антигенные детерминанты всех компонентов вводимого материала. Это значительно осложняет отбор клонов, продуцирующих антитела к интересующей антигенной детерминанте, так как их доля может быть крайне незначительной. Поэтому по возможности для иммунизации применяют очищенные антигены, по крайней мере на последних этапах иммунизации. Однако одним из основных достоинств гибридомной технологии и является как раз то обстоятельство, что специфические антитела против данного антигена можно получить, взяв для иммунизации неочищенный препарат антигена, и употреблять впоследствии эти антитела для очистки антигена. [c.100]

По ходу иммунизации необходимо определять титр антител к антигену (титр антител — величина, обратная разведению сыворотки, при которой степень иммунологической реакции снижается в два раза по сравнению с максимальной). Обычно это делают перед последней иммунизацией. В опыт отбирают животных с высоким титром антител. Не следует ожидать хороших результатов гибридизации, если при иммунизации животных нет образования антител или они образуются в низком титре. [c.101]

Один из очевидных способов иммунотерапии злокачественного роста основан на принципе специфической стимуляции иммунной системы. В эксперименте иммунизация животных убитыми опухолевыми клетками создает специфическую защиту от живых трансплантируемых клеток. [c.353]

IV. Антисыворотки к иммуноглобулинам мыши и крысы. Для общих целей анти-IgG, получают путем иммунизации животных фракцией IgG, полученной в результате аффинной очистки на колонке с протеинА-сефарозой (разд. 10.6.1). Для удаления антител к другим классам иммуноглобулинов сыворотки сорбируют моноклональными антителами или сывороткой, лишенной IgG. [c.104]

Для выполнения иммунологического анализа необходимо иметь, помимо испытуемой сыворотки, также и антисыворотки, специально полученные путем иммунизации животных различными белковыми фракциями (альбумин, а-, р-, Y глoбyлины и др.) или специфическими белковыми веществами (церулоплазмин, си-дерофилин и др.), — антиальбуминовые, анти-а-, р- или у-сыво-ротки и т. п. [c.241]

В настоящее время разработаны иммунологические методы определения КБА. В этих методах для иммзшологической регистрации КБА, образующихся при появлении в нем канцерогенных веществ, используются антитела, полученные с помощью азопротеинов, содержащих канцерогенное вещество, присоединенное ковалентной связью к носителю белковой природы. При помощи иммунологических методов КБА обнаруживаются в биологических жидкостях в период инициации экспериментального канцерогенеза у животных, у больных с опухолями и у рабочих с профессиональным онкологическим риском. Образование КБА коррелирует с канцерогенезом, и поэтому они могут служить эффективными маркерами рака и онкологического риска. Однако следует отметить, что при иммунизации животных конъюгатами канцерогенов с белковыми носителями неизбежно индуцируются побочные антитела против общевидовых антигенов, что затрудняет интерпретацию результатов определения канцерогенов в биологических материалах. Побочные антитела ограничивают специфичность антисывороток к гаптенам (веществам, к которым вырабатываются антитела в организме), особенно при необходимости их регистрации в крови человека. [c.184]

Едва ли следует подчеркивать, что знание химической структуры О-антигена может иметь большое практическое значение появилась бы возможность приготовить активные анти-О-агглютинины путем иммунизации животных, чего в настоящее время, к сожалению, сделать нельзя. Введение беременным женщинам нетоксичного олигосахарида с высокой О-ак-тивностыо, видимо, позволит нейтрализовать анти-О-вещество, циркулирующее в крови матери и плода, и предупредить развитие гемолитической анемии у ребенка. - - [c.124]

Через 6 недель после иммунизации животные были убиты, и нз клеток лимфатических узлов приготовлялся с помощью центрифугирования, как обычно, препарат рибосом. Затем проводилась реакция рибосом с гантенпой группой, которая на этот раз подвешивалась к бычьему сывороточному альбумину, про-иодированному радиоактивньш изотопом (белок содержал [c.506]

Однако при иммунизации животных участками, изолированными из консервативной зоны полипептида, в организме образуются антитела и против этих малоизменчивых участков белка. Этого не наблюдается при иммунизации цельным вирусом или изолированным белком, содержащим антигенные детерминанты. Механизм этого феномена остается пока неизвестным. Он может быть использован при создании вакцин широкого спектра действия. Антитела против консервативных участков белка оболочки вируса гриппа А и В вызывают нейтрализацию всех этих серотипов. Реализация такого подхода означала бы создание нового типа противовирусных вакцин широкого спектра действия. [c.253]

При малой плотности ангигенных детерминант на поверхности опухолевой клетки присутствие антител с низкой молекулярной массой (IgG) может препятствовать проявлению клеточного иммунитета. Отдельные молекулы IgG, в противоположность большим молекулам IgM, не способны привлечь комплемент, осуществляющий лизис клеток-мишеней, в то же время, занимая антигенные детерминанты, они экранируют клетки как от распознающих лимфоцитов, так и от киллеров. В результате скорость деструкции опухолевых клеток уменьшается, а фактическая скорость роста опухоли увеличивается. Это явление носит название эффекта усиления и особенно сильно проявляется при предварительной иммунизации животных убитыми опухолевыми клетками (см. [3, 6]). [c.123]

Метод получетш таки антител зг.ключ гтся в иммунизации животных так называемыми аналогами переходных сос-ояний субстратов (см. хл.БЧ. Например, для эфиров типа I такими алалогаш служат фосфонаты II [1395] [c.97]

Диагностические эталонные типоспецифические сьшоротк против вщ уса клещевого энцефалита и других арбовщ>усов Получены путем иммунизации животных определенными арбо вирусами или используются сыворотки людей, переболевши соответствующей арбовирусной инфекцией. В каждом случш предварительно устанавливают титр антител. [c.245]

Полностью процедура получения моноклональных антител включает в себя следующие этапы (рис. 43) иммунизация животных, подготовка клеток к слиянию, слияние, отбор продуцирующих специфические антитела клонов, клонирование и реклонирование, массовая наработка гибридомных клеток, получение культуральной жидкости или асцита, содержащих антитела, и выделение этих антител. Обычно вся процедура от момента начала иммунизации до выделения антител занимает 3—4 мес. [c.96]

В процессе иммунизации у животных отбирают небольшие пробы крови для оценки количества антител. Максимальный уровень иммунного ответа на введение большинства растворимых антигенов (белков, полисахаридов и т. д.) достигается через 40—60 дней после первой инъекции. В том случае, когда иммуногеном являются клетки микроорганизмов, максимально высокий уровень антител наблюдается гораздо раньше (через 12—20 дней). После окончания первого цикла иммунизации животному в течение 30 дней дают восстановить здоровье и проводят реиммунизацию (2-й цикл иммунизации), включающую 1—3 внутривенные инъекции. Ниже приводятся схемы иммунизации морских свинок и кроликов инсулином и конъюгатом тироксин — бычий сывороточный альбумин (ВСА). [c.152]

Отбор крови и получение антисыворотки. Иммунизированное животное используется в качестве донора иммунной сыворотки в течение 5—7 мес, за это время удается провести 5—6 циклов иммунизации. Животных, прошедших несколько циклов иммунизации, называют гипериммуиными. Кровь у животных отбирают из вены уха (кролик) или непосредственно из сердца путем кардиальной пункции (кролик, морская свинка) в объеме 50—70 мл у кролика и 5—10 мл у морской свинки в стерильные пробирки, промытые стерильным буферным раствором. [c.153]

Моноклональные антитела синтезируются отдельными клонами гибридных клеток (гиб-ридомами), которые впервые были получены в 1975 г. Келером и Мильштейном в результате соматической гибридизации клеток миеломных опухолей и В-лимфоцитов, продуцирующих антитела после иммунизации животных соответствующим антигеном. К настоящему времени отобраны такие варианты миелом (например, линии Х63-А8.6.5.3, р2/0-А и др), которые не способны синтезировать собственные иммуноглобулины, и вся гибридомная продуктивность выражается и синтезе огромного количества моноклональных антител с интересующёй исследователя специфичностью. [c.164]

Если при получении конъюгатов гаптен-носитель для иммунизации животных стараются пришить 10 молекул гаптена на молекулу белка, то конъюгат гаптен—фермент должен отвечать составу 1 1. Поэтому для синтеза конъюгатов гаптен—фермент в настоящее время в основном используют методы с применением гетеробифункциональных реагентов. [c.192]

Неоднородность антител по физико-химическим свойствам и спеинфичностп служит во многих случаях непреодолимым препятствием для их изучения и применения. В крайне редких случаях при иммунизации животных синтезируются однородные антитела, которые по всем критериям, включая идиотипическую характеристику, являются продуктом только одного клона плазматических клеток и, следовательно, моноклональными. В подавляющем большинстве случаев при им у1у-низации развивается полнклоршльнын ответ. [c.269]

Следующий этап в истории создания чувствительных методов иммунологического анализа связан с открытием Фарром в 1958 г. [13] и Яллоу и Берсоном в 1960 г. [14] технологии мечения антигенов, антител и небольших пептидных гормонов радиоизотопами. Радиоиммунологический анализ позволил определять чрезвычайно малые концентрации (вплоть до пмоль/л) таких молекул, как инсулин, и выдвинул новые специальные требования к технологии получения антисывороток. Для иммунизации животных стали использоваться конъюгаты гаптенов (гормонов) с молекулами-носителями. Именно этим способом удалось получить антитела с такой степенью специфичности и аффинности, какая раньше никогда не требовалась. [c.13]

Валентность молекулы иммуноглобулина или ее фрагмента определяется числом антигенсвязывающих центров. Большинство молекул IgG (преобладающего класса сывороточных антител, образующихся в результате хронической иммунизации животных) имеют два антигенсвязывающих центра, т. е. двухвалентны, и, следовательно, могут образовывать мостик между двумя молекулами антигена. IgM функционально пятивалентен, поэтому он обладает выраженной способностью пре-ципитировать, агглютинировать или лизировать антигены. [c.20]

Для разных целей требуются сыворотки с различными свойствами, поэтому нельзя разработать единый способ иммунизации животных, который бы гарантировал получение продукта, идеально удовлетворяющего всем требованиям. Тем не менее существуют определенные принципы получения антител, которые могут быть приняты за основные правила . Идеальные антисыворотки получают в определенной степени методом проб и ошибок, поскольку каждый иммуноген отличается от других и процесс образования антител у каждого животного имеет свои особенности. Необходимые свойства антисыворотки — это высокий титр в сочетании с высокой средней авид-ностью, а также специфичность. Первые (на которые оказывают влияние различные адъюванты) зависят от достижения баланса между неограниченной стимуляцией антиген-чувстви-тельных клеток в лимфоидных тканях животных при условии персистирования иммуногена, с одной стороны, и от конкуренции между клетками за лимитированное количество антигена таким образом, чтобы отвечали лишь клетки с наибольшей аффинностью,— с другой. Специфичность же критически зависит от чистоты иммувогена, поскольку даже небольшие примеси могут вызвать непропорционально сильное антителообразование. [c.33]

Иммунизация животных эритроцитами барана позволяет лродемонстрировать в учебных целях кинетику и клеточные основы образования IgG и IgM, а также получить практические навыки в постановке реакций агглютинации, обратного гемолиза и титрования гемолизинов. Кроме того, использование эритроцитов, нагруженных антиэритроцитарными антителами определенного изоти па, аллотипа и т. д., лежит в основе реакций гемагглютинации для выявления антиглобулинов как одного из методов специфического тестирования и титрования антиглобулиновых антисывороток. [c.88]

У большинства видов, животных агглютинирующими свойствами обладают как IgQ, так и IgM. Антитела класса М более эффективны в реакции агглютинации, поскольку отличаются высокой валентностью. Прямые и пассивные тесты позволяют количественно (по титрам агглютинации) сравнивать между собой различные сыворотки при условии точной стандартизации условий эксперимента. Некоторые антиэритроцитарные антитела, полученные от человека или экспериментальных животных, слабо агглютинируют либо совсем не агглютинируют эритроциты как в лрямых, так и в пассивных тестах. Причина этого может заключаться в недостаточном количестве либо в малой доступности антигенных детерминант на поверхности клеток. Другая причина — принадлежность исследуемых антител к классу G, которые представляют собой неэффективные агглютинины. Такие антитела можно выявить, связывая их с эритроцитами и используя анти-глобулиновые сыворотки к иммуноглобулиновым детерминантам. Такие сыворотки получают путем иммунизации животных соответствующими антителами. Описанный тест был разработан Кумбсом для обнаружения так называемых непол--шых антител, ж которым относятся, например, IgG человека К резус-антигену. Зта реакция, называемая пробой Кумбса, отличается высокой чувствитель Ностью. Она применяется и в других целях например, если в распоряжении исследователя имеются изотипСпецифические антиглобулийы, то с их помо- [c.240]

В Советском Союзе адсорбированные сыворотки готовят для идентификации дизентерийных бактерий, сальмонелл, холерных и нехолерных вибрионов, бруцелл. Для производства адсорбированных и монорецепторных с вороток подбирают селекционируют штаммы микробов, предназначенные специально для иммунизации животных. [c.124]

Ксеногенная иммунизация животных клонированными популяциями жизнеспособных клеток лимфомы приводит к активации и увеличению числа клеток, способных продуцировать антитела к чужеродным антигенам мышиных лимфом. С помощью соматической гибридизации получают иммортализованные антителосинтезирующие клоны и из них отбирают (тестируя антитела на способность связываться с клетками) только те, которые секретируют антитела против антигенных детерминант клеточных поверхностей. Культуры, которые содержат клетки, продуцирующие МА, клонируют в мягком агаре и подвергают повторному тестированию на способность связываться с клетками большого числа линий, представляющих различные стадии и направления дифференцировки. [c.176]

Антисыворотки к аллоантигенам получают путем иммунизации животных клетками генетически отличающихся особей того же вида. Методика получения антисывороток, описанная в этой главе, вполне применима при работе с обычными линиями инбредных мышей, которые постоянно имеются в продаже и удовлетворяют критериям, перечисленным Клейном (Klein, 1975). [c.219]

Другой подход в приготовлении моноспецифических реагентов состоит в иммунизации животных очищенными HLA-антигенами (Ferrone et al., 1973). Однако получаемые таким способом ксеногенные антисыворотки не свободны от указанных выше недостатков и, кроме того, содержат различные гетерофильные антитела, реагирующие с лимфоцитами человека. [c.237]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология