Изотахофорез капиллярный

Рис. 12.12. Прибор для капиллярного изотахофореза с приспособлением для остановки зон под действием противотока.

После разделения зон методом ИТФ в стационарном состоянии ни длина зон, ни концентрация в зонах не меняются. Если, наряду с этим, существует уверенность, что зоны движутся с постоянной скоростью, имеющееся количество вещества можно оценить, исходя из длины зоны. При этом качественный состав зоны можно оценить по падению потенциала в зоне, количеству выделяющегося тепла, электрическому сопротивлению-или по оптическому поглощению. Установлено, что при постоянной скорости миграции зон через детектор в единицу времени (изотахофорез при постоянном токе) проходит одинаковое число зарядов. В этом случае напряжение в капилляре постепенно-увеличивается пропорционально миграции зоны, а электролит,, содержащий ведущий ион, который вначале заполняет все капиллярное пространство, замещается на мигрирующие зоны образца. После этого ионы замыкающего электролита движутся-с максимальным электрическим сопротивлением, и при этом выделяется максимальное количество джоулева тепла. В ходе этого процесса электрическое сопротивление является величиной,, качественно характеризующей ионы электролита данного состава. Чем ниже электрофоретическая подвижность, тем выше термический сигнал, т. е. тем выше падение потенциала в данной зоне. [c.314]

Рис. 12.13. Регистрация разделения анионов, проводимого методом капиллярного изотахофореза [21].

Сравнение электрофоретической подвижности ионов в водной и метанольной среде с помощью капиллярного изотахофореза [4] [c.316]

Рис. 12.20. Источник питания для капиллярного изотахофореза [101].

РАЗДЕЛЕНИЕ АМИНОКИСЛОТ МЕТОДОМ КАПИЛЛЯРНОГО ИЗОТАХОФОРЕЗА [c.337]

Fe(III) Вода ЭДТА Пред- 25 мМ MES + 10 мМ бис-трис-пропан, pH = 6,6 (первичный 10мМНС1 + 20 мМ L-гистидин + 0,1% НРМС, рн = 6,0 конечный 5 мМ MES) прямое 254 нм 10 ppb Прямой капиллярный изотахофорез, капиллярный зонный электрофорез [c.381]

Изотахофорез. Осн. частью прибора служит капиллярная трубка с анодным и катодным резервуарами на концах. При анализе анионов анодное отделение и капилляр заполняют т. наз. лвдирующим электролитом, содержащим анион с высокой подвижностью. Ср. скорость миграции анионов в этом электролите должна бьп ь вьппе подвижности любого аниона в исследуемой смеси. Катодное отделение заполняют т. наз. замыкающим электролитом, анион к-рого имеет подвижность меньшую, чем подвижность любого др. аниона в смеси. Анализируемый образец, в к-ром нужно определить содержание анионов, вносят между предшествующим и замыкающим электролитами. После подачи напряжения (5-10 кВ) при силе тока до 100 мкА по мере движения анионов к катоду постепенно образуются зоны ивдиввдуальных анионов определенной длины, разделенные четкими границами, ширина к-рых составляет 0,2-0,3 мм при диаметре капилляра 0,1 мм. После этого все зоны будут перемещаться с одинаковой скоростью (отсюда назв. метода). Соотношение концентраций анионов в двух соседних зонах с, и С2 в установившемся режиме будет определяться выражением Кольрауша [c.438]

Наряду с КЗЭ, при котором удается осуществить разделение только за счет разницы в подвижности, и который в настоящее время представляет собой наиболее распространенный метод, выделяют также капиллярный гель электрофорез (КГЭ) с капилляром, заполненным гелем. При этом на электрофоретическую миграцию молекул оказывает влияние матрица геля, и поэтому достигается селективное разделение молекул по размерам. Незаряженные молекулы можно разделять с помощью мицеллярной электрокинетической хроматографии (МЭКХ). В данном случае к буферу добавляется детергент, и нейтральные молекулы распределяются между буфером и мицеллами в соответствии с их гидрофобностью. Разделение основано на подвижности мицелл, заряженных в большинстве случаев отрицательно. Поскольку в основе разделения лежит процесс распределения, можно с полным основанием говорить о хроматографическом методе. При изоэлектрической фокусировке (ИЭФ) происходит разделение в градиенте pH, формируемом добавлением амфолита к буферу в электрическом поле. Небольшое распространение получила пока электрохроматография (ЭХ), при которой применяется стационарная среда ВЭЖХ, а течение эдюента и перенос пробы происходит только за счет электроосмотического потока. В качестве самой старой капиллярной техники следует упомянуть изотахофорез (ИТФ), который в настоящее время вновь приобрел значение для концентрирования проб в КЭ. [c.7]

Изотахофорез малых количеств образца в ряде случаев целесообразнее вести в капилляре без носителя, используя стабилизующее влияние капиллярных сил. Выделяющееся тепло, при малом сечении капилляра легко отводится за счет теплопроводности, а фокусирующее влияние дискретного градиента электрического поля полностью используется в маленьких детекторах. Разрешающая способность детектора зависит от метода детектирования и геометрии капиллярного пространства. На рис. 12.12 показана схема прибора для капиллярного изотахофореза. Изотахофорез в капилляре был впервые проведен Константиновым и Ошурковой [54] в 1963 г. Впоследствии метод был усовершенствован сначала Эвераертсом [20], а затем Мартином и Эвераертсом [64]. [c.312]

Pif . 12.19. Источник стабилизованного тока для капиллярного противоточного изотахофореза [101]. [c.325]

Рис. 12.27. Определение чистоты пептидных фрагментов фибрина, синтезированных твердофазным методом, с помощью капиллярного анионного изотахофореза с термическим детектированием (по данным Копвиллема с сотр. [56]).

Существует три типа электрофоретических систем электрофорез по Тизелиусу (с подвижной границей) зональный электрофорез (например, в среде с капиллярной структурой) стационарный электрофорез (изоэлектрическое фокусирование, изотахофорез). В медицинской и фармацевтической практике чаще применяется зональный электрофорез на фильтровальной бумаге, пленке из ацетатцел-люлозы, агаровом, агарозном, крахмальном или полиакриламидном гелях. Электрофорез белков сыворотки крови ведут в буферной среде с pH 8,6, когда молекулы белка и липопротеинов заряжаются отрицательно и движутся к аноду. После заверщения электрофоретического разделения электрофореграммы фиксируются и окрашиваются. Затем производят визуальную и денситометрическую оценку разделения белков. Для окраски различных белков на электрофоре-граммах используют специальные красители, часть из которых представлена в табл. 5. [c.44]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология